多重位点特异性PCR法同时鉴别牛膝和川牛膝配方颗粒

目的建立一种同时鉴别牛膝和川牛膝药材及配方颗粒的多重位点特异性PCR鉴别方法。方法通过比较牛膝属相近物种核基因ITS序列,设计牛膝和川牛膝的特异性引物,经过优化PCR反应体系及PCR反应条件,建立了牛膝和川牛膝配方颗粒的多重位点特异性PCR鉴别方法。结果在退火温度为58℃、循环次数为31时,牛膝和川牛膝配方颗粒分别可扩增出187 bp和164 bp的特异性条带。该方法对牛膝和川牛膝药材的掺伪检出限分别为1%、5%,对两者配方颗粒的掺伪检出限分别为10%、50%。结论所建立的多重位点特异性PCR鉴别可有效鉴别牛膝和川牛膝配方颗粒及其掺伪体系。

鳖甲配方颗粒的位点特异性PCR鉴别研究

目的:建立一种鳖甲配方颗粒特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法。方法:根据中华鳖Trionyx sinensis及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COXⅠ)基因序列,筛选出中华鳖的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,设计鳖甲鉴别专属引物BJ-5F及BJ-5R。通过优化PCR反应条件,确定最佳的PCR反应体系,并对该方法进行耐受性、适用性考察和测序验证。结果:当退火温度为60℃,循环33次时,鳖甲药材、标准汤剂冻干粉及配方颗粒均可在约236 bp处得到清晰单一的中华鳖条带,其混伪品及阴性对照品均无此条带。结论:该研究所建立的特异性PCR鉴别方法适用于快速鉴定鳖甲药材、标准汤剂冻干粉及配方颗粒的真伪,且具有专属性强、准确性高、简便易行等特点,为鳖甲配方颗粒质量标准的制定提供了参考依据。

紫苏属药用植物的rDNA ITS区SNP分子标记与位点特异性PCR鉴别

目的 分析单种属——紫苏属各变种间rDNA ITS区的序列以及存在的单核苷酸多态性（SNP）现象，设计出位点特异性PCR引物，用于紫苏属各变种间的分子标记鉴别。方法 对紫苏属各变种多个体的rDNA ITS区全序列进行了准确测定，运用Clustral X1．8，MEGA3．0进行排序并进行SNP分析，从而设计出鉴别各变种的等位基因位点特异性PCR鉴别引物。结果 紫苏属各变种（紫苏、白苏、鸡冠苏和耳齿紫苏等）的rDNA ITS区全序列共有615～618bp的长度，ITS1为233～235bp，5．8S为179bp，ITS2为203～204bp，GC含量为61．5％～61．9％。从rDNA ITS区碱基变异的整体情况来看，紫苏属各变种间不仅在非编码的转录间隔区ITS1和ITS2内存在非编码区单核苷酸多态性（ncSNP），而且在保守的5．8S编码区内也存在3个位点的单核苷酸多态性，即编码区SNP（cSNP），所有的SNP均只具2等位多态性。5．8S区cSNP的出现与产生该变异的变种出现的显著形态差异关联。本文还利用这些SNP位点设计出了鉴别紫苏属各变种的位点特异性PCR引物，无需测序即可对紫苏属的原植物及“苏子”、“苏叶”等药材进行有效准确的分子鉴别。结论 紫苏属药用植物rDNA ITS区存在的SNP可用作紫苏属各变种鉴别的分子标记。

