系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞Mg^(2+)转运蛋白1水平表达及临床价值研究

目的探讨Mg^(2+)转运蛋白1(magnesium transporter protein 1,MagT1)在系统性红斑狼疮(systemic lupuserythematosus,SLE)患者外周血T淋巴细胞中的表达情况,并阐述其临床意义。方法选取西双版纳傣族自治州人民医院2019年1月~2021年6月收治的79例SLE患者作为研究对象,依据SLE疾病活动指数(SLE disease activityindex,SLEDAI)评分将SLE患者分为中重度组(SLEDAI≥10,n=32)和轻度组(SLEDAI<10,n=47),另选取同期体检健康者40例作为对照组。记录患者临床生化和血清免疫相关指标水平;采用实时定量PCR(quantitative realtimePCR,qRT-PCR)法和Western Blot法检测患者外周血T淋巴细胞中MagT1 mRNA和蛋白表达情况;Pearson相关性分析外周血T淋巴细胞MagT1蛋白与生化免疫相关指标表达的关系;绘制受试者工作特征(receiver operatingcharacteristic,ROC)曲线分析外周血T淋巴细胞MagT1蛋白表达对SLE及其严重程度的诊断价值。结果与对照组比较,轻度组和中重度组患者外周血T淋巴细胞中MagT1 mRNA[0.65(0.36,0.99),0.23(0.07,0.36)vs 1.20(0.83,1.37)]和MagT1蛋白[0.35(0.22,0.42),0.22(0.15,0.27)vs 0.53(0.40,0.63)]表达水平明显降低,差异具有统计学意义(Z=5.247,7.078;5.128,7.257,均P<0.05);与轻度组比较,中重度组患者外周血T淋巴细胞中MagT1 mRNA和蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义(Z=5.169,3.599,均P<0.05)。Pearson相关性结果显示,外周血T淋巴细胞MagT1蛋白表达水平与血清血红蛋白(hemoglobin,HGB)及补体3(complement 3,C3)和补体4(complement 4,C4)水平呈正相关(r=0.496,0.637,0.588,均P<0.05);与红细胞沉降速率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、超敏C反应蛋白(hypersensitive-C reactive protein,hs-CRP)、免疫球蛋白(immunoglobulin G,IgG)水平和SLEDAI呈负相关(r=-0.598,-0.476,-0.646,-0.514,均P<0.05)。ROC曲线结果显示,外周血T淋巴细胞MagT1蛋白表达水平诊断SLE曲线下面积为0.893(95%CI:0.838~0.948),敏感度和特异度分别为90.0%,67.1%,诊断SLE严重程度曲线下面积为0.739(95%CI:0.631~0.848),敏感度和特异度分别为57.4%,84.4%。结论外周血T淋巴细胞MagT1在SLE患者中表达下调,且与SLE严重程度呈负相关,对SLE诊断和病情严重程度具有一定的诊断价值。

植物Mg^(2+)转运蛋白与相关基因及其功能的研究进展

镁离子是植物细胞中最丰富的二价阳离子,在植物的生长发育中起着重要的作用.对Mg2+独特的几何和化学性质,Mg2+对植物细胞体内中动态平衡的影响,植物中Mg2+转运相关蛋白与相关基因及其功能的研究进展进行了综述.

兔抗弓形虫CorA家族Mg^(2+)转运蛋白多肽抗体的制备及鉴定

目的:制备并鉴定兔抗弓形虫CorA家族Mg^(2+)转运蛋白(TgMg)的特异性多克隆抗体。方法:设计并合成一段的具有较好免疫原性的、来源于TgMg氨基酸序列的短肽,短肽与KLH偶联后免疫新西兰大耳白兔,收集兔血清并分离纯化TgMg多克隆抗体,利用间接ELISA、Western印迹、间接免疫荧光等多种分子生物学方法鉴定多抗的效价、特异性及TgMg蛋白的亚细胞定位。结果:间接ELISA测定多抗效价为1∶160000;Western印迹显示该多抗能识别相对分子质量约为174×103的单一条带,表明抗体的特异性较好;用间接免疫荧光法发现TgMg定位于细胞质,与预期结果相符。结论:运用人工合成多肽结合经典的多克隆抗体制备技术制备了抗TgMg多克隆抗体,为深入研究TgMg蛋白的生物学特性及代谢功能提供了有效工具。

低氮胁迫下香蕉硝酸盐转运蛋白MaNRT2基因的克隆与表达分析

氮素是植物生长发育所必需的大量元素,也是限制植物产量的首要因素,硝酸盐转运蛋白NRT是植物吸收和利用氮素的重要蛋白。笔者以香蕉为实验材料,通过RNA-Seq测序,筛选得到一个显著差异表达的高亲和硝酸盐转运蛋白基因NRT2;通过PCR克隆获得1 509 bp的c DNA序列,生物信息学预测其编码502氨基酸,含有MFS结构域,属于NRT2基因家族,命名为MaNRT2;RNA-Seq和qRT-PCR的结果显示,MaNRT2基因的表达具有显著的组织特异性,在根中远高于叶片;低氮胁迫处理后,MaNRT2在叶片中表达量上升,在根中表达量反而下降,表明MaNRT2与香蕉氮元素的吸收转运密切相关。

