皱纹盘鲍伴侣蛋白CCTζ的分子克隆及其在不同锌含量日粮处理下的表达分析(英文)

伴侣蛋白CCT在蛋白折叠、抗胁迫以及调节细胞生长等生理过程中担负重要作用。研究利用同源克隆和RACE技术克隆了皱纹盘鲍伴侣蛋白CCTζ(HdhCCTζ)cDNA全长序列,并对CCTζ基因的序列特征进行了分析。HdhCCTζcDNA序列长1960 bp,开放阅读框为1599 bp,编码532个氨基酸,生物学软件推测其编码蛋白相对分子量为58.46 kD,等电点为6.53。BLAST分析结果表明HdhCCTζ与哺乳动物、鸟和鱼类等物种的CCT具有较高的同源性。生物信息学分析结果显示,HdhCCTζ蛋白序列中包含3个典型的CCT信号基序(35RTNLGPKGTLKML47,56LTKDGNVLLHEMQIQHP72和84QDDITGDGT92)以及1个腺苷三磷酸结合基序(89GDGTTS94)。此外,在HdhCCTζ蛋白序列中还包含3个糖基化位点(23NISA26,128NKSL131and234NVSL237)。实时荧光定量PCR检测结果显示,HdhCCTζ在皱纹盘鲍组织中为组成型表达,但主要集中在性腺、血淋巴和肝胰腺中表达。使用不同锌含量(6.69 mg/kg、33.85 mg/kg、710.63 mg/kg和3462.5 mg/kg)的日粮来饲喂幼鲍20周后,取其肝脏和血细胞总RNA,利用实时荧光定量PCR技术进行HdhCCTζmRNA的表达水平分析。分析结果显示,随着日粮中锌含量的增加,HdhCCTζmRNA在血淋巴和肝胰腺中的表达水平呈现上调的趋势。相比于锌适量组(33.85 mg/kg),过量的锌(3462.5 mg/kg)却能够下调HdhCCTζmRNA的表达水平。上述结果表明,HdhCCTζ的表达受到日粮中锌添加量的影响,而高表达量的HdhCCTζ可能在提高皱纹盘鲍机体抗胁迫过程中发挥重要作用。

人伴侣蛋白CCT的β亚基全长cDNA克隆、表达及染色体定位的研究

伴侣蛋白能促进其他底物蛋白形成正确折叠结构，而本身并不成为底物蛋白的组分．在真核细胞质中的伴侣蛋白ＣＣＴ主要是参与协助细胞骨架蛋白的构成，为细胞生长所必需．通常哺乳动物的ＣＣＴ是由７－９种不同亚基所组成的蛋白复合体．从人的睾丸组织ｃＤＮＡ文库中分离出一条新的全长 ｃＤＮＡ，在其 １９３５ｂｐ序列中含有一个长 １６０５ｂｐ的可读框，它编码了 ５３５个氨基酸．基于从该ｃＤＮＡ推导的蛋白质与啤酒酵母。裂殖酵母、线虫、小鼠等的ＣＣＴβ亚基存在较高的同源度，尤其是与小鼠的ＣＣＴβ同源度高达９７％，由这个新基因所编码的推导蛋白可能就是人的ＣＣＴβ亚基． Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示，人ＣＣＴβ基因的转录本长约 ２．０ ｋｂ，它在多种组织中均有表达，但在睾丸组织中呈超量表达，约为其他组织表达量的３－２４倍．利用辐射杂种细胞克隆板定位技术，ＣＣＴβ基因被定位于人染色体１２ｑ１４区带．此外，通过同源检索，发现这个ｃＤＮＡ序列的５’侧与人的一个ＢＡＣ基因组序列（Ｕ９１３２７）的３’侧呈间隙的区段性同源，经对比分析，还对ＣＣＴβ基因５’端的基因组结构进行了详细描述．

家蝇伴侣蛋白CCTη基因序列分析与表达模式

目的对家蝇伴侣蛋白CCTη(MD-CCTη)基因进行序列分析,克隆其c DNA序列并检测家蝇CCTη基因的表达情况。方法采用表达序列标签(EST)测序技术从已构建的家蝇幼虫c DNA文库中筛选MD-CCTη基因,对其进行序列测定和分析;提取家蝇3日龄幼虫RNA,逆转录c DNA为模板,PCR扩增,并与p MD-19T载体连接,转化大肠杆菌DH5α中;采用实时荧光PCR技术分析MD-CCTη基因在家蝇不同生长发育阶段及3日龄幼虫组织中表达模式。结果 MD-CCTη基因开放阅读框(ORF)全长1 632 bp,编码543个氨基酸,理论分子量59.3 k Da,等电点6.27;该基因推导的氨基酸序列与其他昆虫同源序列比较有较高的相似性(93%),聚类分析结果显示,家蝇与地中海实蝇和果蝇的亲缘关系最近(100%);MD-CCTη在发育阶段以卵期表达量最高,其次为1日龄幼虫,雄性成虫表达量最低;MD-CCTη基因在家蝇3日龄幼虫组织中气管表达量最高,其次为唾液腺,在体壁中表达量最低。结论成功克隆出MD-CCTη基因的c DNA序列,MD-CCTη在家蝇不同发育阶段及组织中表达模式存在明显差异。