山羊源伪结核棒状杆菌的分离鉴定及其毒力评价

为了确定齐齐哈尔市某山羊养殖场疑似患有伪结核病病羊的病原及其毒力,试验从不同病羊的皮下脓包中采集脓汁病料3份,通过细菌的分离与纯化、生化鉴定、16S rDNA基因的PCR扩增与序列分析确定病原,并通过致病性试验对分离株的毒力进行评价。结果表明:共得到3株分离株,其菌落形态和生化特性菌与伪结核棒状杆菌相符,分别命名为CP045、CP073、CP969;分离株CP045、CP073、CP969的16S rDNA基因序列与伪结核棒状杆菌参考株的相似性分别高达98.8%、100%、99.8%,进一步确定3株分离株均为伪结核棒状杆菌。注射分离株CP073的3只小鼠中有2只于注射后36~48 h陆续死亡,1只精神极度沉郁、食欲不振;注射分离株CP045、CP969的3只小鼠于注射后5 d内均未见死亡,但状态不佳。注射分离株CP045、CP073、CP969的小鼠肝脏均不同程度出血、肿大,脾脏轻微出血;注射分离株CP073的小鼠皮肤表面有黄色脓汁渗出,皮下有黄白色玉米粒大小的结核样脓肿;注射分离株CP045和CP969的小鼠皮下未见明显脓肿。说明该山羊养殖场疑似患有伪结核病的病羊感染了伪结核棒状杆菌,分离到的3株伪结核棒状杆菌毒力不同,其中分离株CP073可引起小鼠死亡,毒力较分离株CP045、CP969强。

奶山羊伪结核病的流行病学调查及防控技术

奶山羊伪结核病是一种常见的慢性消耗性细菌性疾病,具有较高的发病率,羊感染后可造成较大的经济损失,需尽早发现积极治疗。奶山羊出现伪结核病的概率较高,羊感染后容易出现接触性传播,难以有效彻底清除,对奶山羊的经济价值危害较大。该文对奶山羊伪结核病的流行病学调查及防控技术进行总结分析,旨在为奶山羊伪结核病防控提供一定参考资料依据,进而制定科学的防控方法。

羊伪结核棒状杆菌的分离鉴定及部分生物学特性分析

为明确重庆和贵州部分羊场发生体表淋巴结脓肿病料中伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis,Cp)感染情况及其生物学特征,对山羊体表脓肿样本进行Cp分离鉴定、致病性试验、药敏试验、毒力/耐药基因检测及系统进化分析。结果:从40份样本中分离到23株Cp,分离率达57.5%。毒力基因检测显示,所有Cp分离菌均携带pld、FagA、FagB、OppB、OppD、OppF、SodC、SpaC、pknG、NanH、sigE和cp40基因。药敏试验显示,所分离Cp对头孢拉定、丁胺卡那和多西环素敏感率最高,达95.65%(22/23),其次为青霉素、氨苄西林、四环素、万古霉素和环丙沙星,敏感率为91.30%(21/23),但对呋喃唑酮100%耐药,对新霉素和卡那霉素耐药率为82.61%(19/23)。Cp分离菌中氨基糖苷类耐药基因aph(3′)-IIa和广谱A类β内酰胺酶耐药基因bla TEM-116的检出率分别为0和4.35%。对所有Cp的fusA进行测序并获得GenBank登录号ON969140-ON969162,系统进化分析显示所分离的Cp均聚类到羊生物型(biotype ovis)。本研究证实Cp是引起重庆和贵州部分羊场发生体表淋巴结脓肿的主要病原,并明确其部分生物学特性,为防控该病原提供了参考资料。

山羊伪结核棒状杆菌噬菌体的分离鉴定

为获得有效抗山羊伪结核棒状杆菌感染的生物制剂,根据NCBI登录的伪结核棒状杆菌菌株及棒状杆菌属噬菌体序列信息分别对其时间和地理分布进行统计,并以山羊伪结核棒状杆菌为宿主菌,从陕西有山羊伪结核患病史羊场的环境污水中分离噬菌体,采用双层平板法对该噬菌体进行分离和表征鉴定。结果显示,山羊伪结核棒状杆菌病的发生呈全球性分布,其中以美国与巴西最为严重,美国也是棒状杆菌属噬菌体分离株的主要来源地;分离出的1株噬菌体命名为M2;噬菌体M2呈典型的20面体结构,最佳感染复数为0.1,潜伏期为20 min,裂解周期为60 min,平均裂解量约为690 PFU/cell,表明获得了1株对伪结核棒状杆菌具有裂解作用的噬菌体。研究结果可为山羊伪结核棒状杆菌感染防控提供流行病学数据参考,并可为山羊伪结核棒状杆菌感染的临床治疗提供潜在新方法。

