2020-2022年河南省猪伪狂犬病监测评估

为了解河南省猪伪狂犬病野毒感染情况,持续推进猪伪狂犬病净化工作,河南省动物疫病预防控制中心按照监测方案开展检测,并对2020-2022年数据对比分析,共采集猪血清样品34506份,采集病原学样品10589份,采用ELISA方法检测猪伪狂犬gpI(gE)血清感染抗体,采用荧光PCR方法检测病原学样品,并对检测结果进行统计分析。结果显示:2020-2022年,河南省猪PRV gE抗体的平均个体阳性率分别为20.30%、15.76%、11.01%,平均场群阳性率分别为52.77%、35.35%、27.80%。2020-2022年,种猪场、商品代场、屠宰场平均个体阳性率分别为10.62%、20.10%、16.79%,平均场群阳性率分别为31.72%、45.27%、33.19%。2020-2022年平均个体阳性率和平均场群阳性率由高到低依次为豫中、豫东、豫西、豫南和豫北,平均个体阳性率最高的为22.56%,最低为13.12%,平均场群阳性最高的52.4%,最低为31.4%。2020-2022年平均个体阳性率和场群阳性率均依次降低。可见,河南省猪伪狂犬病野毒感染抗体和病源学阳性率均逐年降低,净化效果明显。

2022年我国部分省份猪瘟猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病流行病学调查

为了解我国不同地区不同生长阶段及不同规模猪场猪群的猪瘟CSF猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪伪狂犬病(PR)流行情况,对2022年收集的6172份血清样品和2301份病原检测样品分别进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及伪狂犬病病毒(PRV)抗体及抗原检测。结果显示:CSFV、PRRSV、PRV-g E抗体阳性率分别为94.15%、63.06%和8.55%,病原检出率分别为0.13%、8.50%和0.80%。育肥场的PRRSV抗原检出率最高,且S/P≥2.5占比最高;5~6胎母猪的PRV-g E抗体阳性率(60.87%)显著高于其他生长阶段猪群(P<0.05)。结果表明:CSF整体免疫防控效果良好,疫情发生风险较低;PRRSV免疫抗体阳性率不高,特别要警惕育肥场13~21周龄育肥猪的PRRSV感染;高胎龄母猪的PRV带毒情况严重,建议做好后备猪的更新与高胎次母猪的淘汰工作,并大力推进PR净化。

3种佐剂对猪口蹄疫-伪狂犬二联基因缺失灭活疫苗的免疫效果评价

为了评价ISA 201、ISA 206和SW 3种佐剂对猪口蹄疫-伪狂犬二联基因缺失灭活疫苗的免疫增强效果,试验采用PCR方法鉴别口蹄疫O/rV-1株+A/rV-2株和伪狂犬RPVS1601-1株是否存在3B基因和gE基因缺失;将口蹄疫O/rV-1株+A/rV-2株和伪狂犬RPVS1601-1株抗原灭活并制成水相,分别与3种佐剂混合制成相应的灭活疫苗,使各抗原最终含量为口蹄疫O/rV-1株和A/rV-2株146S 10μg/头份,伪狂犬RPVS1601-1株1×10^(9)TCLD50/头份。将70只昆明小鼠随机分成ISA 201佐剂组(20只)、ISA 206佐剂组(20只)、SW佐剂组(20只)和PBS对照组(10只),肌肉注射制备的疫苗,首次免疫后2周进行二次免疫,首次免疫后第0,1,2,3,4,5,6周时进行断尾采血,收集血清,用ELISA方法检测白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、γ干扰素(IFN-γ)含量和口蹄疫(O/rV-1型、A/rV-2型)抗体及伪狂犬抗体水平;并在首免2,4,6周时每组随机各取3只小鼠进行眼眶采血,用流式细胞仪检测CD4+和CD8+细胞百分比。结果表明:第3周时,ISA 201佐剂组的小鼠血清IL-2含量最高,显著高于ISA 206佐剂组和SW佐剂组(P<0.05);ISA 201佐剂组IFN-γ含量最高,三个佐剂组之间差异显著(P<0.05)。另外,所有佐剂组的IL-4含量在第2周开始显著高于PBS对照组(P<0.05)。第1~6周,ISA 201佐剂组抗体含量显著高于ISA 206佐剂组和SW佐剂组(P<0.05)。三个佐剂组CD4+/CD8+比值均显著高于PBS对照组(P<0.05),且ISA 201佐剂组的比值显著高于ISA 206佐剂组和SW佐剂组(P<0.05)。说明三种佐剂均能不同程度地提升猪口蹄疫-伪狂犬二联基因缺失灭活疫苗的免疫效果,其中ISA 201佐剂的提升效果最好。

