伴刀豆蛋白A促进培养的静止软骨细胞分化

本文观察了ConA对培养软骨细胞的分化的影响。结果证实了ConA对培养的静止软骨细胞高分子硫酸化PG、AKPase,维生素D_3受体的合成及细胞外基质^(45)Ca摄取和沉积的钙含量具有明显的促进作用。显示了ConA具有特异地促进软骨细胞成熟化和终末分化的生物学作用。ConA的这一作用可由MeMan完全解除,并有明显的凝集素特异性。

伴刀豆蛋白A对人胃癌细胞肿瘤坏死因子受体的调节及对肿瘤坏死因子突变体细胞毒效应的影响

目的：探讨伴刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）对人胃癌细胞肿瘤坏死因子受体（ＴＮＦＲ）的调节机制及肿瘤坏死因子突变体（ＴＮＦ－ｍ）细胞毒效应与ＴＮＦＲ之间的关系。方法：以１２５Ｉ－ＴＮＦ－ｍ作为放射配体，用放射配体结合分析法、ＭＴＴ比色法对ＣｏｎＡ作用前后的人胃癌细胞（ＳＧＣ７９０１）ＴＮＦＲ的数目，亲和力，以及ＴＮＦ－ｍ的细胞毒效应进行了检测，结果：ＣｏｎＡ可快速增加细胞表面ＴＮＦ－ｍ的结合位点（０．５６×１０－１１对０．９１×１０－１１ｎｍｏｌ·细胞－１，Ｐ＜０．０１）而不影响受体的亲和力（Ｋｄ：２．７８×１０－１０对２．６３×１０－１０ｍｏｌ·Ｌ－１，Ｐ＞０．５）。ＣｏｎＡ不增加受体蛋白的合成和胞浆受体的数目；ＣｏｎＡ作用组ＴＮＦ－ｍ的内化和降解（分别为１．２４×１０－６和０．１８×１０－６ｎｍｏｌ）显著低于对照组的内化和降解（分别为０．６×１０－６和０．０７×１０－６ｎｍｏｌ）；ＣｏｎＡ作用组ＴＮＦ－ｍ对胃癌细胞的最大抑制率（８．４％）显著低于对照组ＴＮＦ－ｍ的最大抑制率（６０％）、Ｐ＜０．０１。结论：伴刀豆蛋白Ａ通过抑制ＴＮＦＲ的内化而增加膜ＴＮＦＲ的数目；ＴＮＦ－ｍ的生物效应与ＴＮＦＲ介导的信号传递（受体后?

伴刀豆蛋白A及其衍生物对培养软骨细胞蛋白多糖代谢的影响

观察了ＣｏｎＡ对培养软骨细胞ＰＧ合成代谢的影响。证实ＣｏｎＡ能够使培养的软骨细胞高分子硫酸化ＰＧ的合成增加３～４倍，其分子量、硫酸化部位和硫酸化程度与对照组相比无明显差异，是具有正常结构的软骨型ＰＧ。ＣｏｎＡ对低分子型ＰＧ的合成未见明显的影响。ＣｏｎＡ促进ＰＧ合成的作用可由ＭｅＭａｎ完全解除，比具有同样效应的激素、生长因子都强，并有明显的凝集素特异性。推测ＣｏｎＡ的作用可能与软骨细胞膜或细胞内的分化诱导因子的受体或软骨中存在的ＣｏｎＡ软骨细胞分化因子有关。

伴刀豆蛋白A与活细胞膜作用的图像分析和多元统计

用图像分析与多元统计研究伴刀豆蛋白A(ConA)与活巨噬细胞膜受体结合时膜变形性随作用时间和ConA浓度的定量变化。结果表明膜面积增大,增大速率与ConA速度呈正相关。ConA浓度加大,膜园形系数减小,变形性增加,此等变化反应了细胞的活化。

伴刀豆蛋白A与巨噬细胞膜上受体结合对细胞膜的影响

用圆二向色性(CD)技术和荧光技术研究伴刀豆蛋白A(ConA)与巨噬细胞膜上受体结合对质膜的影响。结果表明,ConA与膜受体结合后,膜蛋白分子构象、膜分子活动度及细胞膜对Ca^(2+)通透性都发生变化,这对于深入探讨配体与受体作用对膜分子结构的影响和巨噬细胞激活的分子机理均可能有帮助。

一种新型糖脂单分子膜与伴刀豆蛋白A的分子识别

一种新型糖脂单分子膜与伴刀豆蛋白Ａ的分子识别张希，沈家骢ＲｕｍｐＥ．，ＲｉｎｇｓｄｏｒｆＨ．（吉林大学化学系，长春，１３００２３）（德国Ｍａｉｎｚ大学有机化学研究所）关键词糖脂，单分子膜，分子识别糖与蛋白质、核酸相比，直到六十年代还只当作贮能和结构的...

