14株苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白对猪蛔虫第3期幼虫的毒性比较

14株苏云金芽孢杆菌经培养提取伴胞晶体蛋白并测定其蛋白含量。感染性蛔虫卵经胃感染小鼠 ,3d后宰杀并从小鼠肝脏内分离蛔虫第 3期幼虫 (L 3)。设置空白对照 ,将不同剂量的 Bt伴胞晶体蛋白与 L 3置于培养孔在 37℃的二氧化碳培养箱中 (含 5 % CO2 )培养 ,间隔 12 h检查幼虫活性 ,计算死亡率、校正死亡率及半数致死量。L D50 随着作用时间的延长而逐渐减小。14株细菌伴胞晶体蛋白对 L 3的毒力差异很大。 0 17株对 L 3的杀虫作用快速而持久、毒力最强 ,其 L D50 是所有 14个菌株中最小的 ,作用 12、2 4和 36 h时分别为 1.135 7、0 .2 32 2和 0 .15 32 g/ L。

化学杀虫剂对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体的影响

研究了 7种常用化学杀虫剂对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体的影响及作用 ,结果表明 ,常用浓度下 ,2 .5 %溴氰菊酯乳油、4 8%毒死蜱乳油对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体无影响 ,可与苏云金杆菌制剂事先做成混剂 ;4 .5 %高效氯氰菊酯乳油、2 .5 %高效氯氟氰菊酯乳油、2 0 %灭多威和 4 0 %辛硫磷在短时期内对芽孢及伴胞晶体无明显影响 ,可与苏云金杆菌制剂现混现用 ;80 %敌敌畏乳油(5 0 0倍稀释 )对苏云金杆菌伴胞晶体有明显损伤作用 。

类似S-层蛋白的苏云金芽胞杆菌伴胞晶体蛋白基因的克隆

芽胞杆菌CTC菌株被鉴定为苏云金芽胞杆菌 ,鞭毛血清型H2 ,幕虫亚种 ;产生卵圆形伴胞晶体 ,伴胞晶体蛋白为 1 0 0kD ;测定了该蛋白的N 末端序列 ,该序列与炭疽芽胞杆菌的细胞表面S 层蛋白具 92 %～ 93%相似性 ;根据Southern杂交制作了该晶体蛋白基因ctc所在位置的限制性酶切图谱 ,分别克隆了该基因 5′和 3′端所在的 2 9kbXbaI片段和 3 1kbClaIDNA片段 ,彼此间具 0 6kb重叠 ,通过拼接获得含完整ctc基因的克隆。含该基因的大肠杆菌与表达S 层蛋白的大肠杆菌具相似生长特征。初步表明CTC菌株的伴胞晶体由细胞表面S 层蛋白组成。苏云金芽胞杆菌区别于蜡状芽胞杆菌和炭疽芽胞杆菌的唯一标准是能形成伴胞晶体 ,由于S 层是细胞表面的结构成分 。

苏云金芽孢杆菌中华亚种CT-43菌株伴胞晶体蛋白的特性

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)为革兰氏阳性细菌,在其芽孢形成过程中可产生一种对鳞翅目、双翅目和鞘翅目幼虫有高毒力的蛋白质伴胞晶体,近来又发现它对动、植物寄生线虫以及扁形动物门的一些种类有毒,现已成为芽孢杆菌的第二大研究对象。

苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S-层蛋白可以形成伴胞晶体

苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis)CTC菌株产生卵圆形伴胞晶体 ,晶体蛋白分子量为 1 0 0kD ;透射电子显微镜观察结果表明该菌株有S 层结构 ,而且在母细胞内可以形成伴胞晶体和S 层的初体结构 ;其蛋白基因导入苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB1 71后 ,扫描电子显微镜观察结果表明转化子能形成晶体 ,而其形状与CTC菌株的相同 ;转化子晶体蛋白的分子量大小也与CTC菌株的相同 ,为 1 0 0kD。以上实验结果结合以前晶体蛋白N 末端测序和基因核苷酸序列 ,表明苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S

经高浓度味精废水驯化的B.t菌株伴胞晶体特性及其活性成分研究

对 3株能在味精废水中生长的苏云金芽孢杆菌菌株T .4、G .1、S - 2 .5进行了废水茄子瓶培养基培养 ,应用液体双相法分离晶体 ,通过SDS -PAGE电泳确定了它们的分子量为 12 0KD、10 4KD、6 7- 6 8KD、43-45KD ;选取菌珠G .1经分离后的晶体通过DEAE -纤维素离子交换层析和SephadexG - 10 0凝胶排阻层析分离到两个峰 ,分子量分别为 12 0KD、6 8KD ,致死中浓度LC50 分别为 0 .6 0 9、>2 5。