河南某规模化猪场猪伪狂犬抗体检测与分析

为掌握河南某规模化猪场生长群猪伪狂犬病毒(PRV)免疫抗体水平对河南某猪场各个阶段的猪群进行gB和gE抗体水平的检测,随机采集了猪场内从10日龄到200日龄猪只的201个血清样品。结果显示该规模化猪场的猪伪狂犬病病毒gE抗体均为阴性,表明现阶段猪场没有猪伪狂犬野毒的感染;检测35日龄仔猪的gB抗体显示均为阳性,表明此阶段猪只母源抗体水平较好,具有较好保护效果;根据猪伪狂犬母源抗体下降规律,推迟一周,在42日龄进行首免;在对75日龄保育猪只伪狂犬病毒gB抗体检测显示阳性率仅为26.7%,显著下降,此阶段选择了77日龄进行二次免疫;随后,105日龄的gB抗体水平逐渐升高,直到200日龄均能起到良好的保护作用,表明此猪场在42日龄进行首免,77日龄进行二免后,伪狂犬gB抗体逐渐上升,并维持较长时间的高水平抗体,是科学有效的猪伪狂犬免疫程序。

猪伪狂犬病的科学防控

猪伪狂犬病由伪狂犬病毒感染所导致,可感染任何日龄和品种的猪,严重影响养猪业的健康可持续发展。通过阐述猪伪狂犬病的病原、临床症状、病理变化及预防治疗措施,以期为该病的防控提供参考。

猪伪狂犬病实验室诊治及防控措施

目前,从调查数据来看,猪伪狂犬病的发病率依然位居高位。猪场一旦感染该病,会带来较大的损失,值得高度重视。特别是在寒冷季节,发病率非常高,且不同的猪都会有被感染的可能,患猪症状也都不同,若在早期没得到及时治疗,会引发死亡,给猪场造成严重的损失。近两年猪场发生伪狂犬的比率一直呈上升趋势,但大部分猪场无法做出正确判断及预防方案,出现延误治疗,治疗方向错误等情况,导致猪场出现巨大损失。

平顶山市部分规模化猪场猪伪狂犬病毒血清抗体调查

为了准确掌握平顶山市各县区猪伪狂犬病的野毒感染、疫苗免疫效果,本研究对平顶山市不同地区内的8个规模化猪场按相同比例采血后进行抗体检测调查,并对抽检样品结果进行统计分析。结果显示,此次调查PRV-gE抗体阳性的样品有20份,平均野毒感染阳性率为7.27%;PRV-gB抗体阳性的样品有249份,免疫抗体平均阳性率为75.75%。开展本次调查对平顶山市规模化猪场制定合理的伪狂犬免疫方案,使猪群逐步实现净化,具有较好的参考价值。