伴刀豆蛋白A与巨噬细胞膜上受体结合后对微丝组装的影响

本文采用流式细胞术(FCM)和荧光显微术研究ConA与巨噬细胞膜上受体结合后细胞骨架微丝组装的变化,实验证明ConA与膜受体结合后巨噬细胞内微丝含量增多,并且与ConA的浓度有关。荧光显微镜下还可见细胞面积增大。本实验成功地用流式细胞术定量研究活细胞内细胞骨架的变化情况。

伴刀豆球蛋白A对培养静止软骨细胞形态和DNA合成的影响

培养的静止软骨细胞用ConA处理后,细胞形态从扁平形变成多角形、圆形与球形,同时可以观察到细胞周边存在大量的具有折光特点的细胞外基质。ConA能够完全抑制软骨细胞DNA的合成,LD_(50)为0.4—1.0μg/ml。ConA抑制DNA合成的作用是可逆的。20mmol/L的MeMan能够完全阻断其对软骨细胞形态和DNA合成的影响。

基于伴刀豆球蛋白固定过氧化物酶无介体新型生物传感器的研制

以纳米金吸附辣根过氧化物酶,用活化的伴刀豆球蛋白（Con A）将其固定在裸金电极表面,研制成一种新型的无介体辣根过氧化物酶生物传感器.探讨了纳米金的尺寸、组装膜层数、工作电位和pH等实验条件对传感器性能的影响.在pH 7.0,外加电压-150 mV（vs.SCE）条件下,传感器对H2O2在5.0×10^-6～1.2×10^-2mol/L范围内呈线性关系;检出限为2.9×10^-6mol/L.将传感器用于实际样品的测定,结果良好.

伴刀豆球蛋白A识别正常与肝癌γ-谷氨酰转移酶的实验观察

目的 :观察伴刀豆球蛋白A是否能有效的区分出正常与肝细胞肝癌特异γ 谷氨酰转移酶 (HCC SGGT) ,为进一步建立简便、快速、灵敏、特异的检测肝癌特异GGT的方法奠定基础。方法 :用植物凝集素亲和微柱法 ,二步洗脱 ,分离 10例正常人、5例肝细胞肝癌病人、5例良性肝病病人血清中的GGT ,用速率法检测酶活性。得到层析图谱、总酶活性比和亲和率。结果 :正常与良性肝病病人血清第一步洗脱的酶活性较低(平均峰高分别为 1 62 ,1 2 6) ,而肝癌病人血清第一步洗脱的酶活性较高 (平均峰高为 16 8)。总酶活性比分别为 0 2 4,0 13 ,0 48;亲和率分别为 80 6% ,88 1% ,67 6%。结论 :伴刀豆球蛋白A与正常人、良性肝病病人血清中的GGT亲和性较强 ,与肝癌病人血清中的GGT亲和性较弱 ,伴刀豆球蛋白A能有效的区分出正常与肝癌特异GGT ,利用该特性可建立检测肝癌特异GGT的植物凝集素亲和法。

脂多糖及伴刀豆球蛋白A诱导脾淋巴细胞增殖试验方法用于免疫毒性评价的可行性研究

目的研究脂多糖（LPS）及伴刀豆球蛋白A（ConA）诱导脾淋巴细胞增殖试验的两种方法用于免疫毒性评价的可行性。方法雄性Wistar大鼠40只，体重180～200g，随机分为对照组和2，5，10mg／kg环磷酰胺染毒组，每组10只大鼠，各剂量组每日灌胃染毒1次，连续28d，对照组给予生理盐水。染毒结束后24h，断头处死大鼠，取脾脏，制浓度为3×10^6个／ml的脾细胞悬液，用MTT方法进行LPS及ConA诱导脾淋巴细胞增殖试验。结果10mg／kg环磷酰胺染毒组大鼠的B淋巴细胞和T淋巴细胞的增殖能力（吸光度值，分别为0．032±0．037和0．028±0．050）低于对照组的B淋巴细胞和T淋巴细胞的增殖能力（分别为0．124±0．093和0．458±0．320），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论LPS及ConA诱导脾淋巴细胞增殖试验的两种方法用于免疫毒性评价具有可行性。