苏云金芽胞杆菌伴胞晶体毒素对小鼠体内猪蛔虫三期幼虫的作用及其免疫组织化学定位

将培养好的感染性猪蛔虫卵以每只5×103个虫卵感染小鼠,于次日以不同方式(灌胃、肌肉注射、静脉注射和腹腔注射)注入苏云金芽胞杆菌伴胞晶体蛋白(insecticidal crystal proteins,Icps),对照组静脉注射BSA(小牛血清白蛋白),每只0.5mL,连续3d。小鼠于第6天剖杀,肝脏分离幼虫,计算减虫率。取肝脏,以4%多聚甲醛固定48h,制作石蜡切片,应用免疫组织化学SABC法定位蛔虫幼虫体内的Icps。研究结果显示,静脉注射晶体蛋白毒素效果最好,减虫率达到72.7%;肌肉注射、灌胃、腹腔注射效果次之,分别为19.1%、14.6%、14.36%。免疫组织化学研究显示,Icps结合到虫体的体表及肠道。

苏云金芽胞杆菌的伴胞晶体毒素对捻转血矛线虫第2期幼虫的毒力

苏云金芽胞杆菌的伴胞晶体毒素对捻转血矛线虫第２期幼虫的毒力王祥，姚宝安（华中农业大学畜牧兽医学院，武汉４３００７０）关键词苏云金芽胞杆菌，伴胞晶体毒素，捻转血矛线虫，第二期幼虫ＴＨＥＴＯＸＩＣＩＴＹＯＦＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓＣＲＹ...

抗生素类作为防腐剂对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体的影响

报道了 1 4种抗生素作为防腐剂对苏云金杆菌CH菌株芽孢萌发的抑制作用和对伴胞晶体的影响。结果表明 ,红霉素、盐酸环丙沙星对CH菌株芽孢萌发有较强的抑制作用 ,在 0 5μg/mL低剂量下可抑制芽孢的萌发 ;氧氟沙星和麦迪霉素抑制作用稍差 ,在 5μg/mL的剂量下抑制作用随时间延长而减弱 ,96h后基本丧失抑制作用。其它几种抗生素对苏云金杆菌芽孢萌发的抑制终浓度均在 30 μg/mL以上 ;SDS -PAGE分析和生物测定表明 ,红霉素、盐酸环丙沙、氧氟沙星和麦迪霉素对伴胞晶体均无明显损伤作用 ,其中氧氟沙星 45oC条件下放置 4d,发酵液毒力保持率为 96 2 %。

杨树筛管/伴胞复合体细胞程序性死亡的超微结构分析

利用电镜技术研究美洲黑杨次生韧皮部筛管和伴胞发育过程中细胞超微结构的动态变化,观察到筛管和伴胞由同一个次生韧皮部衍生细胞分裂分化形成。筛管的发育历经未成熟期、成熟期和衰退期的变化。未成熟期筛管分子表现为细胞的径向扩展、壁的增厚、筛管质体和P-蛋白质的产生;成熟期筛管分子细胞组分发生选择性自溶,细胞核核质弥散状,核膜不清晰,或核膜清晰而核物质降解,最后细胞核完全解体转化为P-蛋白质类的物质;衰退期筛管分子细胞质完全解体消失,失去功能。在筛管成熟期间,伴胞的细胞质较浓,内含丰富的核糖核蛋白体、线粒体等细胞器,与筛管相连的细胞壁上具有胞间连丝。随着筛管功能的衰退,伴胞表现出典型的细胞程序性死亡特征,细胞质内质网库槽膨大,细胞核核周腔出现,染色质凝聚边缘化,最后细胞完全解体消失。总之,美洲黑杨次生韧皮部筛管发育首先经历了细胞去核化的过程,在维持一段时间的生理功能后细胞质逐渐解体消失,与此同时伴胞细胞核、细胞质降解。笔者推测筛管与伴胞一起作为功能复合体共同完成各自的细胞程序性死亡过程。

