真核生物胞质伴侣素6A在非小细胞肺癌中的异常表达及临床意义

目的评估真核生物胞质伴侣素6A(CCT6A)在非小细胞肺癌(NSCLC)癌组织中的表达情况,并探讨其与NSCLC患者临床病理特征和预后的关联。方法回顾性纳入160例接受手术切除治疗的NSCLC患者,收集其临床病历资料及随访信息。收集所有患者的手术切除样本(包括160例癌组织样本及50例癌旁组织样本),采用免疫组织化学染色检测CCT6A表达水平。比较不同临床病理特征的NSCLC患者癌组织中CCT6A表达水平的差异。根据CCT6A表达水平将患者分为低表达组(n=70)和高表达组(n=90),通过生存分析和多因素Cox回归分析探讨CCT6A表达与预后的关系。结果CCT6A主要表达于细胞质和细胞膜,其在癌组织中的表达水平高于癌旁组织[(4.8±2.9)分vs(2.5±1.7)分,P<0.01]。癌组织中CCT6A表达水平与NSCLC患者的年龄、性别、吸烟史、饮酒史、高血压病史、高脂血症史、糖尿病史、肿瘤大小、肿瘤病理类型、TNM分期等临床病理特征无关(P均>0.05),但东部肿瘤协作组体力状态(ECOGPS)评分高、肿瘤分化差、有淋巴结转移的患者癌组织中CCT6A表达水平分别高于ECOG PS评分低、肿瘤分化好、无淋巴结转移的患者(P均<0.05)。癌组织CCT6A高表达组患者的无病生存期和总生存期均短于癌组织CCT6A低表达组(P均<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,癌组织CCT6A高表达是无病生存期差的独立预测因素(P=0.001),但不是总生存期的独立预测因素。结论CCT6A在NSCLC组织中高表达,其高表达与NSCLC患者肿瘤分化差、淋巴结转移、ECOGPS评分高有关,并且可预测复发风险。

腾冲嗜酸热两面菌伴侣素ATcpnβ底物结合特性研究

嗜酸嗜热古菌腾冲嗜酸热两面菌(Acidianus tengchongensis)来源的Ⅱ型伴侣素ATcpnβ已获得晶体结构解析,其顶端结构域突触下端相应于Ⅰ型伴侣素GroEL的重要底物结合位点处的氨基酸多为极性氨基酸,将其突变为疏水性氨基酸时,突变体对变性底物的捕获能力显著增强.表面等离子共振研究表明,ATcpnβ对于化学变性底物的再折叠中间体的其捕获作用不依赖于Mg2+/ATP.前期对该伴侣素冷冻电镜观察和结构解析表明,ATP的存在并不能驱动ATcpnβ从开放构型向闭合构型转变,但是表面等离子共振研究表明,ATcpnβ对热变性过程中已经聚集的底物的捕获作用依赖于Mg2+/ATP,说明Mg2+/ATP可以介导ATcpnβ顶端结构域一定的构象变化,引起顶端结构域疏水残基的进一步暴露,从而能够与大分子聚集体紧密结合.两个方面的研究均表明,伴侣素蛋白与变性底物的结合仍然以疏水相互作用为主,并且伴侣素蛋白与变性底物的结合受Mg2+/ATP的结合调控,与伴侣素蛋白疏水面的暴露程度相关.

伴侣素包含T复合蛋白1ε亚基(CCT5)是与人γδT细胞相关的自身抗原

目的探讨CCT5与γδT细胞及自身免疫病的关系。方法 PCR扩增人CCT5的基因,表达并纯化CCT5重组蛋白;用3条CCT5蛋白的肽段免疫小鼠,制备并筛选抗CCT5的单克隆抗体;固相化CCT5重组蛋白,体外扩增人外周血单个核细胞中的γδT细胞;用制备的单抗通过ELISA检测正常人、类风湿性关节炎(RA)及系统性红斑狼疮(SLE)患者血浆中CCT5蛋白的含量;用流式细胞技术分析不同亚型γδT细胞的比例,并与血浆CCT5含量做相关性分析。结果 PCR扩增获得CCT5基因,目的片段长度为1 750 bp;经SDS-PAGE分析可见重组CCT5蛋白分子质量约为65 ku,并获得了纯化。通过筛选,获得两株抗CCT5单克隆抗体对。重组CCT5蛋白能在体外扩增外周血γδT细胞;而血浆CCT5浓度与Vγ9和Vδ2 T细胞的比例呈显著正相关。在RA及SLE患者血浆中,可溶性CCT5的浓度显著低于正常对照(P<0.05)。结论 CCT5是与人Vγ9δ2γδT细胞识别的相关自身抗原,有助于我们深入了解Vγ9δ2γδT细胞在自身免疫病中的作用。

伴侣素CCT的结构及与肌动蛋白、微管蛋白的作用机制

CCT是所有真核生物胞浆内共存的唯一一个伴侣素 (chaperonin) ,具有复杂的结构 ,与I型伴侣素有着不同的作用机制。CCT主动参与肌动蛋白和微管蛋白的折叠和组装。