伴刀豆球蛋白-糖蛋白特异性识别作用构筑的多层膜及其在生物传感器制备中的应用

研究了伴刀豆球蛋白 -糖蛋白特异性分子识别作用构建的多层膜及其在葡萄糖生物传感器制备中的应用 .结果表明 ,含有糖残基的葡萄糖氧化酶可以通过识别作用组装进入多层膜 ,不含糖基的过氧化氢酶经过化学修饰引入麦芽糖残基 ,也可以通过分子识别作用组装到多层膜中 .对于多层膜厚度研究的结果表明 ,膜的厚度随层数的增加呈线性关系 .研究了多层膜的表面形貌 ,并讨论了膜结构与功能的关系 .伴刀豆球蛋白-酶多层膜修饰的金电极的电化学实验表明 ,多层膜中的酶具有催化活性 .过氧化氢酶

以伴刀豆球蛋白为固定基质的脲酶生物传感器

本文制备了一种以溶剂聚合膜pH电极作原电极，利用伴刀豆球蛋白（Con A）与糖蛋白间的特异性识别作用，将Con A和脲酶表面的麦芽糖残基结合，采用交替沉积Con A和脲酶，进行多层脲酶膜组装的脲酶生物传感器。研究了酶固定化条件的影响，优化了实验条件，测试了传感器对尿素的生物电化学响应。在6．9×10^-5～1．0×10^-3mol·L^-1的浓度范围内传感器响应的电极电位与尿素浓度的对数成正比，检出限为4．5×10^-5mol·L^-1。将传感器用于牛奶样品中回收率的测定，结果满意。

伴刀豆球蛋白A-糖复合物的模拟分析

主要分析 Con A与不同的糖特异性结合时其活性位点构象变化的特征。模拟分析了 Con A糖结合活性中心氨基酸残基结构特征 ,同时对相应残基原子可及性表面进行了计算和分析。结果表明 :(1) Con A在和不同的糖结合时 ,存在不同的结合方式 ;(2 )不管 Con A和什么糖结合 ,主要的作用是由活性中心的 Tyr12、Asn14、Asp2 0 8和 Arg2 2 8提供的 ;(3)无论是结合单糖还是寡糖 ,活性中心总是与第一个糖环起主要的结合作用。

伴刀豆球蛋白亲和色谱柱的制备及其在糖蛋白核糖核酸酶B结构分析中的应用

通过对硅胶基质进行化学改性键合伴刀豆球蛋白(C on A),制备了对糖蛋白具有特异亲和作用的亲和色谱固定相;该固定相非特异性吸附弱,对于糖蛋白和糖肽的分离效果良好。对亲和色谱的分离条件进行了优化,以标准糖蛋白核糖核酸酶B(RN ase B)为模型,对其进行了纯化;用糖苷酶切除糖链,并对切除糖链前后的RN ase B用胰蛋白酶酶解;用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALD I-TO F M S)对亲和色谱分离得到的糖蛋白、糖链及糖肽进行了分析,确定了RN ase B的一级结构、糖含量、糖基化位点及糖连接方式。该方法快速准确,适于糖蛋白和糖肽的分离表征。将其应用于血清中糖蛋白及酶解后血清中糖肽的分离富集,取得了很好的效果。