猪伪狂犬疫苗C株在伪狂犬野毒阳性场的免疫策略与净化思路

伪狂犬野毒株gE阳性猪场,在商品猪育肥过程中经常出现呼吸道疾病反复高发现象,不仅造成育肥期投药成本高,且在继发感染严重时极易出现高死亡率,对规模猪场造成严重经济损失。在本案例中该猪场为伪狂犬野毒株gE阳性,一直免疫传统Barth-K61毒株疫苗,但在120日龄以上商品猪育肥期经常出现呼吸道系统疾病,经检测分析判定为伪狂犬病与传染性胸膜肺炎混合感染,投药效果不理想。2021年11月在育肥区选用美保龙生物伪狂犬C株疫苗与传统Barth-K61毒株作平行对比发现,美保龙伪狂犬C株组157日龄育肥猪有1头gE抗体阳性、1头可疑;传统Barth-K61毒株组141日龄、152日龄育肥猪gE抗体全为阳性。说明美保龙伪狂犬C株疫苗保护时间长,保护期可至育肥后期。该养殖场于2022年开始全面使用美保龙伪狂犬C株疫苗,西育肥区2023年第1季度检测结果显示120日龄以上育肥猪gE抗体均为阴性,东育肥区推迟了免疫时间导致120日龄以上育肥猪gE抗体均为阳性,此案例证明临床伪狂犬防控不仅需要优质的疫苗还需要科学合理的免疫程序,也为该场下一步对伪狂犬全面净化打下坚实基础。

2016—2017年江西省部分地区规模化猪场猪伪狂犬病血清流行病学调查

为了解2016—2017年江西部分地区规模化猪场猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染状况和猪伪狂犬病免疫状况,应用ELISA方法对江西32个规模化猪场1 820份血清开展猪伪狂犬抗体血清学调查。调查结果显示:猪场血清样品PRV gE样品总阳性率为37.4%,场阳性率为65.6%;公猪、母猪、哺乳仔猪、保育仔猪、育肥猪及后备猪的血清样品野毒总阳性率分别为35.8%、44.2%、33.5%、29.2%、48.9%和32.7%;不同地区猪场PRV野毒感染情况不同,九江市野毒感染率最高(52.2%),其次依次为抚州、宜春、南昌、赣州、吉安、新余,上饶; 4个季度的PRV gE阳性率均在30%以上,其中第四季度PRV gE阳性率最高(43%); PRV gB抗体检测结果显示gB抗体阳性率与gE野毒阳性率没有明显的相关性,这也表明较高的gB抗体阳性率并不能说明猪群未受到伪狂犬野毒的感染,结果表明,近年来江西地区规模化猪场猪伪狂犬病野毒感染压力很大,猪伪狂犬病的控制与净化形势严峻。

猪圆环病毒2型感染对伪狂犬疫苗免疫应答的影响

为明确PCV2感染对伪狂犬(PR)疫苗免疫应答的影响,本研究采用阻断ELISA方法对单独接种猪PR疫苗组(A组)及PCV2人工感染3周后接种猪PR疫苗组(PA组)不同时相血清中的猪PR病毒gB抗体进行检测;同时对不同时相前腔静脉血进行CD4+/CD8+流式细胞术及血常规分析。结果表明,在PCV2感染后2周至5周间,A组白细胞含量均高于PA组,随后PA组白细胞恢复至与A组略高的正常水平;在整个实验中,除接种猪PR疫苗后1周(WPI)和9周(WPI)外的所有时相PA组的淋巴细胞含量均略高于A组;PCV2感染后可使记忆/激活Th细胞数量略有升高,幼稚型Th细胞含量的下降;PCV2感染后2周～7周PA组Tc细胞均高于A组,在9WPIPA组Tc细胞数量显著下降(p<0.05);除9WPI外,A组的S/N值均低于PA组。结果表明,PCV2感染看降低机体产生针对PRVgB特异性抗体水平,而且在一定程度上降低了幼稚型Th细胞及Tc细胞含量。