香柠檬精油抗伪结核棒状杆菌作用及机制研究

伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis,Cp)感染可影响家畜尤其是反刍动物羊的生产性能,本文旨在筛选对Cp有抑杀活性的植物精油并研究其作用机制,为Cp感染防控提供参考。通过纸片扩散法从4种植物精油中筛选出能高效抑杀Cp的香柠檬精油(bergamot essential oil, BEO),采用刃天青指示剂微量肉汤稀释法测定BEO对Cp不同菌株的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)。通过体外试验评价BEO对Cp感染J774A.1巨噬细胞的影响。通过测定脏器载菌量、脾抗菌肽基因表达量和存活率综合评价BEO对Cp感染昆明系小鼠的保护作用。采用扫描电镜观察BEO作用后Cp菌体形态变化,并检测BEO作用后Cp的DNA泄漏以及毒力基因表达情况,初步研究BEO抗Cp机制。结果显示:BEO具有较强的抗Cp作用,其MIC为0.78~1.56μL·mL^(-1)。BEO可降低Cp感染小鼠肾、肝和腹水的细菌负荷(P<0.01),上调Cp感染小鼠脾中抗菌肽Cramp、Bpifal 1、mBD2、mBD3和mBD4的mRNA表达水平(P<0.01)。BEO处理可降低Cp对J774A.1巨噬细胞的感染率,提高被Cp感染小鼠的存活率(P<0.05)。BEO处理使Cp细胞膜凹陷,菌体内DNA外渗增加(P<0.05),以及下调毒力基因磷脂酶D(phospholipase D,pld)的表达(P<0.01)。BEO能抑杀Cp,改善Cp对小鼠的感染程度,其机制可能与BEO损伤Cp细胞膜造成DNA泄漏并降低毒力基因pld的mRNA表达,以及促进Cp感染小鼠抗菌肽Cramp、Bpifal 1、mBD2、mBD3和mBD4的表达有关。

一例山羊金黄色葡萄球菌和伪结核棒状杆菌混合感染的调查分析

旨在调查分析广西平果市部分母羊全身各部位出现皮下脓包、影响采食和运动,导致母羊偏瘦的原因。采用细菌分离培养、分子生物学及寄生虫形态学方法对脓液及其粪便进行检测。分离脓液中的金黄色葡萄球菌和伪结核棒状杆菌,检验粪便中的球虫虫卵。药敏试验结果显示,混合菌对青霉素、阿莫西林、环丙沙星、阿米卡星、头孢他啶、多西环素、头孢喹肟、头孢噻呋、泰地罗新、加米霉素、长效阿莫西林和氟苯尼考高度敏感,对卡那霉素中度敏感,对头孢氨苄、链霉素、壮观霉素、恩诺沙星、新霉素、磷霉素、马波沙星、林可霉素及阿奇霉素耐药。通过实验室检测,确诊本次病例为金黄色葡萄球菌、伪结核棒状杆菌和球虫病混合感染。根据以上检测结果,指导养殖场科学合理地制订治疗方案,从而控制病情。

山羊伪结核棒状杆菌病防治体会

伪结核棒状杆菌病是一种人畜共患接触性传染病。某养殖户饲养的山羊中有1只出现干酪样淋巴结炎、脓肿等特征病变,结合显微镜检查初步诊断为伪结核棒状杆菌病。笔者通过局部涂抹红霉素软膏、肌肉注射头孢噻呋钠等治疗,并采取相关措施预防同群山羊接触感染,取得了满意效果。

