基于伴刀豆球蛋白固定过氧化物酶无介体新型生物传感器的研制

以纳米金吸附辣根过氧化物酶,用活化的伴刀豆球蛋白（Con A）将其固定在裸金电极表面,研制成一种新型的无介体辣根过氧化物酶生物传感器.探讨了纳米金的尺寸、组装膜层数、工作电位和pH等实验条件对传感器性能的影响.在pH 7.0,外加电压-150 mV（vs.SCE）条件下,传感器对H2O2在5.0×10^-6～1.2×10^-2mol/L范围内呈线性关系;检出限为2.9×10^-6mol/L.将传感器用于实际样品的测定,结果良好.

伴刀豆球蛋白A识别正常与肝癌γ-谷氨酰转移酶的实验观察

目的 :观察伴刀豆球蛋白A是否能有效的区分出正常与肝细胞肝癌特异γ 谷氨酰转移酶 (HCC SGGT) ,为进一步建立简便、快速、灵敏、特异的检测肝癌特异GGT的方法奠定基础。方法 :用植物凝集素亲和微柱法 ,二步洗脱 ,分离 10例正常人、5例肝细胞肝癌病人、5例良性肝病病人血清中的GGT ,用速率法检测酶活性。得到层析图谱、总酶活性比和亲和率。结果 :正常与良性肝病病人血清第一步洗脱的酶活性较低(平均峰高分别为 1 62 ,1 2 6) ,而肝癌病人血清第一步洗脱的酶活性较高 (平均峰高为 16 8)。总酶活性比分别为 0 2 4,0 13 ,0 48;亲和率分别为 80 6% ,88 1% ,67 6%。结论 :伴刀豆球蛋白A与正常人、良性肝病病人血清中的GGT亲和性较强 ,与肝癌病人血清中的GGT亲和性较弱 ,伴刀豆球蛋白A能有效的区分出正常与肝癌特异GGT ,利用该特性可建立检测肝癌特异GGT的植物凝集素亲和法。

二甲双胍激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)缓解伴刀豆球蛋白A诱导的小鼠急性爆发型肝炎

目的研究二甲双胍(Met)对伴刀豆球蛋白A(ConA)所致急性爆发型肝炎小鼠的保护作用并探索其机制。方法C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(NC组)、ConA组、Met组,每组8只。后两组分别灌饲0.2 mL生理盐水和100 mg/kg Met连续5 d后,尾静脉注射0.1 mL ConA(25 mg/kg)建立小鼠急性爆发型肝炎模型,18 h后处死。全自动生化分析仪检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)及总胆红素(TB)水平;HE染色观察小鼠肝组织病理改变;免疫组织化学染色法检测肝组织巨噬细胞浸润;实时定量PCR检测肝脏组织白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达;血细胞分析仪检测小鼠外周血白细胞(WBC)总数及其中淋巴细胞数量,流式细胞术检测脾细胞中Th17细胞比例;免疫荧光组织化学染色检测肝组织胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达;Western blot法检测肝组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和磷酸化的AMPK蛋白表达。结果与ConA组相比,Met组小鼠血清ALT、AST及TB明显下降,肝病变减轻,巨噬细胞浸润减少,外周血白细胞总数及其中淋巴细胞数量增多,脾脏中Th17淋巴细胞比例下调,IL-1β、IL-6及TNF-α的水平降低,凋亡下降,磷酸化的AMPK的表达升高。结论Met通过激活AMPK,降低Th17细胞比例,抑制肝脏炎细胞浸润和炎细胞因子产生,减轻ConA诱导的肝损伤。

伴刀豆球蛋白-糖蛋白特异性识别作用构筑的多层膜及其在生物传感器制备中的应用

研究了伴刀豆球蛋白 -糖蛋白特异性分子识别作用构建的多层膜及其在葡萄糖生物传感器制备中的应用 .结果表明 ,含有糖残基的葡萄糖氧化酶可以通过识别作用组装进入多层膜 ,不含糖基的过氧化氢酶经过化学修饰引入麦芽糖残基 ,也可以通过分子识别作用组装到多层膜中 .对于多层膜厚度研究的结果表明 ,膜的厚度随层数的增加呈线性关系 .研究了多层膜的表面形貌 ,并讨论了膜结构与功能的关系 .伴刀豆球蛋白-酶多层膜修饰的金电极的电化学实验表明 ,多层膜中的酶具有催化活性 .过氧化氢酶