齿瓣石斛的位点特异性PCR鉴别

目的 设计出齿瓣石斛的位点特异性鉴别引物 ,仅通过PCR就能完成对齿瓣石斛真伪进行准确鉴别。方法 根据齿瓣石斛及其他枫斗类、黄草类石斛的rDNAITS序列数据库 ,设计了齿瓣石斛的位点特异性PCR鉴别引物JB Chiban 0 1S和JB Chiban 0 1X。然后 ,对 38种石斛属植物模板DNA进行了PCR扩增 ,阳性者即为齿瓣石斛正品。结果 当退火温度设定为 5 8℃时 ,只有齿瓣石斛的模板DNA能被扩增出来 ,而其他的 37种石斛属植物均为阴性。该鉴别反应重复性好 ,已在鉴别齿瓣石斛时发挥重要作用。结论 运用位点特异性鉴别引物能成功地对齿瓣石斛进行PCR鉴别 ,与DNA测序鉴别方法相比 ,位点特异性PCR具有高效、准确、简便、省时等优点。

兜唇石斛的位点特异性PCR鉴别

根据兜唇石斛及其它37种枫斗类和黄草类石斛的rDNAITS序列,设计了鉴别兜唇石斛的位点特异性PCR引物DC JB01S和DC JB01X,并对兜唇石斛成功地进行了位点特异性PCR鉴别.在进行位点特异性PCR鉴别之前,首先运用扩增ITS区的通用引物P1、P2对模板DNA进行扩增,以验证模板的可靠性和扩增的合适浓度.当退火温度上升为64℃,只有兜唇石斛的模板DNA能被扩增出来,而其它的37种石斛属植物均为阴性.该鉴别反应重复性好,已在鉴别我国兜唇石斛中发挥重要作用.与DNA测序鉴别方法相比,位点特异性PCR具有简单、省时、高效、准确等优点.

中药材鳖甲的位点特异性PCR鉴定研究

目的 本研究旨在建立一种简便、实用的鳖甲 DNA分子鉴定方法。方法 根据中华鳖和鳖甲混淆品原动物的 12 S r RNA基因片段的序列数据库 ,找出中华鳖与其它鳖科动物有明显区别的位点 ,设计 1对能特异性鉴别中华鳖的引物 ,然后利用鳖甲中残存的 DNA,通过 PCR扩增 ,即可准确鉴别鳖甲。结果 用这对引物对不同来源的10块鳖甲进行鉴定结果表明 ,其中有 3块为伪品 ,结果与 DNA序列分析鉴定一致。还测定了斑鼋和鳖甲一伪品12 S r RNA基因片段序列。结论 该引物配置药材鉴定试剂盒可在鳖甲类药材鉴定使用。

FLP/FRT位点特异性重组系统在高等真核生物中的研究进展

来源于酵母2μm质粒的FLP/FRT位点特异性重组系统已经被广泛应用于拟南芥、水稻、小鼠、果蝇、线虫等高等真核模式生物,正逐渐成为转基因动植物研究领域进行基因操作的强有力工具。笔者综述了FLP/FRT系统的重组原理及其在高等真核生物中的应用,系统地概述了该系统在转基因植物、哺乳动物、昆虫以及其它相关高等真核模式生物中的研究现状,讨论了FLP/FRT系统在研究中存在的主要问题、应用前景和发展方向。

金钗石斛的位点特异性PCR鉴别研究

目的建立一种简便、实用的金钗石斛的DNA分子鉴别方法。方法根据金钗石斛及其他黄草类、枫斗类石斛的rDNA ITS序列数据库,寻找金钗石斛特异性的序列位点,设计专用于金钗石斛鉴别的PCR引物,用该引物在不同条件下扩增石斛属植物的模板DNA,建立只有金钗石斛具有阳性扩增的PCR鉴别条件。结果在66℃、40 s的复性条件下进行鉴别PCR,金钗石斛的模板DNA扩增出约300 bp的阳性扩增带,而其他39种石斛的模板DNA在同样条件下无扩增产物。结论运用位点特异性PCR能有效地从其他石斛属植物中鉴别出金钗石斛,该方法具有高效、准确、简便、省时的特点,应用前景广泛。

