真核生物胞质伴侣素6A在非小细胞肺癌中的异常表达及临床意义

目的评估真核生物胞质伴侣素6A(CCT6A)在非小细胞肺癌(NSCLC)癌组织中的表达情况,并探讨其与NSCLC患者临床病理特征和预后的关联。方法回顾性纳入160例接受手术切除治疗的NSCLC患者,收集其临床病历资料及随访信息。收集所有患者的手术切除样本(包括160例癌组织样本及50例癌旁组织样本),采用免疫组织化学染色检测CCT6A表达水平。比较不同临床病理特征的NSCLC患者癌组织中CCT6A表达水平的差异。根据CCT6A表达水平将患者分为低表达组(n=70)和高表达组(n=90),通过生存分析和多因素Cox回归分析探讨CCT6A表达与预后的关系。结果CCT6A主要表达于细胞质和细胞膜,其在癌组织中的表达水平高于癌旁组织[(4.8±2.9)分vs(2.5±1.7)分,P<0.01]。癌组织中CCT6A表达水平与NSCLC患者的年龄、性别、吸烟史、饮酒史、高血压病史、高脂血症史、糖尿病史、肿瘤大小、肿瘤病理类型、TNM分期等临床病理特征无关(P均>0.05),但东部肿瘤协作组体力状态(ECOGPS)评分高、肿瘤分化差、有淋巴结转移的患者癌组织中CCT6A表达水平分别高于ECOG PS评分低、肿瘤分化好、无淋巴结转移的患者(P均<0.05)。癌组织CCT6A高表达组患者的无病生存期和总生存期均短于癌组织CCT6A低表达组(P均<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,癌组织CCT6A高表达是无病生存期差的独立预测因素(P=0.001),但不是总生存期的独立预测因素。结论CCT6A在NSCLC组织中高表达,其高表达与NSCLC患者肿瘤分化差、淋巴结转移、ECOGPS评分高有关,并且可预测复发风险。

伴侣动物源细菌质粒介导的黏菌素耐药机制研究进展

临床应用中,抗菌药物不合理使用导致细菌很容易产生耐药性甚至多重耐药性。由于碳青霉烯类药物的耐药性不断上升,黏菌素被视为对抗多重耐药菌的最后一道防线。然而,宠物和人类中已出现质粒介导的新型移动黏菌素抗性基因,产生的获得性耐药菌株将严重影响黏菌素的疗效,增大耐药基因跨物种传播的风险,给公共卫生造成重大威胁。论文从目前黏菌素的使用情况、耐药性形成和传播机制以及黏菌素耐药菌流行现状等几方面进行综述,以期为伴侣动物临床用药和耐药性转移的风险评估提供参考。

腾冲嗜酸热两面菌伴侣素ATcpnβ底物结合特性研究

嗜酸嗜热古菌腾冲嗜酸热两面菌(Acidianus tengchongensis)来源的Ⅱ型伴侣素ATcpnβ已获得晶体结构解析,其顶端结构域突触下端相应于Ⅰ型伴侣素GroEL的重要底物结合位点处的氨基酸多为极性氨基酸,将其突变为疏水性氨基酸时,突变体对变性底物的捕获能力显著增强.表面等离子共振研究表明,ATcpnβ对于化学变性底物的再折叠中间体的其捕获作用不依赖于Mg2+/ATP.前期对该伴侣素冷冻电镜观察和结构解析表明,ATP的存在并不能驱动ATcpnβ从开放构型向闭合构型转变,但是表面等离子共振研究表明,ATcpnβ对热变性过程中已经聚集的底物的捕获作用依赖于Mg2+/ATP,说明Mg2+/ATP可以介导ATcpnβ顶端结构域一定的构象变化,引起顶端结构域疏水残基的进一步暴露,从而能够与大分子聚集体紧密结合.两个方面的研究均表明,伴侣素蛋白与变性底物的结合仍然以疏水相互作用为主,并且伴侣素蛋白与变性底物的结合受Mg2+/ATP的结合调控,与伴侣素蛋白疏水面的暴露程度相关.