兔伪结核病的流行病学、临床症状与防治措施

伪结核病是一种由伪结核耶尔森菌引起的人畜共患的慢性消耗性疾病,常见于野生和家养兔子。患病兔通常表现为腹泻、食欲减退直至完全拒食、行为迟缓、体质衰弱及体重逐渐下降等症状。该病菌广泛存在于自然环境中,加之部分兔场(户)卫生条件差、管理不当,容易导致疾病暴发。伪结核病通常在寒冷的冬季和早春流行,夏季较为罕见,疫情多呈零星或局部暴发的形式。

羊伪结核病诊断与防控

羊伪结核病主要是由伪结核棒状杆菌感染而引起羊的一种局部化脓性淋巴结炎,由于外观上与结核病结节相似,故称伪结核病。有时脓肿也见于肺、肝、脾和子宫角等脏器,因脓汁如干酪,故又称干酪样淋巴结炎。

广西黑山羊伪结核棒状杆菌的分离与鉴定

从广西某养殖户发病黑山羊的脓肿脓汁中分离获得1株无荚膜、不形成芽孢的革兰氏阳性球杆菌,该菌在含血液或血清的琼脂培养基上,可生长成直径1 mm左右、干燥、中央凸起、不透明呈灰白色、边缘不整齐、伴有β溶血环的菌落,而在普通培养基上生长不良,在麦康凯琼脂培养基上不能生长。经生化试验、PCR鉴定及测序分析,证实该菌为伪结核棒状杆菌,动物试验证实该菌为致病菌。最后根据药敏试验结果选择敏感抗生素对发病黑山羊进行治疗,并提出综合防控措施。

羊伪结核棒状杆菌的分离鉴定及ELISA检测方法的建立

从疑似山羊干酪性淋巴结炎羊的肩前淋巴结脓肿内分离到 2株菌 ,经鉴定均为羊伪结核棒状杆菌。利用羊伪结核棒状杆菌标准菌株 (ATCC194 10株 )制成外毒素作为检测抗原 ,通过酶标抗体、阳性血清、外毒素抗原最适浓度的选择试验 ,确定适当的抗原、抗体和酶标抗体稀释浓度 ,建立了间接 EL ISA方法用于检测抗体。用建立的 EL ISA方法检测 10 0份待检羊血清 ,其中阳性血清 4份 ,阳性检出率为 4 %。

一起山羊伪结核棒状杆菌感染的诊断

2013年7月,四川省攀枝花某羊场发生淋巴结脓肿,从发病羊脓肿脓汁中无菌采集5份病料,病料接种于含血清的TSA平板上可长成扁平、不透明、干燥、松脆、瓷白色、易推动的菌落。革兰染色、镜检,可见革兰阳性小杆菌。经过PCR扩增及测序分析确定分离所得5株细菌为伪结核棒状杆菌,由此可以确诊该羊场为伪结核棒状杆菌感染。药敏试验结果表明该菌对强力霉素、四环素、氯霉素等药物较敏感,可以选取这些药物对该养殖场羊进行治疗。

一株奶山羊伪结核棒状杆菌的分离与鉴定

为获得陕西某羊场病羊脓包中的病原菌,以无菌采集的病羊颈部脓汁为材料,进行细菌分离培养,鉴定分离菌株的形态特征、培养特性、生化特性,挑取分离菌株进行协同溶血试验(cAMP)和16SrRNA基因的PCR扩增,并对序列进行分析,NJ法构建系统发育树;用分离菌株分别接种Balb/c小鼠和奶山羊;药敏试验鉴定分离株的耐药性。结果显示,分离菌株的形态特征、培养特性、生化特性与伯杰细菌鉴定手册所述伪结核棒状杆菌特性一致;测序显示分离菌株与GenBank中已收录伪结核棒状杆菌相似性达97%以上;Balb/c小鼠致病性试验和奶山羊动物回归试验表明分离株有强致病性;药敏试验表明分离菌株对红霉素、环丙沙星、克拉霉素、强力霉素、四环素、头孢唑啉、新霉素、氧氟沙星等多种抗生素敏感,对复方新诺明耐药。

