神经营养因子低亲和力受体p75NTR的表达及新药开发

p75NTR作为神经营养因子低亲和力受体,可与各种配体和细胞内因子相互作用后对神经系统产生促存活或致凋亡的不同效应;同时,作为肿瘤坏死因子受体超家族的一员,其在细胞凋亡和神经再生中发挥重要作用。p75NTR的表达与其多潜能性之间密切相关,因此,了解p75NTR在各种类型细胞及损伤或疾病状态下的表达,有助于对其功能或潜在作用进行更深入的研究。本文主要对p75NTR的表达进行综述,并探讨目前靶向作用于p75NTR药物的研究和开发。

神经营养蛋白低亲和力受体p75^(NTR)的结合蛋白

神经营养蛋白通过酪氨酸激酶受体Trk和低亲和力受体p75NTR发挥其多种生理功能。通过蛋白质相互作用的研究技术已确认了十多个与p75NTR相互作用的蛋白质分子 ,它们在结构和功能上都存在显著差异 。

感觉和运动雪旺细胞NGF及其低亲和力受体p75的表达

周围神经损伤后,近端再生的感觉性神经纤维和运动性神经纤维可以大体上特异性地长入相应的雪旺细胞基膜管。这种特异性再生的机制,目前认为主要是远端靶器官的诱导作用,以及局部微环境的选择性作用。由于神经损伤后雪旺细胞明显增殖,而且被证实分泌多种神经营养因子、细胞粘附分子,其细胞膜与轴突的相互作用也决定了轴突的延伸速度和方向。本实验研究的目的就是通过对感觉和运动雪旺细胞体外培养,以与神经纤维再生密切相关的两个因素:神经生长因子(NCF)及其低亲和力受体(p75)的表达为指标,研究两种雪旺细胞的生物学特性是否有差别,从而推断不同性质的雪旺细胞对神经纤维的特异性再生所起的作用。

七氟烷对发育期小鼠海马低亲和力神经营养因子p75和远期认知功能的影响

目的探讨不同体积分数七氟烷麻醉对发育期小鼠海马脑源性营养因子和远期认知功能的影响。方法选取出生后7d的C57BL/6雄性小鼠(由南京大学模式动物研究所提供)182只。取60只小鼠按随机数字表法分为1.0最低肺泡有效浓度(MAC)组、0.5 MAC组和对照组,每组20只,分别给予体积分数为0.025 0(1.0 MAC)和0.012 5(0.5 MAC)七氟烷吸入麻醉或仅吸入体积分数为0.4的O_2,4h后采用Western印迹法测定海马组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Casp_ase-3)蛋白质含量,ELISA法测定外周血S100钙结合蛋白β(S-100β)和海马组织脑源性营养因子前体(pro-BDNF)、低亲和力神经营养因子p75(p75^(NTR))蛋白质含量。另取72只小鼠按随机数字表法分为1.0MAC组、0.5MAC组和对照组,每组24只,分别给予体积分数为0.025 0(1.0 MAC)和0.012 5(0.5 MAC)七氟烷吸入麻醉或仅吸入体积分数为0.4的O_2,4、12周后行Morris水迷宫实验,记录大鼠在90s内穿越原平台位置次数和平台所在象限停留时间。其余50只小鼠分别于麻醉前、吸入1.0 MAC七氟烷麻醉1或2h后、吸入0.5MAC七氟烷麻醉1或2h后5个时间点,每个时间点取10只小鼠测定动脉血pH值、动脉血氧分压(p_aO_2)、动脉血二氧化碳分压(p_aCO_2)和动脉血氧饱和度(S_aO_2)。结果1.0 MAC组和0.5 MAC组外周血S-100β水平,1.0 MAC组海马组织Casp_ase-3、pro-BDNF、p75^(NTR)蛋白质含量,以及0.5 MAC组海马组织Casp_ase-3、p75^(NTR)蛋白质含量均显著高于对照组(P值均<0.05);1.0 MAC组外周血S-100β水平显著高于0.5 MAC组(P<0.05),海马组织Casp_ase-3、pro-BDNF、p75^(NTR)蛋白质含量与0.5 MAC组间的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。麻醉后4周,1.0 MAC组和0.5 MAC组小鼠的穿越原平台位置次数和平台所在象限停留时间均显著少于对照组同时间(P值均<0.05)。麻醉后12周,1.0 MAC组和0.5 MAC组小鼠的平台所在象限停留时间均显著少于对照组同时间(P值均<0.05),1.0 MAC组小鼠的穿越原平台位置次数显著少于0.5 MAC组和对照组同时间(P值均<0.05)。麻醉前、七氟烷1.0 MAC麻醉1或2h、七氟烷0.5MAC麻醉1或2h小鼠的动脉血pH值、p_aO_2、p_aCO_2、S_aO_2的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论七氟烷可损伤发育期海马神经元,使海马p75^(NTR)含量发生改变。降低吸入七氟烷的体积分数可减轻成年后学习记忆障碍。