伴侣素CCT的结构及与肌动蛋白、微管蛋白的作用机制

CCT是所有真核生物胞浆内共存的唯一一个伴侣素 (chaperonin) ,具有复杂的结构 ,与I型伴侣素有着不同的作用机制。CCT主动参与肌动蛋白和微管蛋白的折叠和组装。

伴侣素包含T复合蛋白1ε亚基(CCT5)是与人γδT细胞相关的自身抗原

目的探讨CCT5与γδT细胞及自身免疫病的关系。方法 PCR扩增人CCT5的基因,表达并纯化CCT5重组蛋白;用3条CCT5蛋白的肽段免疫小鼠,制备并筛选抗CCT5的单克隆抗体;固相化CCT5重组蛋白,体外扩增人外周血单个核细胞中的γδT细胞;用制备的单抗通过ELISA检测正常人、类风湿性关节炎(RA)及系统性红斑狼疮(SLE)患者血浆中CCT5蛋白的含量;用流式细胞技术分析不同亚型γδT细胞的比例,并与血浆CCT5含量做相关性分析。结果 PCR扩增获得CCT5基因,目的片段长度为1 750 bp;经SDS-PAGE分析可见重组CCT5蛋白分子质量约为65 ku,并获得了纯化。通过筛选,获得两株抗CCT5单克隆抗体对。重组CCT5蛋白能在体外扩增外周血γδT细胞;而血浆CCT5浓度与Vγ9和Vδ2 T细胞的比例呈显著正相关。在RA及SLE患者血浆中,可溶性CCT5的浓度显著低于正常对照(P<0.05)。结论 CCT5是与人Vγ9δ2γδT细胞识别的相关自身抗原,有助于我们深入了解Vγ9δ2γδT细胞在自身免疫病中的作用。

用发光法测定DnaJ类分子伴侣MRJ对虫荧光素酶体外重折叠的促进作用(英文)

蛋白质的折叠使新翻译合成的多肽变成有生物功能的空间结构 ,因此蛋白质折叠是后基因组时代的重要工作。而在蛋白质折叠过程中 ,必须依靠分子伴侣的相互作用 ,才能保证蛋白质折叠向正确的方向进行。MRJ是一类新发现的DnaJ类分子伴侣 ,已证实它有调节ATP酶活性和阻止多聚谷氨酰胺凝聚的作用。我们用胍变性的虫荧光素酶作为蛋白质恢复功能活性的分子模型 ,用生物发光法研究了MRJ对蛋白质重新折叠的作用 ,发现MRJ确实有促进变性虫荧光素酶重新折叠并恢复其催化活力的功能。而且这种过程需要另一类Hsp6 0和Hsp70的协助 ,而这三种分子伴侣组合在一起 ,功效最好。实验中还发现 ,MRJ对虫荧光素酶恢复的促进作用是与ATP密切相关的。发光分析是研究分子伴侣促进蛋白质折叠过程的一种灵敏、精确和快速的技术手段。

中药复方益糖康通过介导伴侣自噬和免疫平衡防治早期糖尿病肾病机制探讨

糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)是糖尿病最常见的微血管并发症之一,是糖尿病发病和死亡的主要原因之一,同时也是终末期肾病中最常见的蛋白尿和非蛋白尿形成的原因。自噬作为机体的一种防御机制,参与DKD中多种靶细胞损害的调控过程,并能有效减轻DKD的病理表现。因此,通过调控自噬途径,可能成为治疗DKD的潜在疗法、新靶点和方向。中药复方益糖康具有健脾益气养阴、活血化瘀之功,其重要化合物黄芩素之一,可通过增加结合蛋白HSP90AA1的表达,诱导分子伴侣介导的自噬,减少由自噬缺陷导致的足细胞损伤;重要化合物槲皮素可能通过促进前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)的组蛋白3赖氨酸4(histone3lysine4,H3K4)甲基化,抑制PTGS2表达,减少炎症产生,抑制Th17向Treg分化,最终实现改善DKD的作用。但仍需要进一步动物实验验证及阐释,为中医药治疗糖尿病肾病提供新的思路与方案。进一步明确中药复方益糖康通过介导伴侣自噬和免疫平衡对糖尿病肾病防治以及机制探讨具有重要意义,并为临床上治疗糖尿病肾病提供新的思路与策略。该文就益糖康通过伴侣自噬和免疫平衡防治糖尿病肾病作一简述。