伪结核棒状杆菌的分离鉴定及病原性研究

从疑似羊干酪性淋巴结炎的肩前淋巴结脓肿中分离到1株细菌,经革兰氏染色为无芽孢的阳性棒状杆菌;伪结核棒状杆菌特异性引物进行PCR扩增测序表明,该细菌的序列与伪结核棒状杆菌同源性达99.0%以上,确定其为伪结核棒状杆菌。用15种常用抗生素纸片进行药敏试验,结果显示,该菌对青霉素、头孢曲松、左氧氟沙星和氟苯尼考高度敏感;对链霉素、丁胺卡那霉素、环丙沙星、林可霉素和大观霉素耐药。致病性试验发现,腹腔注射小白鼠的半数致死量为1×10-6.0CFU/m L;皮下注射小白鼠2 d后出现大小不等的脓肿;分别用2×108、2×106CFU/m L 2种剂量皮下注射羊后出现体温持续升高,接种部位和周边的浅表淋巴结出现脓肿,切开后有干酪样脓汁,并从病变器官和脓汁中分离到细菌。组织病理学观察显示,皮肤和肌肉层有坏死灶及肉芽肿形成,肌纤维断裂坏死,淋巴细胞浸润,淋巴结出现化脓灶,并有大量上皮样细胞和成纤维细胞增生。本研究为伪结核棒状杆菌疫苗研制及致病机理研究奠定了基础。

羊伪结核抗体间接ELISA检测方法的建立

【目的】建立羊伪结核棒状杆菌抗体的间接ELISA检测方法。【方法】分别用不同浓度的伪结核棒状杆菌菌体抗原和培养上清可溶性抗原包被酶标板,用脱脂奶粉封闭酶标板,设置封闭时间分别为1.0,1.5和2h,再用不同稀释度的血清(1∶100,1∶200,1∶400和1∶800)与之反应,以此优化间接ELISA反应条件,确定阳性结果判定的临界值。对间接ELISA方法的特异性和重复性进行考察,并在此基础上对采集的临床样本进行检测。【结果】选用伪结核棒状杆菌菌体为包被抗原,最佳包被抗原菌体密度为OD600=0.08,血清的最佳稀释度为1∶400,封闭时间为2h,阳性血清的临界值为0.329。该抗体检测方法可特异性地检测出伪结核阳性血清,羊口疮阳性血清、羊痘阳性血清、乳房炎阳性血清均呈阴性反应;组内,组间变异系数<10%。该方法对临床样本的检测结果与实际患病状况一致。【结论】成功建立了伪结核抗体间接ELISA检测方法,该方法特异性强、重复性好,可用于临床诊断和批量血清学检测。

山羊感染伪结核棒状杆菌病的诊断

贵州某羊场山羊群患有以淋巴结肿大、化脓为主要特征的疾病,疑似山羊伪结核棒状杆菌病。从10只患病羊的淋巴结脓肿中分离得到10株病原菌,经对该病原菌进行病原形态、培养特性、生化特性及致病性等鉴定,结果该病菌为致病性伪结核棒状杆菌,该病确诊为山羊伪结核棒状杆菌病。

伪结核棒状杆菌毒力因子的研究进展

人兽共患病原伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis)引起的慢性传染病干酪样淋巴结炎杆菌(Caseous lymphadenitis,CLA)呈全世界流行,极难防制。该病原感染致病的机理与其毒力因子密切相关,本文就伪结核棒状毒力因子研究情况进行综述,提出进一步鉴定和解析不同毒力因子在该病原感染致病中的作用及相互关系,对深入了解该病原的致病机制和候选疫苗研究具有重要的指导意义。

山羊伪结核棒状杆菌的分离鉴定

从福建省不同羊场的山羊颈肩部淋巴结脓肿处分离到5株无荚膜、不形成芽孢的革兰氏阳性球杆菌，该菌在含血清的琼脂培养基上，可生长成直径1-2 mm、干燥、中央凸起、不透明、边缘不整齐、伴有β溶血环的菌落，而在普通培养基上生长不良，在麦康凯琼脂培养基上不能生长。根据其形态学、培养特性、生化特性及致病性试验和动物回归试验结果，判定所分离的5株菌为山羊伪结核棒状杆菌。

山羊伪结核病的诊断与防治

山羊伪结核病是一种接触性、慢性＂人畜共患＂传染病,在养羊生产上主要以山羊皮下淋巴结肿大、化脓、干酪样坏死为主要临床病理特征,又被称为＂山羊皮下淋巴脓肿＂。山羊伪结核棒状杆菌是该病的主要致病源,长期寄存于土壤、肠道内和皮肤上,主要经局部组织创伤感染。