三种品系小鼠对伴刀豆球蛋白A所致急性肝损伤的耐受性比较研究

目的应用不同剂量伴刀豆球蛋白A(ConA)诱导三种不同品系小鼠急性肝损伤,比较肝酶变化、死亡率和肝组织病理学变化。方法分别用6、12、20和30 mg·kg-1 ConA处理C57BL/6J、BABL/c和KM小鼠,8 h后对比观察急性肝损伤动物血清酶学及肝组织病理学变化情况。结果在6 mg·kg-1 ConA的作用下,三个品系小鼠均被成功制造出急性肝损伤模型;在12 mg·kg-1ConA作用下,KM小鼠血清ALT和AST分别为(1006.8±12.1)U/L和(1391.8±13.4)U/L,显著高于BABL/c小鼠[(75.7±0.5)U/L和(284.7±23.4)U/L)和C57BL/6J小鼠(104.4±32.2)U/L和(492.2±12.3)U/L,P均<0.05];同样,KM小鼠肝指数和脾指数分别为(5.4±0.3)和(0.7±0.5),均显著高于BABL/c小鼠[(5.2±0.4)和(0.6±0.3)和C57BL/6J小鼠(5.0±0.6)和(0.6±0.2),P均<0.05];在20 mg·kg-1ConA作用下,三组小鼠血清AST和ALT水平无统计学差异,但BABL/c小鼠(4/10)和C57BL/6J小鼠(5/10)死亡率显著高于KM小鼠(1/10);在30 mg·kg-1ConA作用下,三个品系小鼠死亡率均较高(KM小鼠为30%,BABL/c和C57BL/6J小鼠均为100%)。结论不同品系的小鼠对ConA的耐受性不同,KM小鼠对ConA的耐受性明显优于BABL/c小鼠和C57BL/6J小鼠,且呈剂量依赖性。

单分散交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂的制备及亲合纯化伴刀豆球蛋白-A

采用一步种子溶胀聚合法制备了颗粒呈单分散的交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂 ,对其环氧基的组成比进行了表征 ,并以氨基葡萄糖为配基 ,首次制备了纯化粗品伴刀豆球蛋白 A (Con A ,Ⅲ )的聚合物基质的高效亲合色谱柱。配基在树脂上的键合量为 8.2mg g ,对纯化后的Con A 的吸附量为 13.4mg g。使用该亲合色谱介质成功地从粗品Con A中快速纯化了Con A ,电泳分析显示为一个主要的谱带 ,纯度从 15 %提高到 95 %。

二甲双胍激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)缓解伴刀豆球蛋白A诱导的小鼠急性爆发型肝炎

目的研究二甲双胍(Met)对伴刀豆球蛋白A(ConA)所致急性爆发型肝炎小鼠的保护作用并探索其机制。方法C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(NC组)、ConA组、Met组,每组8只。后两组分别灌饲0.2 mL生理盐水和100 mg/kg Met连续5 d后,尾静脉注射0.1 mL ConA(25 mg/kg)建立小鼠急性爆发型肝炎模型,18 h后处死。全自动生化分析仪检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)及总胆红素(TB)水平;HE染色观察小鼠肝组织病理改变;免疫组织化学染色法检测肝组织巨噬细胞浸润;实时定量PCR检测肝脏组织白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达;血细胞分析仪检测小鼠外周血白细胞(WBC)总数及其中淋巴细胞数量,流式细胞术检测脾细胞中Th17细胞比例;免疫荧光组织化学染色检测肝组织胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达;Western blot法检测肝组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和磷酸化的AMPK蛋白表达。结果与ConA组相比,Met组小鼠血清ALT、AST及TB明显下降,肝病变减轻,巨噬细胞浸润减少,外周血白细胞总数及其中淋巴细胞数量增多,脾脏中Th17淋巴细胞比例下调,IL-1β、IL-6及TNF-α的水平降低,凋亡下降,磷酸化的AMPK的表达升高。结论Met通过激活AMPK,降低Th17细胞比例,抑制肝脏炎细胞浸润和炎细胞因子产生,减轻ConA诱导的肝损伤。

伴刀豆球蛋白A中铽(Ⅲ)和钴(Ⅱ)之间的能量转移——一种新的金属离子之间距离的探针

基于Frster偶极-偶极无辐射能量转移机理估测溶液状态下能量给予体和接受体之间的距离已广泛应用于生物大分子的构象分析中,但仍局限于有机物基团之间的距离测定,Horrocks等人用铽和钴离子作为探针测定了嗜热菌蛋白酶分子内一个钙离子与锌离子之间的距离。

伴刀豆球蛋白A与巨噬细胞膜上受体作用下膜变形性及细胞吞噬能力变化

本文采用图像分析、相差显微、生物活性测定等技术,研究ConA与巨噬细胞膜受体结合后对细胞行为与功能的影响. ConA与受体结合后巨噬细胞膜面积增大、变形性和吞噬能力增强、细胞产热量增加,表明细胞膜结构与功能发生变化.本实验是将图像分析技术用来研究相对图像采集速度要慢得多的活细胞特性的一次成功尝试.