天蚕素抗菌肽对断奶仔猪生长性能和猪瘟及伪狂犬抗体水平的影响

为探明断奶仔猪饲粮中添加天蚕素抗菌肽替代吉他霉素对断奶仔猪生长性能、腹泻和猪瘟及伪狂犬病抗体的影响。选择杜×大×长三元断奶仔猪120头,随机分为2个处理,每处理6个重复,每重复10头猪。对照组饲粮为基础饲粮中添加50%吉他霉素140mg/kg和10%硫酸粘杆菌素540mg/kg,试验组饲粮为对照饲粮用天蚕素抗菌肽(预混料专用型)160mg/kg替代吉他霉素。试验期为44d。结果表明:试验组仔猪平均日增重比对照组提高了4.94%(P>0.05),而料重比和腹泻率比对照组分别降低了5.13%(P<0.05)和18.66%(P>0.05);试验组仔猪血清中猪瘟抗体阻断率、阳性率和合格率分别比对照组高出117.53%(P<0.05)、499.88%和30%,而2组间猪伪狂犬病抗体水平没有差异(P>0.05);试验组仔猪每kg增重饲料成本比对照组降低了0.38元。由此可见,天蚕素抗菌肽替代吉他霉素与硫酸粘杆菌素配伍使用可提高断奶仔猪饲料转化率、猪瘟抗体水平和经济效益。

CpG序列对猪伪狂犬疫苗免疫效果的影响

将 Cp G DNA同猪伪狂犬疫苗联合免疫接种初生仔猪 ,检测仔猪的体液及细胞免疫反应 ,试验结果表明 ,Cp GDNA与猪伪狂犬疫苗共同免疫的仔猪 ,其特异性抗体滴度、淋巴细胞白介素 - 2诱生活性以及淋巴细胞增殖反应均显著高于伪狂犬疫苗免疫组和对照组 ,证明 Cp G DNA能显著增强仔猪对常规疫苗的细胞和体液免疫反应。

闽西地区猪伪狂犬野毒株感染的血清学调查

美国IDEXX公司生产的PRV-gE（gE-ELISA）酶联免疫试剂盒,能对已免疫PR缺失gE的基因工程疫苗或未免疫的猪群,区分疫苗株和野毒株感染。2005～2007上半年,对闽西地区使用gE-基因缺失疫苗的规模化猪场母猪、仔猪和生长猪,不分健康状况,进行PR野毒株感染的血清学调查,结果显示2005年至2006年上半年,该地区母猪PR野毒感染阳性率较高,达41.5%和43.8%,2006年下半年至2007上半年,该地区母猪PR野毒感染阳性率有较大幅度的降低,且阴性猪场很多,阳性率分别是21.3%和13.3%。同时3年来对54个规模化猪场监测结果分析,各猪场阳性率差异很大,3年来猪场阳性率也呈大幅度下降,2007年上半年猪场阳性率仅为33.3%。对仔猪和生长猪的监测结果显示,阳性率比母猪大大降低,并且也呈下降的趋势。

不同日龄猪伪狂犬抗体的检测与分析

应用猪伪狂犬病毒gp I抗体检测试剂盒和猪伪狂犬病毒g B抗体检测试剂盒对某规模猪场的2~22周龄11个阶段的110份血清同时进行上述2种抗体检测,以掌握不同日龄猪伪狂犬野毒的感染情况并制定适合本场的猪伪狂犬的免疫程序。结果显示:该场不同日龄猪伪狂犬gp I抗体全部为阴性,仔猪伪狂犬的母源抗体可以维持到10周以上,说明目前场内采用10周龄进行猪伪狂犬疫苗的免疫接种方法是科学的。

福建省龙岩市规模化猪场伪狂犬野毒感染的血清学调查

为了掌握龙岩市规模化猪场猪伪狂犬野毒感染状况和流行趋势,应用IDEXX的PRV-gE抗体试剂盒,对2007～2009年龙岩市新罗区、连城、上杭、武平、永定、漳平、长汀的规模化猪场进行PR野毒感染血清学调查。结果表明:2007～2009年PRV野毒抗体样品阳性率分别为19.2、17.2、18.0%,猪场阳性率分别为54、65、64.6%,三年来的样品阳性率和猪场阳性率没有明显的变化,依然存在感染压力。PR野毒感染随季节的变化有一定的规律性,在每年1月到2月期间,猪PR野毒抗体阳性率都会大幅上升,夏秋两季PR感染率在一年中总体较高。种猪群是所有调查猪群中PR野毒抗体阳性率中最高的,是猪场伪狂犬野毒的主要来源,饲养密度大的区域PR野毒抗体阳性率较高。本次调查结果对指导规模化猪场猪伪狂犬病的控制与净化具有重要的现实意义。