低亲和性神经营养素受体p75在人胚胎视网膜中的表达

p75神经营养素受体在视网膜的发育以及再生过程中发挥着重要的作用 ,而在人类视网膜中的分布状况尚未被研究 .利用免疫组织化学方法 ,在光镜水平下确定了 p75在人胚胎发育 5、 6和 7个月的视网膜中的分布情况 .在视网膜神经节细胞层出现最强的p75免疫阳性反应 ,在其他各层也有较弱的免疫阳性反应 .在胚胎 6、 7月的视网膜中 ,主要由M櫣ｌｌｅｒ细胞的终足构成的内界膜上出现了比较强的 p75表达 .p75在人胚胎视网膜中的分布情况与大鼠视网膜中很类似 ,主要表达在M櫣ｌｌｅｒ细胞 ,在神经节细胞上也可能有表达 .

NGF及其受体trkA及p75NTR在子宫内膜异位症患者在位内膜中的表达及其与内异症疼痛的关系

目的:研究子宫内膜异位症(内异症)患者在位内膜神经生长因子(NGF)及其受体trkA、p75NTR的表达,探讨上述因子与内异症疼痛的关系。方法:选择就诊于北京协和医院并进行了腹腔镜手术的28例子宫内膜异位症患者作为研究组,非子宫内膜异位症患者10例作为对照组(B组),收集上述患者分泌期在位子宫内膜。根据患者有无痛经,分为内异症疼痛组(A1组,18例)及内异症非疼痛组(A2组,10例)。采用免疫组化比较各组病灶中NGF及其受体trkA、p75NTR的表达,并分析其与痛经的关系。结果:各组在位内膜腺上皮中NGF的表达显著高于间质(P<0.05);内异症疼痛组腺上皮NGF表达较非疼痛组明显升高(359.9±18.7 vs 201.3±34.3,P<0.05)。p75NTR主要在子宫内膜间质细胞中表达;内异症组明显高于非内异症组(58.8±21.1、22.5±16.1 vs 0,P<0.05);内异症疼痛组较非疼痛组p75NTR表达明显升高(58.8±21.1 vs 22.5±16.1,P<0.05)。trkA在非内异症组子宫内膜间质中表达明显高于腺上皮(P<0.05);在内异症组腺上皮中,trkA的表达较非内异症组明显增高(P<0.05);trkA的表达量与内异症患者疼痛无关。结论:p75NTR可能参与内异症的发病,NGF及其受体p75NTR在在位内膜中的表达与患者疼痛相关,表明其可能参与了内异症疼痛发病机制。

神经营养素受体p75NTR介导凋亡的机制及其在眼科的研究

p75NTR是一个跨膜糖蛋白,是属于TNF受体超家族成员。NGF、BCNF、NT-3、NT-4/5都可以与p75NTR结合。表达可诱导神经细胞凋亡,可能的途径是激活鞘磷脂通路和转录因子NF-kB。另外还有一些功能相关蛋白参与p75NTR信号传递。p75NTR与某些视网膜神经细胞凋亡关系密切,相关研究已逐渐成为热点。

神经营养因子受体p75NTR在乳腺癌耐药细胞中的表达及其与多药耐药的相关性

目的:探讨神经营养因子受体p75NTR在乳腺癌耐药细胞中的表达及其与多药耐药的相关性。方法:Western blot检测多种乳腺癌细胞系中p75NTR蛋白表达;基因重组构建p75NTR的正义及反义载体并检测转染p75NTR及p75NTR-si RNA后乳腺癌耐药细胞系MDA-MB-231/ADR中p75NTR蛋白表达;CCK-8法检测MDA-MB-231/ADR对各种化疗药物的敏感性及转染p75NTR及p75NTR-si RNA后对耐药的影响。结果:p75NTR在乳腺癌耐药细胞系中的表达高于亲本细胞;p75NTR过表达载体上调MDA-MB-231/ADR中p75NTR的表达;过表达p75NTR可增强MDA-MB-231/ADR对ADM、GEM和OXA的耐药性。结论:p75NTR在乳腺癌耐药细胞系中的表达高于其亲本细胞,过表达p75NTR能够降低多药耐药细胞对化疗药物的敏感性而促进其多药耐药性。