伴胞细胞中表达的组蛋白脱甲基化酶感受发育信号调控开花时间

开花是高等植物发育过程中一个非常重要的转化过程，它能够保证植物的正常发育和后代的延续，并且有重要的农业价值和观赏价值[1]．开花时间的调控是一个非常复杂的过程，受到自身发育信号和外部环境因素的共同影响[2-3]．FLC是拟南芥开花调节过程中的中心抑制因子，其在拟南芥顶端分生组织和叶片维管束的伴胞细胞中均有表达，并且这两个部位的FLC对开花时间都有重要的调节作用[4]．目前已知的多数影响开花的通路都通过调节顶端FLC的表达来调控植物开花时间，关于伴胞细胞中的FLC如何被调控的研究还非常少[1, 3]． 在动植物中都存在一类具有JmjC结构域的蛋白质，是一类保守的组蛋白脱甲基化酶[5]．我们实验室最近的工作表明，JMJ18是一个受植物自身发育调节的H3K4脱甲基化酶，JMJ18主要在伴胞细胞中表达，通过特异调节伴胞细胞中的FLC调控植物开花时间[6]． Yang等[6]实验证实在体外全长的JMJ18可以特异性地以H3K4m3的多肽为底物，脱掉其上一个甲基生成H3K4m2．在拟南芥中，JMJ18主要在伴胞细胞中表达，并且表达水平受到植物自身发育进程的调控[4]．JMJ18功能缺失突变体呈现弱的晚花表型，而JMJ18的超表达植株呈现明显的早花表型，说明JMJ18参与了拟南芥开花时间的调控[4].尽管多个具有JmjC结构域的组蛋白脱甲基化酶，如 JMJ14、ELF6/JMJ11、REF6/JMJ12等都参与了拟南芥开花时间的调节，但是机制都不太清楚[5, 7]，并且目前没有发现可以直接调控FLC的JmjC蛋白．Yang等的实验证实JMJ18可以结合到FLC的染色质上，通过降低FLC的染色质H3K4m3和H3K4m2修饰抑制FLC表达．FLC表达水平的降低导致FT表达的释放，促进FT在伴胞细胞中积累．积累的FT从伴胞细胞进入筛管组织，进而运输到顶端分生组织，与顶端分生组织特异性表达的bZIP转录因子FD直接相互作用，通过调节下游基因SOC1和AP1调控植物开花进程（图1）． 最近的研究发现，植物开花时间除了受到春化作用、自主途径、光周期途径、GA途径等调控以外，还可以通过自身年龄衡量因子miR156和其靶基因SQUAMOSA PROMOTER BINDING-LIKE （SPLs）调节开花进程[8]．Yang等实验证实：JMJ18主要在韧皮部的伴胞细胞表达．并且同miR156类似，在植物营养生长时期，JMJ18随着发育进程的深入表达水平逐渐升高．SUC2启动子驱动JMJ18在维管伴胞细胞中表达时也出现早花表型并且依赖于FT．这些研究结果表明，同miR156类似，JMJ18受植物自身发育调节，也可能作为自身年龄衡量因子调控植物开花时间，不同点是JMJ18是通过组蛋白修饰直接调节FLC表达调控开花时间的自身年龄衡量因子．即可能有两条感受自身年龄的途径：miR156-SPLs和JMJ18-FLC/MAFs途径，让人感兴趣的是两个因子都是表观遗传调控因子，而且在每个途径中均是前者负调控后者，而且后者均为一个转录因子基因家族，这两个途径最后都调控FT表达．这两个途径之间的关系也是一个有待于研究的科学问题，这可能会对于我们理解自身年龄衡量因子在植物开花进程中的作用有一定的启示．

苏云金芽孢杆菌的伴胞晶体形成过程分析

通过对苏云金芽孢杆菌的伴胞晶体的染色形成过程的观察,分析其形成的影响因子,掌握伴胞晶体形成和积累的因素。

苏云金芽胞杆菌伴胞晶体毒素对捻转血矛线虫第3期幼虫杀灭作用的研究

本实验选出苏云益芽胞杆菌菌株YBT－007、YBT－008、YBT－017、YBT－020、YBT－021、YBT—027、YBT—030、YBT－031、YBT－032、YBT—037等10种进6培养，提取伴购晶体毒素，从山羊胃肠内取粪便培养捻转血示残虫第三期幼虫，测定该10种菌株的伴胞晶体毒素对捻转加示线虫第三期幼虫的杀灭作用。结果表明，不同菌株在同一条件（同剂量、同时间）下，对幼虫的毒力作用不同；同一菌株在同一剂量，不同时间条件下，及同一时间、不同剂量条件下对幼虫的杀灭作用也不同。