猪伪狂犬病病毒LAMP可视化检测方法的建立

根据Gen Bank中猪伪狂犬病病毒(PRV)g B基因的保守序列,设计一套特异性引物,在对反应条件进行优化后,建立了PRV环介导等温扩增(LAMP)可视化检测方法。结果显示:该方法能在常规65℃水浴锅中30 min内实现对目的片段的特异性扩增,并且可通过肉眼观察颜色直接判定检测结果 ;该方法具有很高的特异性,与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型等均无交叉反应;该方法的敏感性可达1 fg;将该方法应用于临床样品检测,结果与普通PCR方法一致。研究表明,本研究建立的LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,适合基层PRV感染的快速检测。

一例猪伪狂犬病毒分离和鉴定

伪狂犬病（pseudorabies,PR）是猪疱疹病毒Ⅰ型引起的一种多种家畜感染得的急性传染病。其特征为发热、奇痒及脑脊髓炎．可引起妊娠母猪繁殖障碍、流产、死胎、呼吸症状。新生仔猪除出现神经症状外还可侵害消化系统。临床症状主要表现为腹泻、呕吐、生长不良等。在自然条件下猪、牛、绵羊、犬、猫、兔、鼠等及多种野生动物都能发生感染。试验结果证实猪和鼠类是自然界中病毒的主要贮存宿主．也是引起其他家畜发病的疫源动物。猪既是本病原的原发感染宿主．又是病毒的长期贮存者和排毒者．在伪狂犬病的传播上起着重要作用。河南某猪场发生临床症状相似的传染病。从病猪脑部采集病料．对病毒进行分离鉴定。

猪伪狂犬的防控策略和净化

伪狂犬病(Aujeszky's Disease)是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的多种家畜和野生动物以发热,奇痒(猪除外)及脑脊髓炎为主要特征的一种重要传染病;猪是伪狂犬病毒的自然宿主,可造成种猪繁殖障碍、仔猪早期大量死亡、商品猪生长迟滞,给畜牧业带来巨大损失。世界上主要的养猪国家都已开始实施猪伪狂犬病的控制和净化项目,并在一些国家取得成功;本文就我国猪伪狂犬病的流行状况及研究进展,并借鉴国外的经验,为广大养户提供伪狂犬的防控策略和净化方案。

利用PCR技术对猪伪狂犬疫苗含毒量的评价

为检测猪伪狂犬疫苗含毒量的高低,根据GenBank发表的猪伪狂犬病毒gh基因序列设计一对引物,采用倍比稀释的方法把猪伪狂犬疫苗稀释1倍、10倍、100倍、1 000倍,常规方法提取DNA进行PCR扩增。结果表明,通过琼脂糖凝胶电泳观察条带的明暗来判定疫苗含毒量的高低,筛选出含毒量较高的猪伪狂犬疫苗供养殖场免疫使用。

规模猪场成年公猪伪狂犬野毒感染抗体(gPI抗体)的检测结果初报

应用ELISA方法,对6个规模猪场的成年种公猪进行伪狂犬野毒感染抗体(gPI抗体)的检测,结果发现3个规模猪场的公猪存在猪伪狂犬野毒感染,占抽检猪场的50%。42份抽检血清样本中有11份伪狂犬野毒感染抗体(gPI抗体)呈阳性,阳性率为26.19%,初步表明猪伪狂犬野毒在被检规模猪场及其种公猪群中均有较高的感染。杜洛克、长白猪、大约克三个品种公猪中伪狂犬野毒感染抗体阳性率分别为26.09%、27.27%、25.00%,品种间野毒感染阳性率差异不大。