黄芪注射液对血管紧张素Ⅱ诱导的H9c2细胞凋亡的抑制作用和机制研究

目的:探讨黄芪注射液对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的抑制作用及其可能作用机制。方法:采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)方法筛选H9c2细胞培养的黄芪注射液浓度;H9c2细胞分为正常对照组、AngⅡ模型组、AngⅡ+黄芪注射液组。采用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测3组H9c2细胞电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)及分子伴侣葡萄糖调节蛋白75(GRP75)mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测VDAC1、Mfn2、GRP75的蛋白表达;Fura-2 AM法测定细胞内Ca^(2+)浓度变化;用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果:黄芪注射液在浓度为0.125%时对细胞的促增殖作用最为显著。与正常对照组比较,AngⅡ模型组Mfn2、GRP75 mRNA表达水平明显增加(P<0.05),AngⅡ+黄芪注射液组Mfn2、GRP75 mRNA表达低于AngⅡ模型组(P<0.05或P<0.01),而3组VDAC1 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较,AngⅡ模型组VDAC1、Mfn2和GRP75的蛋白表达明显增加(P<0.05或P<0.01),AngⅡ+黄芪注射液组VDAC1、Mfn2、GRP75的蛋白表达低于AngⅡ模型组(P<0.01)。与正常对照组比较,AngⅡ模型组细胞钙含量、细胞凋亡率明显增加(P<0.05或P<0.01),AngⅡ+黄芪注射液组细胞钙含量、细胞凋亡率低于AngⅡ模型组(P<0.01)。结论:黄芪注射液能够抑制血管紧张素Ⅱ诱导的H9c2心肌细胞凋亡,其机制可能与其调节VDAC1、Mfn2和GRP75等MAM结构蛋白表达和影响细胞内钙平衡有关。

遗传发育所发现叶绿体分子伴侣素不同亚基顶端区的功能分化分工

Cpn60(叶绿体分子伴侣素)作为叶绿体定位的重要分子伴侣,还参与其他蛋白的折叠,对不同底物的结合或折叠处于动态平衡中。Cpn60的顶端区位于桶状结构的顶部,负责对蛋白底物和辅伴侣的识别和互作。Cpn60如何实现不同底物间的结合-折叠平衡是个由来已久的科学问题。

天蚕素多肽分子对大肠埃希菌的抑制作用

目的体外重组表达家蝇天蚕素成熟肽分子,观察其对临床分离的多重耐药大肠埃希菌(E.coli)体外抑制作用。方法 PCR克隆天蚕素成熟肽(Mature Cecropin,MC)基因,在MC基因前加入色氨酸密码子(TGG)连接于pET32a质粒的硫氧还蛋白基因后,构建重组质粒pET32a-MC。转化E.coli/BL21(DE3)中。IPTG诱导重组融合蛋白质Thioredoxin(硫氧还蛋白,Trx)-MC表达。融合蛋白质纯化后,经胃蛋白酶37℃水解。融合蛋白质中的天蚕素氨基酸序列具有抗胃蛋白酶能力不被水解,融合蛋白质其余部分被胃蛋白酶水解成小于2kD的碎片,使用透析袋分离、纯化、浓缩,获得天蚕素成熟肽分子。水解产物经Tricine-SDS-PAGE验证,获得一条与天蚕素分子大小相近的条带。采用液态生长抑制试验检验天蚕素分子对E.coli抑制作用,观察其对标准菌株ATCC 25922及临床分离多重耐药菌株的抑制活性。结果 MC成熟肽分子体外对E.coli标准菌株的抑制活性较强,标准菌株较多重耐药菌株受抑制得更快,但两者均能被天蚕素分子抑制。结论天蚕素多肽分子对E.coli多重耐药菌株具有抑制作用。

人抑瘤素M在大肠杆菌中的表达、纯化及其对胆固醇代谢关键基因表达的影响

目的构建人抑瘤素M(OSM)的原核表达载体,通过表达及纯化获得重组蛋白,为深入研究OSM的功能及机制奠定基础。方法利用PCR技术,从质粒pOTB7-h OSM中扩增出人OSM蛋白编码序列,与原核表达载体pET-16b连接,构建表达质粒pET16b-OSM。在BL21(DE3)工程菌中表达目的蛋白,Western blot法检测OSM蛋白的表达。为提高OSM的可溶性表达,采用共表达分子伴侣的方法提高其上清产物的表达量。将放大发酵的产物处理后,经镍亲和层析法纯化,获得OSM成熟蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度。MTT法检测OSM对A375细胞的抑制活性,实时荧光定量PCR试验分析OSM对Hep G2细胞中胆固醇代谢相关基因(LDLR、ABCA1、Apo A-I和SR-BI)表达的影响。结果成功构建pET16b-OSM原核表达质粒,酶切鉴定和测序分析与预期结果完全一致。在E.coli BL21(DE3)中实现了目的蛋白的表达,通过共表达分子伴侣质粒pTf16,进一步提高了可溶性表达的水平。放大发酵产物经镍亲和层析纯化获得OSM成熟肽,电泳检测纯度大于98%。MTT法检测所制备的OSM蛋白抑制A375细胞生长的EC50为315ng/ml。mRNA水平检测证实OSM能剂量依赖地上调胆固醇代谢相关的低密度脂蛋白受体和ABCA1基因的表达。结论成功构建了OSM的原核表达载体,获得了具有生物学活性的目的蛋白,证实了其对胆固醇代谢关键基因转录的影响,为下一步功能及机制研究奠定基础。