利用HPLC测定二硫苏糖醇(DTT)对苏云金芽孢杆菌伴胞晶体降解的影响

利用 HPLC测定二硫苏糖醇 (DTT)对苏云金芽孢杆菌伴胞晶体降解的影响。结果表明 ,放置时间对DTT溶液的变化影响显著 ,随着 DTT放置时间的延长 ,2个峰的保留时间都随之延长。利用不同浓度的 DTT降解 Bacillusthuringiensis,伴胞晶体时 ,其检测结果都出现保留时间小于 1 5.0 0 min的 4个主峰 ,与 DTT单独添加在 Na2 CO3 - HCl缓冲液 1 h后检测的保留时间大于 2 5.0 0 min的 2个峰明显不同 ,也比伴胞晶体单独添加到 Na2 CO3 - HCl缓冲液 1 h后检测的结果多了 1个新峰 ,并且峰高显著增加 ,这表明 DTT对晶体起到降解作用。峰 1和峰 4的保留时间与 Na2 CO3 - HCl缓冲液所测到的色谱特征峰相近 ,峰 2和峰 3为 Na2 CO3 -HCl缓冲液不具有的。在用不同浓度的 DTT在 37℃下降解 B.t.伴胞晶体 1 h后 ,立即用 HPLC进行检测的结果表明峰 2高于峰 3,峰 2的高度与 DTT的浓度成正相关 ;放置 2 4 h后所有处理中峰 2的高度都下降 ,峰 3的高度都高于峰 2 ,峰 2 (Y1 )和峰 3(Y2 )的峰高都与 DTT的浓度 (x)成指数增长 ,Y1 =1 9.1 33e0 .0 1 4 8x (R2 =0 .970 8)和 Y2 =2 9.0 62 e0 .0 1 68x(R2 =0 .9589) ;上述结论表明在 DTT的作用下 ,伴胞晶体不断地被降解 ,使得峰3不断增高 ,DTT的消耗 ,使得峰 2下降 ;随着 DTT浓度的增大 ,

苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白提取方法比较研究

采用液体双相分层法和等电点沉淀法提取苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白．原子力显微镜观测，发现液体双相分层提取的晶体蛋白具有完整典型的晶体结构；等电点法提取的得率高，不能检测到完整的晶体结构．聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，等电点法提取的蛋白质含量是液体双相法提取的蛋白含量的1～2倍．将2种方法提取的晶体蛋白对初孵棉铃虫幼虫生物测定均表现杀虫生物活性，经统计分析，液体双相法提取的蛋白质生测毒力比等电点法的高1．5～3倍．

产生伴胞晶体的芽胞杆菌CTC菌株的16S-23SrRNA间隔区分析

根据能形成伴胞晶体的特征,芽胞杆菌CTC菌株被鉴定为苏云金芽胞杆菌幕虫亚种。但该菌株明显不同于典型的苏云金芽胞杆菌,因为其伴胞晶体蛋白并不是由杀虫晶体蛋白基因编码,而是编码细胞表面S 层蛋白基因的产物,且伴胞晶体蛋白没有检测到对昆虫的毒性。本研究基于对CTC菌株及参照菌的16S-23SrRNA间隔区、编码S 层蛋白的基因进行扩增并测序,从系统发育水平检测到CTC菌株明显与苏云金芽胞杆菌幕虫亚种典型菌株T02存在差异,表明芽胞杆菌CTC菌株更接近蜡状芽胞杆菌。

桑叶细脉中伴胞的超微结构研究

为了解桑叶细脉中伴胞的超微结构,采用透射电子显微技术对桑叶细脉中伴胞进行观察,着重伴胞与相邻细胞界面上胞间连丝发生频率。结果表明,(1)伴胞含丰富细胞器,细胞壁光滑,无壁内突;(2)伴胞细胞壁上具有大量胞间连丝,胞间连丝通常聚集,并常发生分枝;(3)伴胞与不同类型细胞界面上的胞间连丝发生频率有差异,伴胞-维管束鞘细胞界面上发生频率为25.12±1.83个/μm2,伴胞-伴胞界面上20.18±1.7个2/μm2,伴胞-维管薄壁细胞界面上5.42±0.6个/μm2。基于上述观察,认为桑叶细脉中的伴胞属于1-2a型,韧皮部装载途径属于共质体类型。

紫外分光光度法测定苏云金杆菌187菌株伴胞晶体蛋白的应用研究

用紫外分光光度法测定187菌株的晶体蛋白含量,借此推算其制剂的效价,并将此法与常规的生物测定法进行平行比较,发现两者所得结果的符合率达90%以上,紫外分光光度法具有更为简便、快速等突出优点。

紫外分光光度法测定苏云金杆菌187菌株伴胞晶体蛋白的应用研究

用紫外分光光度法测定187菌株的晶体蛋白含量,借此推算其制剂的效价,并将此法与常规的生物测定法进行平行比较,发现两者所得结果的符合率达90%以上,紫外分光光度法具有更为简便,快速等突出优点.

苏云金杆菌伴胞晶体蛋白基因工程菌制剂及转基因抗虫植物遗传工程的研究应用进展

本文就苏云金杆菌伴胞晶体蛋白的遗传基因工程及抗虫植物遗传工程的研究和应用进展进行了综述．