遗传发育所发现叶绿体分子伴侣素不同亚基顶端区的功能分化分工

Cpn60(叶绿体分子伴侣素)作为叶绿体定位的重要分子伴侣,还参与其他蛋白的折叠,对不同底物的结合或折叠处于动态平衡中。Cpn60的顶端区位于桶状结构的顶部,负责对蛋白底物和辅伴侣的识别和互作。Cpn60如何实现不同底物间的结合-折叠平衡是个由来已久的科学问题。

牛卵形巴贝斯虫伴侣素CCT_η基因的克隆与生物信息学分析

对牛卵形巴贝斯虫延边株的伴侣素CCTη基因进行分子克隆,并利用生物信息学软件对CCTη基因进行了同源性、系统进化树、编码蛋白等电点、信号肽、跨膜区、糖基化位点及疏水性分析。结果显示,克隆的CCTη基因由1 008个核苷酸组成,其中编码335个氨基酸。与GenBank上发表的牛卵形巴贝斯虫CCTη基因序列(AB367928.1)同源性100%。CCTη基因编码蛋白等电点为7.32,不存在信号肽结构、跨膜区及糖基化位点。疏水性最大值3.38,最小值-3.79。本研究从CCTη基因方面近一步证实了该分离株的分子分类。

伴侣素的发现者——霍维茨

伴侣素(chaperonin)是辅助蛋白质正确折叠过程中的重要元件,可有效防止蛋白质错误折叠和聚集,对细胞正常功能发挥和发育具有十分重要的意义。伴侣素功能缺陷或异常可导致许多神经退行性疾病如帕金森综合症等的发生,因此伴侣素介导的蛋白质折叠的研究对该类疾病的治疗具有重要帮助。伴侣素于1989年由霍维茨发现,经过近20年研究,人们对其作用机理和生理功能有了较为全面的理解,从而为应用奠定了基础。

真核细胞伴侣素CCT及其与细胞骨架的关系

CCT(the chaperonin containing tailless complex polypeptide 1)是一种广泛存在于细胞浆中的异型寡聚蛋白,也是迄今为止真核细胞胞浆中发现的唯一伴侣素。目前认为大约15%的哺乳动物蛋白折叠需要CCT的参与,其中研究得最多的是肌动蛋白和微管蛋白。研究发现,CCT的异常会导致细胞骨架蛋白发生改变,甚至影响细胞骨架的形成与解聚。由此推测,一些细胞骨架相关疾病可能与CCT异常有关。

CCT在大鼠关节纤维化中的表达及其意义

目的探讨含t复合多肽伴侣素亚基(CCT)在大鼠关节纤维化中的表达及其意义。方法取12只成年SD大鼠(雌性)的右下肢为固定组,左下肢为对照组,固定组建立大鼠关节纤维化模型,检测2组关节活动度以及成纤维细胞的迁移能力与增殖活力,用蛋白免疫印迹法、实时荧光定量PCR法检测2组细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-1)以及CCT家族各亚基的蛋白和基因表达情况。结果与对照组比较,固定组关节活动度较低,细胞迁移能力和增殖活力较强,细胞α-SMA、COL-1蛋白和基因的表达量较高,CCT-6b蛋白和基因表达均较低,CCT-1、CCT-2、CCT-4、CCT-6a、CCT-7蛋白表达较高,CCT-1、CCT-2、CCT-4、CCT-6a基因表达较高(P均<0.05)。结论 CCT可能参与了关节纤维化的发生,其中CCT-6b亚基表达的下调提示其可能具有抗纤维化的作用。

介导新生肽链折叠的胞质分子伴侣结构、功能及作用机制研究进展

分子伴侣是一类能够识别非天然蛋白并能协助其正确折叠、组装和转运的功能蛋白。最新研究发现,在原核或真核细胞中,不同结构、不同种类的分子伴侣形成了一个复杂的折叠系统,通过这个系统,蛋白质完成了从初步合成到形成具有生物活性的三维构象的过程,避免了折叠过程中多肽链的错误折叠、蛋白沉淀和有害物质的产生。文章综述了蛋白质折叠过程中不同种类分子伴侣组件的结构、功能和作用机制的研究进展,这些分子伴侣包括Hsp70、核糖体结合因子、伴侣素、前折叠素与Hsp90,并阐述了它们在蛋白质内稳态中的作用。

早孕因子的研究进展

早孕因子(Early pregnancy factor,EPF)是一种具有免疫抑制和生长因子特性的分泌性蛋白质,在受精后的孕血清及某些恶性肿瘤患者血清中均能检测到。EPF与伴侣素10(Chaperonin 10,Cpn10)是同源的。EPF首先通过玫瑰花结抑制试验在哺乳动物的孕血清中被发现。EPF单克隆抗体在妊娠诊断、肿瘤诊断和治疗等方面均有广阔的应用潜力。本文就EPF的来源、化学结构和生化特性、分离纯化及检测、作用及应用等研究进展作一综述。