神经生长因子受体p75NTR对肝癌细胞凋亡的影响及其关键功能域

目的了解神经生长因子(nerve growth factor,NGF)受体p75NTR在肝癌组织和肝癌细胞株HepG2中的表达,探讨p75NTR对肝癌细胞凋亡的影响及其关键功能域。方法收集2006年9月至2008年4月于华中科技大学同济医学院附属同济医院行手术切除患者的肝癌组织标本及对应的癌旁组织标本共26对,应用免疫组织化学法检测trkA和p75NTR在肝癌组织和癌旁组织中的表达。应用Western blot检测NGF在肝癌细胞株HepG2和人胚胎肝细胞株L02中的表达。p75NTR组通过脂质体将p75NTR质粒转染入HepG2细胞中,空载体组将pcDNA3.1空载体转染HepG2细胞,空白对照组为未处理的HepG2细胞。采用Western blot和免疫荧光法检测各组p75NTR的表达。应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)构建p75NTR肿瘤坏死因子2受体相关因子结构域(tumor necrosis factor 2 receptor associated factor domain,TRAF)、突触后密度蛋白结合结构域(postsynaptic density protein domain,PSD)和Ⅱ型死亡结构域(typeⅡdeathdomain,T2DD)突变质粒,转染入HepG2细胞中,应用流式细胞术检测细胞凋亡,采用方差分析和LSD-t检验比较不同功能域点突变对HepG2细胞凋亡的影响。结果免疫组织化学检测表明TrkA和p75NTR在26对肝癌组织和癌旁组织中均未见明显表达。Westernblot结果表明,NGF在HepG2细胞中的相对表达量为0.749±0.302,显著高于L02细胞的0.452±0.290,差异有统计学意义(t=7.421,P=0.037)。p75NTR质粒转染入HepG2细胞株后,应用Western blot和免疫荧光进行验证,均可见p75NTR高表达,而空载体组和空白对照组未见明显表达。流式细胞术检测表明,p75NTR组、空载体组和空白对照组细胞凋亡率分别为(25.3±3.6)%、(3.2±0.7)%、(3.0±0.8)%,差异有统计学意义(F=21.740,P <0.001),其中p75NTR组显著高于空载体组和空白对照组(t=25.230、23.156,P均<0.001),空载体组和空白对照组差异无统计学意义(t=0.417,P=0.692)。进行p75NTR质粒功能域突变后,空白对照组、空载体组、p75NTR组、TRAF组、T2DD组和PSD组的HepG2细胞凋亡率分别为(3.1%±0.8)%、(3.5%±0.6)%、(25.8%±3.3)%、(24.8%±4.1)%、(4.4±0.9)%、(23.4%±3.3)%,差异有统计学意义(F=47.794,P <0.001),其中T2DD组Hep G2细胞凋亡率降至与空载体组一致(t=-0.386,P=0.708);而TRAF组和PSD组HepG2细胞凋亡率与p75NTR组接近(t=0.429、0.987,P=0.677、0.347)。结论 p75NTR在肝癌组织及HepG2细胞中无明显表达,过表达p75NTR可促进肝癌细胞的凋亡,提示p75NTR在肝癌细胞中发挥肿瘤抑制因子的作用,T2DD是其关键功能域。

狂犬病病毒受体P75^(NTR)原核表达的抗原性分析及多克隆抗体制备

【目的】分析狂犬病病毒(Rabies virus,RV)神经营养因子受体P75(P75NTR)原核表达的抗原性及制备出多克隆抗体,为进一步研究RV与P75NTR的相互作用机制奠定基础。【方法】采用RT-PCR从感染Flury株的NA细胞中克隆P75NTR基因,选取P75NTR基因的418~681 nt和831~1080 nt两个区域(共513 nt,编码171个氨基酸),与p ET-32a(+)重组构建原核表达载体,然后转化BL21(DE3)感受态细胞进行表达,再以纯化的P75NTR重组蛋白免疫昆明小鼠制备抗P75NTR抗体,并以Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)检测其抗原性。【结果】以原核表达载体p ET-P75-513转化BL21(DE3)感受态细胞,经0.2 mmol/L IPTG诱导6 h可获得较高表达量的P75NTR重组蛋白,且主要以可溶性蛋白形式进行表达,可用Ni-NTA树脂分离柱进行纯化。经Western blotting和IFA检测,发现制备获得的抗P75NTR抗体能与NA细胞表面自然的P75NTR及转染BHK-21细胞表达的P75NTR发生良好反应,且抗体效价高,可达1∶16000。【结论】原核表达的RV受体蛋白P75NTR抗原性强,免疫小鼠获得的多克隆抗体特异性高,反应性良好。