脂多糖及伴刀豆球蛋白A诱导脾淋巴细胞增殖试验方法用于免疫毒性评价的可行性研究

目的研究脂多糖（LPS）及伴刀豆球蛋白A（ConA）诱导脾淋巴细胞增殖试验的两种方法用于免疫毒性评价的可行性。方法雄性Wistar大鼠40只，体重180～200g，随机分为对照组和2，5，10mg／kg环磷酰胺染毒组，每组10只大鼠，各剂量组每日灌胃染毒1次，连续28d，对照组给予生理盐水。染毒结束后24h，断头处死大鼠，取脾脏，制浓度为3×10^6个／ml的脾细胞悬液，用MTT方法进行LPS及ConA诱导脾淋巴细胞增殖试验。结果10mg／kg环磷酰胺染毒组大鼠的B淋巴细胞和T淋巴细胞的增殖能力（吸光度值，分别为0．032±0．037和0．028±0．050）低于对照组的B淋巴细胞和T淋巴细胞的增殖能力（分别为0．124±0．093和0．458±0．320），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论LPS及ConA诱导脾淋巴细胞增殖试验的两种方法用于免疫毒性评价具有可行性。

以伴刀豆球蛋白为固定基质的脲酶生物传感器

本文制备了一种以溶剂聚合膜pH电极作原电极，利用伴刀豆球蛋白（Con A）与糖蛋白间的特异性识别作用，将Con A和脲酶表面的麦芽糖残基结合，采用交替沉积Con A和脲酶，进行多层脲酶膜组装的脲酶生物传感器。研究了酶固定化条件的影响，优化了实验条件，测试了传感器对尿素的生物电化学响应。在6．9×10^-5～1．0×10^-3mol·L^-1的浓度范围内传感器响应的电极电位与尿素浓度的对数成正比，检出限为4．5×10^-5mol·L^-1。将传感器用于牛奶样品中回收率的测定，结果满意。

伴刀豆球蛋白A-糖复合物的模拟分析

主要分析 Con A与不同的糖特异性结合时其活性位点构象变化的特征。模拟分析了 Con A糖结合活性中心氨基酸残基结构特征 ,同时对相应残基原子可及性表面进行了计算和分析。结果表明 :(1) Con A在和不同的糖结合时 ,存在不同的结合方式 ;(2 )不管 Con A和什么糖结合 ,主要的作用是由活性中心的 Tyr12、Asn14、Asp2 0 8和 Arg2 2 8提供的 ;(3)无论是结合单糖还是寡糖 ,活性中心总是与第一个糖环起主要的结合作用。

伴刀豆球蛋白亲和色谱柱的制备及其在糖蛋白核糖核酸酶B结构分析中的应用

通过对硅胶基质进行化学改性键合伴刀豆球蛋白(C on A),制备了对糖蛋白具有特异亲和作用的亲和色谱固定相;该固定相非特异性吸附弱,对于糖蛋白和糖肽的分离效果良好。对亲和色谱的分离条件进行了优化,以标准糖蛋白核糖核酸酶B(RN ase B)为模型,对其进行了纯化;用糖苷酶切除糖链,并对切除糖链前后的RN ase B用胰蛋白酶酶解;用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALD I-TO F M S)对亲和色谱分离得到的糖蛋白、糖链及糖肽进行了分析,确定了RN ase B的一级结构、糖含量、糖基化位点及糖连接方式。该方法快速准确,适于糖蛋白和糖肽的分离表征。将其应用于血清中糖蛋白及酶解后血清中糖肽的分离富集,取得了很好的效果。