人亲环素18抑制肌酸激酶的去折叠

新生肽链折叠过程中容易出现错误折叠与聚沉,从而导致折叠病等病理现象.分子伴侣具有辅助其他蛋白质正确折叠,保护蛋白质分子结构的功能.本文选用人肌肌酸激酶为靶蛋白,研究了肽基脯氨酰顺反异构酶人亲环素18(human cyclophilin 18,hCyp18)对人肌肌酸激酶去折叠的作用,发现hCyp18能够抑制人肌肌酸激酶在热变性与化学变性过程中的失活与构象变化,并抑制人肌肌酸激酶在化学变性过程中的聚沉,因此推断hCyp18具有针对人肌肌酸激酶的分子伴侣功能.本文同时研究了hCyp18与人肌肌酸激酶的结合作用,对hCyp18的作用机制进行了初步探讨.

多彩的快拍伴侣 尼康1 J2单电数码相机

尼康1系列自推出以来,就以低廉的价格和亮丽的外形受到了广大时尚摄影爱好者的喜爱。尼康1的低端系列J1取得了不错的成绩,它的升级款J2继承了前者的高速对焦和小巧身材,在众多微型可换镜头的相机中,它的优势在哪里？这款相机是尼康J1的升级产品,它的感光元件是拥有1015万有效像素的CMOS,这个数值听起来不算多,但是考虑到尼康CX传感器13.2×8.8mm的尺寸,这个像素数非常合适,它既能输出最大3872×2592的图片,

特立独行——Look数码伴侣

如今高像素的DC越来越普及了。如果出去旅行一次，DC配套的闪存卡的容量肯定是远远不够。故而采用移动硬盘+读卡器设计理念的数码伴侣大受欢迎。但数码伴侣也有不足之处．那就是因为附带了读卡器．所以它的体积与价格都比普通的移动硬盘要高出一筹。更不方便的是转存数据时．还要将闪存卡从数码设备中取出来，然后插入数码伴侣的读卡槽，

手机的得力伴侣——Lexar高速microSDHC存储卡

手机已经成为人们生活中不可或缺的生活用品之一。随着手机技术的迅猛发展，手机的应用也变得越来越广泛。音乐、拍照、摄影、娱乐，无所不能。就拿拍照来说，500万像素拍照功能的手机，现在也仅仅算是主流，更高的千万像素级拍照手机也已进入了我们的视野，手机拍摄的照片质量正日益向数码相机靠拢，因此对存储照片所需的空间，同样与日俱增。知名存储产品供应商Lexar Media（雷克沙）专为手机用户推出Lexar高速mircoSDHC存储卡产品，就为广大手机用户提供更高速，更大容量的手机存储解决方案。

牛卵形巴贝斯虫伴侣素CCT_η基因的克隆与生物信息学分析

对牛卵形巴贝斯虫延边株的伴侣素CCTη基因进行分子克隆,并利用生物信息学软件对CCTη基因进行了同源性、系统进化树、编码蛋白等电点、信号肽、跨膜区、糖基化位点及疏水性分析。结果显示,克隆的CCTη基因由1 008个核苷酸组成,其中编码335个氨基酸。与GenBank上发表的牛卵形巴贝斯虫CCTη基因序列(AB367928.1)同源性100%。CCTη基因编码蛋白等电点为7.32,不存在信号肽结构、跨膜区及糖基化位点。疏水性最大值3.38,最小值-3.79。本研究从CCTη基因方面近一步证实了该分离株的分子分类。