p75NTR受体过表达对人RPE细胞氧化应激损伤的促进作用

背景脉络膜新生血管（CNV）是多种眼底疾病致盲的病理基础，视网膜色素上皮（RPE）细胞氧化应激损伤在CNV生成中具有重要作用。RPE氧化应激损伤能激活肿瘤坏死因子超家族的p75NTR受体，引起血管内皮细胞增生，但其调控机制尚未明确。 目的探讨RPE细胞中p75NTR受体在CNV形成过程中的作用，并对其作用机制进行分析。 方法体外培养人RPE细胞（ARPE19细胞系），用p75NTR受体过表达质粒转染RPE细胞，分别采用逆转录PCR（RT-PCR）和Western blot法进行转染细胞中p75NTR受体基因和蛋白水平检测，以未转染p75NTR受体过表达质粒的RPE细胞作为对照组。采用BrdU法检测各组细胞的增生活性；采用Annexin V-FITC/PI双染法及流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率；用H2DCFDA荧光法和流式细胞计数检测细胞内活性氧簇（ROS）阳性百分数；采用激光扫描共焦显微镜观察各组细胞线粒体标志物的表达（膜电位）及细胞色素C的表达；采用Western blot法检测和比较各组细胞中裂解caspase-3、Fas及血管内皮生长因子165（VEGF165）蛋白的相对表达水平。 结果p75NTR受体质粒转染组细胞中p75NTR受体的mRNA及蛋白表达量分别是对照组的（6.11±0.77）倍和（7.42±0.48）倍，差异均有统计学意义（t＝11.49、23.17，均P〈0.01）。BrdU法检测结果显示，p75NTR受体质粒转染12、24、36和48 h组细胞的增生活性（A值）率分别为（93.12±0.56）%、（86.30±0.66）%、（72.53±0.86）%和（60.77±2.81）%，对照组为100%，随着p75NTR受体质粒转染时间的延长，RPE细胞活性值逐渐减低，细胞凋亡百分数明显增加，与对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0.05）。p75NTR受体质粒转染组转染后48 h，RPE细胞内ROS相对荧光强度为对照组的2.4倍，差异有统计学意义（t＝16.45，P〈0.01）；对照组RPE细胞中线粒体标志物阳性细胞比例为100%，而p75NTR受体质粒转染组细胞中线粒体标志物阳性细胞比例为（37.30±2.06）%，2个组比较差异有统计学意义（t＝57.71，P〈0.01）。p75NTR受体质粒转染组RPE细胞中细胞色素C的荧光强度明显高于对照组，与对照组比较，p75NTR受体质粒转染组RPE细胞中裂解caspase-3、Fas及VEGF165蛋白表达水平明显升高，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。 结论p75NTR受体过表达引起RPE细胞线粒体损伤及细胞凋亡，同时刺激RPE细胞分泌血管生成因子，促进CNV的形成。p75NTR受体可能是调控RPE损伤的另一个重要通路。

p75 NTR受体在视网膜色素上皮细胞氧化损伤中的作用及机制

目的:研究p75 NTR受体在视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells,RPE)氧化损伤过程中的作用及机制。方法:将转染p75 NTR受体的RPE细胞作为实验组,未转染的RPE细胞作为对照组。Brd U检测法检测细胞增殖活性;PI/Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡率;激光显微镜观察细胞内ROS的表达情况;流式细胞仪检测细胞内ROS、线粒体标志物、细胞色素C表达水平;Western blot法检测细胞中Fas蛋白、裂解Caspase-3、VEGF165蛋白的表达水平。结果:随着p75 NTR受体转染时间的延长,实验组RPE细胞的增殖活性呈逐渐降低趋势,各转染时间点的RPE细胞增殖活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);实验组各转染时间点的RPE细胞增殖活性均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着转染时间的延长,实验组RPE细胞凋亡率呈逐渐增加趋势,各转染时间点的RPE细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.01);实验组各转染时间点的RPE细胞凋亡率均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。实验组ROS荧光信号明显强于对照组。流式细胞仪检测结果显示,实验组RPE细胞中ROS、细胞色素C水平均明显高于对照组,线粒体标志物水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。Western blot法检测结果表明,实验组细胞内Fas蛋白、Caspase-3、VEGF165蛋白的表达水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:p75 NTR受体高表达可导致RPE细胞线粒体发生损伤,同时促进细胞凋亡,最终导致脉络膜新生血管的形成,表明p75 NTR受体可能是导致RPE细胞发生损伤的因素之一。