三种品系小鼠对伴刀豆球蛋白A所致急性肝损伤的耐受性比较研究

目的应用不同剂量伴刀豆球蛋白A(ConA)诱导三种不同品系小鼠急性肝损伤,比较肝酶变化、死亡率和肝组织病理学变化。方法分别用6、12、20和30 mg·kg-1 ConA处理C57BL/6J、BABL/c和KM小鼠,8 h后对比观察急性肝损伤动物血清酶学及肝组织病理学变化情况。结果在6 mg·kg-1 ConA的作用下,三个品系小鼠均被成功制造出急性肝损伤模型;在12 mg·kg-1ConA作用下,KM小鼠血清ALT和AST分别为(1006.8±12.1)U/L和(1391.8±13.4)U/L,显著高于BABL/c小鼠[(75.7±0.5)U/L和(284.7±23.4)U/L)和C57BL/6J小鼠(104.4±32.2)U/L和(492.2±12.3)U/L,P均<0.05];同样,KM小鼠肝指数和脾指数分别为(5.4±0.3)和(0.7±0.5),均显著高于BABL/c小鼠[(5.2±0.4)和(0.6±0.3)和C57BL/6J小鼠(5.0±0.6)和(0.6±0.2),P均<0.05];在20 mg·kg-1ConA作用下,三组小鼠血清AST和ALT水平无统计学差异,但BABL/c小鼠(4/10)和C57BL/6J小鼠(5/10)死亡率显著高于KM小鼠(1/10);在30 mg·kg-1ConA作用下,三个品系小鼠死亡率均较高(KM小鼠为30%,BABL/c和C57BL/6J小鼠均为100%)。结论不同品系的小鼠对ConA的耐受性不同,KM小鼠对ConA的耐受性明显优于BABL/c小鼠和C57BL/6J小鼠,且呈剂量依赖性。

伴刀豆球蛋白A中铽(Ⅲ)和钴(Ⅱ)之间的能量转移——一种新的金属离子之间距离的探针

基于Frster偶极-偶极无辐射能量转移机理估测溶液状态下能量给予体和接受体之间的距离已广泛应用于生物大分子的构象分析中,但仍局限于有机物基团之间的距离测定,Horrocks等人用铽和钴离子作为探针测定了嗜热菌蛋白酶分子内一个钙离子与锌离子之间的距离。

单分散交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂的制备及亲合纯化伴刀豆球蛋白-A

采用一步种子溶胀聚合法制备了颗粒呈单分散的交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂 ,对其环氧基的组成比进行了表征 ,并以氨基葡萄糖为配基 ,首次制备了纯化粗品伴刀豆球蛋白 A (Con A ,Ⅲ )的聚合物基质的高效亲合色谱柱。配基在树脂上的键合量为 8.2mg g ,对纯化后的Con A 的吸附量为 13.4mg g。使用该亲合色谱介质成功地从粗品Con A中快速纯化了Con A ,电泳分析显示为一个主要的谱带 ,纯度从 15 %提高到 95 %。

伴刀豆球蛋白A与巨噬细胞膜上受体作用下膜变形性及细胞吞噬能力变化

本文采用图像分析、相差显微、生物活性测定等技术,研究ConA与巨噬细胞膜受体结合后对细胞行为与功能的影响. ConA与受体结合后巨噬细胞膜面积增大、变形性和吞噬能力增强、细胞产热量增加,表明细胞膜结构与功能发生变化.本实验是将图像分析技术用来研究相对图像采集速度要慢得多的活细胞特性的一次成功尝试.

诸葛菜花粉粒表面伴刀豆球蛋白A受体扫描电镜观察

诸葛菜花粉粒表面伴刀豆球蛋白Ａ受体扫描电镜观察刘智慧，郑常文，董长江，黄玉祥，罗鹏（四川大学生物系，成都６１００６４）张明珍（四川师范大学生物系，成都６１００６６）有花植物的有性生殖过程是从花粉粒与柱头表面某些识别物质的特异性作用开始的，尽管花粉粒和...

乳过氧化物酶与伴刀豆球蛋白A共修饰电极的电化学活性研究

用乳过氧化物酶（LPO）和伴刀豆球蛋白A（Con A）共修饰金电极,首次得到了乳过氧化物酶的直接电化学响应,在此基础上研究了乳过氧化物酶对过氧化氢（H2O2）的电催化活性,并研究了一氧化氮（NO）对LPO电催化活性的影响。在Con A的作用下,乳过氧化物酶在循环伏安图中显示1对准可逆的氧化还原峰,表现出薄层电化学行为。在pH 7.4的磷酸缓冲溶液中的表观氧化还原电位为-190 mV。该共修饰电极对H2O2表现出电催化还原活性,由此构建的传感器对H2O2的检测范围是2.0×10^-5-4.0×10^-3mol/L。实验发现,微摩尔量级的NO会抑制乳过氧化物酶对H2O2的催化活性。

伴刀豆球蛋白A刺激高胆固醇血症兔的单核细胞释放高水平的生长因子

复制高胆固醇血症（ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ，ＨＣ）兔模型，取其血液分离单核细胞（ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ，ＭＣ），培养于含或不含伴刀豆球蛋白Ａ（ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎＡ，ＣｏｎＡ）的无血清ＤＭＥ／Ｆ１２培养基中，收集不同条件的ＭＣ条件培养基（ＭＣ－ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄｍｅｄｉｕｍ，ＭＣ－ＣＭ）。并检测其促有丝分裂活性。结果表明。