应用伴侣分子在大肠杆菌表达系统高效表达家蝇天蚕素

目的应用伴侣分子在大肠杆菌表达系统中高效表达家蝇天蚕素,研究伴侣分子对家蝇天蚕素基因在大肠杆菌中表达的影响。方法RT-PCR克隆家蝇的天蚕素成熟肽(mature cecropin,MC)与泛素(ubiquitin,UBI)基因,利用生物信息学方法分析硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)-MC和MC分子结构及Trx-MC分子和Trx-UBI-MC两种融合蛋白mRNA5'端的二级结构的异同。分别构建pET32a-MC和pET32a-UBI-MC两种重组质粒,转化入大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中。检测Trx-MC融合蛋白的表达和pET32a-MC和pET32a-UBI-MC在相同诱导时间及诱导剂浓度的条件下,融合蛋白表达量的差异。结果生物信息学分析结果显示MC分子被Trx分子包裹在其内部,MC分子的细胞毒性被去除,使其可以在大肠杆菌中正常表达。分子生物学实验结果进一步验证了生物信息学分析结果的正确性。同时,也显示UBI分子的加入,未影响融合蛋白质Trx-UBI-MC与Trx-MC的mRNA5'端二级结构。并且Trx-UBI-MC融合蛋白在全菌蛋白中的含量明显高于Trx-MC。结论Trx作为伴侣分子包裹了MC的天然结构,使其对宿主菌无毒性。UBI作为伴侣分子,在相同转录水平、翻译水平条件下,明显提高了蛋白的表达量。

家蝇Cecropin A分子体外表达及抗菌活性鉴定

目的体外重组表达家蝇天蚕素多肽分子,并对重组表达产物活性进行初步鉴定。方法克隆家蝇天蚕素成熟肽(Mature Cecropin,MC)基因,构建pET32a-MC重组质粒。转化大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中。1mmol/L终浓度的IPTG诱导重组蛋白Thioredoxin(硫氧还蛋白,Trx)-MC表达。重组蛋白质纯化回收后经胃蛋白酶水解获得天蚕素多肽分子。用重组蛋白和天蚕素多肽分子进行抑菌试验鉴定其生物活性。结果 MC多肽分子体外具有较强的抑菌活性,且抑菌活性持续时间长。结论硫氧还蛋白在重组蛋白质中作为分子伴侣改变了天蚕素多肽分子生物活性,使其对宿主菌低毒性。MC多肽分子的体外长效抑菌能力使其具有良好的应用前景。

伴侣素的发现者——霍维茨

伴侣素(chaperonin)是辅助蛋白质正确折叠过程中的重要元件,可有效防止蛋白质错误折叠和聚集,对细胞正常功能发挥和发育具有十分重要的意义。伴侣素功能缺陷或异常可导致许多神经退行性疾病如帕金森综合症等的发生,因此伴侣素介导的蛋白质折叠的研究对该类疾病的治疗具有重要帮助。伴侣素于1989年由霍维茨发现,经过近20年研究,人们对其作用机理和生理功能有了较为全面的理解,从而为应用奠定了基础。

JWH133对MPP^(+)诱导SH-SY5Y细胞铁水平和DMT1表达影响

目的探讨大麻素Ⅱ型受体(CB2R)激活对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用机制。方法培养SH-SY5Y细胞,根据药物处理不同将其分为对照组、MPP+组、CB2R激动剂JWH133+MPP+组、CB2R抑制剂AM630+JWH133+MPP+组。应用激光扫描共聚焦显微镜分析技术检测SH-SY5Y细胞铁水平变化,应用免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞二价金属离子转运蛋白1(DMT1)的表达。结果与对照组相比,MPP+组细胞荧光强度明显降低,差异有显著性(F=26.620,q=10.410,P<0.05);用JWH133预处理后,JWH133+MPP+组细胞荧光淬灭程度低于MPP+组,差异有显著性(q=4.868,P<0.05);而且应用AM630可以逆转JWH133的这种作用,AM630+JWH133+MPP+组和JWH133+MPP+组荧光强度相比差异具有显著性(q=5.619,P<0.05)。与对照组相比,MPP+组细胞的DMT1蛋白表达量显著升高(F=9.493,q=4.109,P<0.05);JWH133+MPP+组细胞DMT1蛋白表达量下降,与MPP+组相比差异具有显著性(q=4.771,P<0.05);而AM630可阻断JWH133的作用,AM630+JWH133+MPP+组细胞DMT1蛋白表达量较JWH133+MPP+组显著升高(q=6.240,P<0.05)。结论激活CB2R可以抑制MPP+对DMT1蛋白表达的诱导从而调节SH-SY5Y细胞铁水平降低。