神经营养因子受体p75NTR可谓节肝脏修复

据医业网3月22日报道（原载Science 2007；315：1853—1856），肿瘤坏死因子受体家族成员神经营养因子受体p75NTR，对于指导肝脏纤维变性和硬化受损修复期间发生的肝星形细胞（HSCs）分化起重要作用。

p75^(NTR)在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨神经营养因子受体p75NTR在乳腺癌中的表达及与临床病理、激素受体、分子分型之间是否存在相关性。方法:利用免疫组织化学法检测186例乳腺癌组织p75NTR、ER、PR、HER2、Ki-67的表达情况,分析p75NTR与临床病理参数间的相关性。结果:p75NTR在乳腺癌组织中阳性表达占11.3%(21/186),p75NTR的表达与组织分级、Ki-67蛋白水平正相关(P<0.05),与ER表达负相关(P<0.05),与肿瘤大小、是否绝经、淋巴结转移等无关(P>0.05),但在淋巴结转移分层分析中淋巴结转移<4枚与淋巴结≥4之间,p75NTR的表达与之相关(P<0.05);p75NTR表达与Luminal B型及三阴乳腺癌亚型显著相关。结论 :p75NTR可预测三阴乳腺癌及Luminal B亚型,较准确地进行分子分型,为指导临床分层治疗提供依据。

蛴螬对激光损伤兔血-视网膜屏障后视网膜TekA、p75NTR表达的影响

目的:探讨蛴螬促进激光损伤兔血-视网膜屏障后的修复作用及机理。方法:30只成年健康有色家兔随机分为正常对照组、模型对照组、蛴螬组。采用激光损伤血-视网膜屏障动物模型,在屏障损伤后1周及2周2个时相,观察蛴螬对兔血-视网膜屏障损伤修复情况、血-视网膜屏障组织形态结构及神经营养因子受体TrkA、p75NTR表达及影响。结果:蛴螬能促进损伤的血-视网膜屏障修复,减轻激光导致的视网膜组织及细胞形态学损伤,促进TrkA、p75NTR的表达,抑制视网膜细胞增殖与变性,从而改善视网膜功能。结论:蛴螬可能通过改善视网膜组织能量代谢,清除氧自由基,促进神经营养因子受体的表达,抑制视细胞增殖,从而起到保护血-视网膜屏障组织结构,促进损伤后功能恢复的作用。

神经营养因子对p75NTR诱导哺乳动物神经细胞凋亡的影响

目的 研究 R2 L 1细胞的凋亡以及神经营养因子对凋亡的影响。方法 形态学观察、细胞活性测定和流式细胞仪分析。结果 R2 L 1细胞去血清培养 12小时即发生凋亡 ,2 4小时后大部分细胞凋亡 ,48小时后细胞基本上都死亡。结论 NGF、 NT- 3和抗 p75 NTR抗体能抑制 R2 L 1细胞在去血清培养后发生的凋亡 ,而

p75NTR对胃癌转移的抑制机制研究

p75NTR全称神经生长因子受体p75是由399个氨基酸组成的I型细胞跨膜糖蛋白。朱晓婷,赵郁,王轶楠等人^（[1]）认为P75NTR在中枢神经系统的神经元和免疫系统的中性粒细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞等广泛的分布可通过免疫途径对胃癌细胞的繁殖与扩散产生一定的抑制作用。

NGF与TrkA受体在儿童膀胱过度活动症中的研究进展

神经生长因子(NGF)因其在神经细胞的存活、生长以及分化过程中发挥重要作用而得到广泛研究。它分布于机体的各处,根据所结合受体发挥不同的病理生理作用。原肌球蛋白相关激酶A(TrkA)是其高亲和力受体,诸多研究表明NGF在与其结合后,根据其下游不同的信号转导通路而发挥不同作用。NGF与其结合后还对体内发生的其他信号转导通路有交叉影响作用。本文从不同的疾病症状对NGF与TrkA结合后的信号转导通路进行综述,从而探讨NGF/TrkA信号通路在儿童膀胱过度活动症的作用。

p75NTR及其在神经再生中的作用机制

神经营养因子（neurotrophic factors,NTFs）通过酪氨酸激酶（tyrosine kinase,Trk）受体和p75神经营养素受体（p75neurotrophin receptor,p75NTR）介导细胞的存活、分化、生长和凋亡。p75NTR是第一个被克隆的低亲和性神经营养素受体,也是肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）受体超家族成员之一。