伴刀豆球蛋白A与感染抗青蒿酯钠伯氏疟原虫红细胞的凝集反应

伴刀豆球蛋白Ａ与感染抗青蒿酯钠伯氏疟原虫红细胞的凝集反应吕丽莉刘爱如赵东坡隋在云山东省中医药研究所２５００１４关键词伴刀豆球蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）感染伯氏疟原虫抗青蒿酯钠株红细胞感染伯氏疟原虫正常株红细胞正常红细胞凝集反应中国图书资料分类法分类号Ｒ３２...

以伴刀豆球蛋白为介质定向固定化脲酶的研究

将戊二醛将伴刀豆球蛋白(ConA)和壳聚糖载体交联,然后利用ConA与脲酶糖链的特异性结合作用,实现脲酶的定向固定化。定向固定化的最适条件为戊二醛浓度3.5%、ConA浓度1 mg/mL、ConA溶液pH值7.0、脲酶浓度0.4 mg/mL。定向固定化脲酶的最适pH 5.0～6.0、最适温度77℃、米氏常数Km11.76 mmol/L,与游离酶及非定向固定化脲酶比较,定向固定化脲酶的最适pH向酸性范围发生了偏移并有更宽的pH适用范围,最适温度提高,与底物的亲和力较大,且有较好的操作稳定性。

利用伴刀豆球蛋白检测O-甘露糖基化

目的:基于伴刀豆球蛋白A(ConA)特异性识别并结合甘露糖的特性,建立一种检测O-甘露糖基化的方法,为酵母等宿主表达蛋白的O-糖基化提供一种高效筛选和分析的方法。方法:利用糖苷酶F(PNGF)切除检测蛋白的N-糖链,排除N-糖基化的干扰;通过Q阴离子交换柱和ConA Sepharose 4B柱纯化Western印迹膜封闭蛋白牛血清白蛋白(BSA),除去BSA中甘露糖修饰的蛋白的干扰,优化膜封闭条件;利用辣根过氧化物酶标记的ConA检测具有低甘露糖型N-糖基化修饰能力的毕赤酵母GJK01-HL(Δoch1)表达的抗Her-2抗体是否存在O-甘露糖基化现象。结果:通过PNGF酶切处理,可以完全去除糖蛋白的N-糖链的干扰;BSA经过Q阴离子交换柱和ConASepharose 4B柱纯化后,除去了大部分甘露糖蛋白,可作为封闭蛋白;用建立的方法检测,发现毕赤酵母工程菌GJK01-HL(Δoch1)表达的抗Her-2抗体存在O-甘露糖基化现象。结论:本方法是研究糖蛋白是否发生O-甘露糖基化的有效检测手段,可用于酵母等表达蛋白的O-糖基化的高效筛选和分析。

伴刀豆球蛋白A/葡聚糖修饰的金纳米颗粒自组装膜增强信号的表面等离子体共振葡萄糖传感器

通过特异性识别作用在表面等离子体共振传感器的金膜表面构建了伴刀豆球蛋白A/葡聚糖修饰的金纳米颗粒自组装膜。当有葡萄糖存在时,膜被分解,从而实现对葡萄糖的灵敏检测。结果表明:由于金纳米颗粒和金膜之间的等离子体波耦合作用,修饰了金纳米颗粒的自组装膜上,葡萄糖的检测信号有明显增强。该传感器可以选择性地检测0.1～100mmol/L浓度范围内的葡萄糖溶液,且敏感膜可以多次再生使用。

伴刀豆球蛋白A与巨噬细胞膜受体结合引起膜蛋白和膜脂分子运动及电荷的变化

本文利用荧光漂白恢复,顺磁共振和细胞电泳等技术研究外源性配体伴刀豆球蛋白A与巨噬细胞膜受体结合后膜蛋白及膜脂分子运动以及细胞表面电荷变化,结果表明,细胞膜表面蛋白分子侧向扩散速度减慢;膜脂分子流动性减慢,烃链有序性增强;细胞电泳速度加快。此等对阐明伴刀豆球蛋白A作为外源信息导致细胞膜分子动力学变化以及电荷改变有重要的生物学意义。