JL-02多位点探针DNA指纹的法医学应用研究

以自制的JL－02探针进行了DNA指纹分析，对北京地区无关个体进行了调查，计算出任意两无关个体的偶合机率为6．6×10－15；家系分析表明，谱带在亲代与子代间的传递符合孟德尔遗传规律；同一个体不同组织的DNA指纹图相同；混合斑精子DNA指纹图与相应男性血液DNA指纹图完全相同；该探针对0．5μg的基因组DNA杂交，可获得清晰可辩的DNA指纹图。证明了新探针适用于法医物证检验中的个人同一认定及亲子鉴定。

中药活性成分山萘酚与牛血清白蛋白相互作用的研究

应用光谱法研究了中药活性成分山萘酚(Kaempferol)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用,探讨了山萘酚对BSA的荧光猝灭过程的机理,测定了不同温度下该结合反应的结合模式、结合常数、结合位点数、结合热力学参数等;并利用经典位点探针试剂华法林(Warfarin)和布洛芬(Ibuprofen)研究了山萘酚与BSA作用的具体部位在位点Ⅱ。

基于微滴式数字聚合酶链式反应检测EGFR基因Ex19del和L858R突变方法的优化

目的为采用微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)技术建立并优化检测EGFR基因敏感突变[19外显子缺失(Ez19del)和21外显子L858R突变(L858R)]的方法。方法应用新型位点一参考探针法检测Er19del突变,采用传统野生-突变探针法进行L858R突变检测分析。应用温度梯度法优化2种突变检测方法的退火温度,并分析其特异度和灵敏度等。结果实现Ea19del突变多重位点缺失一次性检测,确定最佳退火温度为60.1℃,所建立方法具有良好的特异度,灵敏度分析显示突变检测下限为0.5%;L858R突变检测方法退火温度设定为58.2℃,特异度良好,通过灵敏度检测确定检测下限为0.1%。结论应用ddPCR成功建立并优化EGFR基因E19del和L858R敏感性突变的检测方法,为ddPCR的临床应用提供更多参考与支持。

基于微滴式数字PCR的KRAS基因外显子2密码子12/13突变检测方法的建立

目的 应用微滴式数字PCR技术(ddPCR)建立鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)外显子2密码子12/13多种突变类型一次性检测。方法 采用位点-参考探针法设计探针及引物,建立KRAS基因外显子2密码子12/13多位点突变反应体系,优化反应条件及退火温度,分析所建立方法的灵敏度和特异度,并进行实例验证。结果 成功建立KRAS基因多位点突变一次性检测的方法,并确立最佳退火温度为63℃。该方法特异度良好,灵敏度分析示最低检测限为0.5%,实例验证可应用于组织样本检测。结论 成功建立基于ddPCR技术KRAS基因外显子2密码子12/13突变检测方法,实现多位点突变一次性检测,其中仅需两类探针和一对PCR引物。