家蚕伴性赤蚁基因(sch)连锁的RAPD标记及相关分析

家蚕伴性赤蚁基因(sch)温敏性的发现为雄蚕品种选育研究开辟了新的途径。为获得sch基因的DNA序列,采用RAPD技术,对sch的近等位基因系进行随机扩增,得到一条能稳定扩增、与sch基因连锁的特异片段,并对该序列进行了克隆、测序与分析。结果表明,该序列是家蚕固醇载体蛋白-x(sterol carrier protein x,SCPx)基因的一部分,根据测序结果命名为OPD02-759。设计特异引物进行PCR扩增和测序,获得了sch蚕SCPx基因的酮酯酰CoA硫解酶结构域(3-ketoacyl-CoA thiolase)的完整序列。序列长1107 bp,编码369 aa,分子量为39.3 kD,与正常家蚕该结构域有15个核苷酸的差异,翻译后有5个氨基酸的差异,且其中2个发生在保守区域,此突变正好是RAPD扩增时出现特异带的随机引物结合位点。

伴性赤蚁基因(sch)的RAPD分子标记研究

用夏芳♂、夏ｓｃｈ♂、秋白♂、秋ｓｃｈ♂两对近等位基因系为材料，采用随机引物进行 ＰＣＲ扩增。通过９０个随机引物，在夏ｓｃｈ♂中得到ＯＰＤ０２－４００ｂｐ多态性特异带，用秋白、秋ｓｃｈ进 一步验证确认：ＯＰＤ０２－４００ｂＰ是ｓｃｈ基因的 ＲＡＰＤ标记。将获得的分子标记 ＤＮＡ片段回收纯化 后，克隆到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ－ＩＩＳＫ载体上。