基于伪无菌实验与肠菌移植技术研究气滞证慢传输型便秘模型大鼠肠道菌群对肠道动力的影响

目的运用伪无菌实验与肠菌移植技术,探讨气滞证慢传输型便秘(STC)大鼠的肠道菌群对肠道动力的影响以及二者的关系。方法24只Wistar大鼠随机分为正常组6只、气滞证STC组6只、伪无菌组12只。气滞证STC组采用洛哌丁胺混悬液3 mg/kg灌胃联合夹尾刺激建立气滞证STC大鼠模型,造模成功后分别采集气滞证STC组和正常组大鼠的新鲜粪便制备100 mg/ml粪菌混悬液。伪无菌组采用抗生素鸡尾酒法(给予含杆菌肽、硫酸链霉素、硫酸新霉素各20 mg/ml的混合抗生素混悬液灌胃)建立伪无菌大鼠模型,造模成功后将大鼠随机分为正常粪菌液组、气滞证STC粪菌液组各6只,再分别给予制备的相应大鼠粪菌混悬液10 ml/kg灌胃;气滞证STC组大鼠给予等体积无菌水灌胃,均每日1次、连续7天。比较气滞证STC组、正常粪菌液组、气滞证STC粪菌液组小肠推进率;ELISA法检测血清5-羟色胺(5-HT)水平;免疫组化法检测结肠组织5-羟色胺3受体(5-HT3R)、5-羟色胺4受体(5-HT4R)阳性表达水平;Western blot法检测结肠组织色氨酸羟化酶1(TPH1)、色氨酸羟化酶2(TPH2)、5-羟色胺转运体(SERT)、单胺氧化酶A(MAO-A)蛋白表达水平。结果与正常粪菌液组比较,气滞证STC组、气滞证STC粪菌液组大鼠小肠推进率、血清5-HT水平,结肠组织5-HT3R、5-HT4R阳性表达以及TPH1、TPH2、SERT、MAO-A蛋白表达均降低(P<0.05);气滞证STC组和气滞证STC粪菌液组各项指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论气滞证STC大鼠的肠道菌群紊乱可导致肠道传输功能减慢,其机制可能是通过影响5-HT的合成、转运、代谢等途径而导致肠道动力障碍。

基于伪无菌实验研究芪地通便方对慢传输型便秘小鼠肠道菌群的影响

目的:探索芪地通便方是否通过肠道菌群起到治疗慢传输型便秘(slow transit constipation,STC)的作用,并研究芪地通便方对STC小鼠肠道菌群的影响。方法:实验1将25只BALB/c小鼠分为5组,除空白组外盐酸洛哌丁胺(10 mg/kg)灌胃14 d造模,第15~28天,抗生素组予抗生素混合液自由饮,中药组予芪地通便方(18.906 g/kg)灌胃,中药+抗生素组予芪地通便方灌胃+抗生素混合液自由饮用。通过小鼠一般情况、体重、粪便含水率与数量、小肠推进率、结肠组织学和粪便DNA含量情况评价芪地通便方的疗效以及是否通过肠道菌群发挥作用。实验2将20只BALB/c小鼠分为4组,除空白组外盐酸洛哌丁胺(10 mg/kg)灌胃14 d造模,随后予芪地通便方(18.906 g/kg)和阳性药物乳果糖(3 mg/kg)灌胃干预14 d。通过16S rDNA基因测序探究小鼠肠道菌群的变化。结果:实验1发现抗生素组粪便DNA含量明显降低(P<0.05),证实本研究采用的抗生素混合液方法可有效消耗肠道菌群,成功建立肠道伪无菌小鼠。与模型组比较,中药组粪便含水率与数量、小肠推进率显著提高(P<0.05),而中药+抗生素组在以上2个方面差异无统计学意义(P>0.05),中药组和中药+抗生素组的疗效形成鲜明对比,反向验证了芪地通便方依赖于肠道菌群的存在从而达到治疗STC的作用。实验2发现芪地通便方能够改善STC小鼠的肠道菌群多样性及结构,尤其是能降低厚壁菌门,提高拟杆菌门丰度,降低厚壁菌门/拟杆菌门的比例。结论:芪地通便方治疗STC的疗效依赖于肠道菌群的存在,且该方可以调节STC小鼠肠道菌群。