霍山石斛及相似种的位点特异性PCR鉴别

目的设计出霍山石斛的位点特异性鉴别引物,仅通过PCR就能对霍山石斛的真伪进行准确鉴别。方法利用石斛属植物基因库中rDNA ITS序列数据库进行同源性比较,在与霍山石斛差异较大的区段设计1对特异性引物,然后对19份石斛属植物DNA模板进行PCR扩增,阳性者即为霍山石斛正品。结果发现在退火温度为60℃时,该引物能把霍山石斛的模板从19份石斛属植物中扩增出来,而其他的石斛属植物均为阴性。结论运用位点特异性鉴别引物成功地对霍山石斛进行PCR鉴别,该鉴别反应重现性好,能在霍山石斛鉴别时发挥重要的作用,与形态学、DNA测序等鉴别方法相比,该方法具有高效、准确、简便、省时等优点。

Cre/lox位点特异性重组系统在高等真核生物中的研究进展

来自于P1噬菌体的Cre/lox系统通过位点特异性重组可以迅速而有效地实现各种生理环境下的基因定点插入、删除、替换和倒位等操作。Cre/lox系统作为目前基因打靶技术的核心工具,已被广泛应用于拟南芥、水稻、小鼠、果蝇、斑马鱼等高等真核模式生物。文章较为全面地介绍了Cre/lox系统的基本概况及其在高等真核生物中的应用,讨论了Cre/lox系统在研究中存在的主要问题和今后的发展方向,为利用该系统在不同高等生物中进行基因操作提供有用的参考。

球花石斛的位点特异性PCR鉴别研究

为建立球花石斛的DNA分子标记鉴别方法,本文根据测定及GenBank上登录的109种共计164个石斛样本的rDNAITS序列,设计了特异性鉴别引物QH-JB1和QH-JB2,并对球花石斛进行了位点特异性PCR鉴别研究。结果表明,当复性条件为63.5℃,1min时,只有球花石斛的模板DNA能被扩增出约300bp的阳性扩增带,而其他种石斛均为阴性。证明用本法鉴别球花石斛简便、省时,也适用于干燥球花石斛药材的鉴别,具有广泛的应用前景。

应用位点特异性引物鉴定白花蛇舌草

目的 :建立一种简便实用的白花蛇舌草药材的DNA分子鉴定方法。方法 :收集目前市场上出现的白花蛇舌草及伪品共 9种 ,分别提取总DNA ,扩增rDNAITS 2区序列 ,对比所有样品的该段核苷酸序列 ,并设计能专一性鉴别白花蛇舌草的位点特异性引物。结果 :白花蛇舌草及其混淆品在ITS 2区的序列有显著差异。用位点特异性引物对所有样品DNA进行PCR扩增 ,只有白花蛇舌草有明显的约 392bp扩增产物 ,而其它 8种植物在同等条件下无阳性产物。结论 :所设计的鉴别引物对白花蛇舌草有高度的特异性。

Cre/loxP位点特异性重组系统在植物中应用的研究进展

Cre/loxP位点特异性重组系统自发现以来,在植物基因重组领域得到了广泛应用,已成为提高转基因植物安全性的有效方法。本文介绍了该系统的基本概况及其在转基因植物表达载体构建方面的应用,尤其是在基因删除、定点整合、多基因表达以及杂种优势利用等方面的应用做了重点阐述。

单子叶植物的FLP/frt位点特异性重组系统的构建

来自于啤酒酵母2μm质粒的FLP/frt位点特异性重组系统可用于转基因植物(细胞)筛选完成后去除选择标记基因.水稻肌动蛋白actin基因启动子和玉米泛素ubiquitin基因启动子可有效驱动单子叶植物中外源基因的转录.为培育去除选择标记基因的抗盐耐旱单子叶转基因植物,构建了适合于单子叶植物的FLP/frt位点特异性重组系统.该系统由含有FLP重组酶基因的植物表达载体pCAMBIA3300-Ubi-FLP-bar和含有frt位点的植物双抗(抗除草剂、抗盐耐旱)表达载体pCAMBIA1300-Ubi-TsPPasef-rt-alsf-rtm以及pCAMBIA1300-Actin1-AtNHX1f-rt-alsf-rtm组成.

фC31位点特异性整合酶系统研究进展

介绍了фC31重组酶作用机制、фC31整合酶在基因治疗及其转基因动物研制中的应用、фC31整合酶催化效率的影响因素,以及фC31整合酶整合的安全性。实验证实,фC31-int可作用于多种动植物细胞及组织,将目的基因特异地整合到宿主基因组,使目的基因得以持续、高效地表达。近年来该酶在哺乳动物体内和体外的研究进展表明,фC31整合酶已经成为研究转基因、基因治疗及基因修饰的一种重要工具。

细叶石斛的位点特异性PCR鉴别

根据细叶石斛及其它 37种枫斗类和黄草类石斛的rDNAITS序列,我们设计了位点特异性PCR鉴别引物XY JB0 1S和XY JB0 1X,对细叶石斛进行了成功的DNA分子鉴别.在进行位点特异性鉴别PCR之前,首先运用扩增ITS区的通用引物P1、P2对模板DNA进行扩增,以验证模板的可靠性和扩增的合适浓度.当退火温度上升为 64℃,只有细叶石斛的模板DNA能被扩增出来,而其它的 37种石斛属植物均为阴性.该鉴别反应重复性好,已在鉴别细叶石斛中发挥重要作用.与DNA测序鉴别方法相比,位点特异性PCR具有简单、省时、高效、准确等优点.

启动子CpGs位点甲基化所致BRCA1基因转录抑制作用的位点特异性

目的 研究 BRCA1基因 Cp G岛内各个 Cp Gs位点甲基化与转录水平的关系 ,探讨甲基化所致转录抑制作用的特异性 Cp G位点 ,以阐明 DNA甲基化的作用方式。方法 以 Rice等研究数据为材料 ,用方差分析和多因素线性回归模型等方法进行统计再分析。结果 BRCA1基因 Cp G岛 +8～ +44、- 189～ - 19、- 379～ - 2 5 8、- 37～ - 19和 - 80～ - 19区段内 Cp Gs的甲基化与基因转录抑制有关 ,这些区段内 Cp Gs位点的甲基化数目越多 ,基因转录水平越低。多因素线性回归模型分析表明 ,- 80～ - 19区段的甲基化与转录抑制关系密切。并以 - 2 9Cp G位点甲基化引起的转录抑制作用最强。结论 Cp G岛甲基化引起的转录抑制与 Cp Gs位点有关 ,具有位点的特异性。

Cre/loxP位点特异性重组系统及其在口腔医学领域中的应用

Cre/loxP位点特异性重组系统由Cre重组酶和loxP位点组成。Cre重组酶可识别loxP位点并催化2个loxP位点之间的DNA进行精确的位点特异性重组。该系统作用方式简单、重组效率高,可定时、定位地对基因进行修饰,已成为一种定向改变生物活体遗传信息的重要的试验工具。本文主要就Cre/loxP系统的结构、重组机制、特点及其在口腔医学领域中的应用作一综述。

位点特异性重组技术研究进展

位点特异性重组技术是现代生命科学中研究基因敲除与靶向整合的工具。它的应用实现了外源基因可预测、可重复的高效表达;对于利用模型动物进行基因分析更是具有划时代的意义;在转基因植物中的运用价值同样不可忽视。

φC31整合酶系统介导的位点特异性整合研究进展

来源于链霉菌(Streptomyces)噬菌体φC31的整合酶可介导链霉菌附着位点(attB)和噬菌体附着位点(attP)之间的同源重组,这种重组亦可在多种动植物细胞内进行;而且,该整合酶还可介导含attB位点的载体以位点特异性方式整合于多种真核生物基因组内的假attP位点,并使转基因持续高效表达。因此,φC31整合酶在基因修饰、基因治疗及转基因动物研制等方面得到了广泛的应用。文章就近年来φC31整合酶整合规律、提高效率方面的改进及安全性等相关领域的研究进展进行了综述。