慢性乙型肝炎病毒感染者Mg2+转运蛋白1表达水平对CD8+T细胞耗竭的影响

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血CD8^+T细胞中Mg^2+转运蛋白1(MagT1)的表达水平及其表达对CD8^+T 细胞耗竭的影响。方法选取2016年6月至2018年1月本院收治的未经抗病毒治疗的HBV感染者86例,根据外周血HBV DNA水平将慢性HBV感染者分为高病毒载量组(45例)与低病毒载量组(41例),并设置健康对照组(20例)。采集外周血、分离CD8^+T细胞,检测各组外周血及CD8^+T 细胞中Mg^2+含量;采用Western blot 和实时荧光定量PCR 法检测各组CD8^+T 细胞中MagT1 蛋白和mRNA表达水平;采用流式细胞术检测各组CD8^+T细胞表面分子T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim-3)、程序性死亡受体1(PD-1)、自然杀伤细胞活化受体(NKG2D)和CD38的表达水平;并分析MagT1蛋白表达水平与CD8^+T细胞表面分子表达水平的相关性。结果各组外周血中Mg^2+浓度差异无统计学意义(P>0.05)。与健康对照组比较,慢性HBV 感染者CD8^+T细胞中Mg^2+浓度、MagT1 蛋白和mRNA 表达水平以及表面分子NKG2D和CD38均显著下降(均P<0.05),PD-1和Tim-3表达显著增加(均P<0.05)。并且,CD8^+T细胞中MagT1蛋白与PD-1、Tim-3表达呈负相关(均P<0.05),与NKG2D、CD38表达呈正相关(均P<0.05)。结论慢性HBV感染者CD8^+T细胞耗竭与CD8^+T细胞中MagT1表达下调所致的Mg^2+内流障碍有关。

两种A类氨基酸转运蛋白部分功能差异的研究

应用重组Vaccinia病毒表达系统在猴肾成纤维细胞CV-1中瞬时表达大鼠A类氨基酸转运蛋白GlnT和SAT-2,研究它们转运MeAIB、Ala和Gln的动力学和对多种氨基酸转运亲和性的差异,结合它们的氨基酸序列同源性比较表明:虽然GlnT和SAT-2蛋白的氨基酸序列有较高的同源性,但它们在转运功能上有较大的差异。

籼稻低亲和阳离子转运蛋白基因OsLCT2的克隆与生物信息学分析

OsLCT1是目前在水稻中唯一鉴定出来的参与韧皮部镉离子运输的关键转运蛋白,与水稻籽粒镉积累密切相关。本研究根据Gene Bank已发表的小麦Ta LCT1基因序列信息设计引物,利用RT-PCR方法从籼稻93-11和华占中克隆了低亲和阳离子转运蛋白基因(LCT),并命名为OsLCT2。生物信息学分析结果表明,该基因定位在5号染色体上,全长2 699 bp,包含3个外显子和2个内含子,其CDS全长1 437 bp,编码478个氨基酸,包含2个PEST序列和11个跨膜结构域。OsLCT2蛋白二级结构预测显示,α-螺旋占57.11%、β-折叠占7.74%,无规则卷曲占35.15%。序列比对和系统进化树分析结果表明,OsLCT2与小麦的亲缘关系最近达65%,其次为高粱64%,而与水稻OsLCT1的同源性并不高,推测OsLCT2的功能可能与Ta LCT1相类似。

OsPT8过量表达提高转基因烟草的耐低磷能力

高亲和磷转运蛋白负责植物在低磷条件下吸收和转运磷酸盐,对植物的生长发育至关重要。将水稻中关键的高亲和磷转运蛋白基因OsPT8(A high affinity phosphate transporter gene OsPht1;8,以下简称OsPT8)通过农杆菌介导的方法转入烟草云烟87,以转基因烟草和野生型(云烟87)为材料,设置正常供磷(1 mmol/L Pi)和低磷(0.1 mmol/L Pi)两个处理的沙培试验,检测烟株地上部和地下部的生物量、全磷及有效磷的含量,分析烟草高亲和磷转运蛋白家族基因(NtPT1和NtPT2)的表达差异。结果显示,低磷条件下,OsPT8过量表达转基因株系生物量均显著高于野生型;在正常供磷和低磷条件下,OsPT8过量表达烟草株系全磷含量和有效磷含量均显著高于野生型,这表明高亲和磷转运蛋白基因OsPT8可以提高转基因烟草的耐低磷能力。RT-PCR和Q-PCR结果显示,转基因株系显著提高了烟草高亲和磷转运蛋白基因NtPT1和NtPT2的表达量,表明OsPT8对烟草磷吸收和转运的影响是通过OsPT8基因和烟草NtPT1、NtPT2基因等一个复杂的过程起作用的。

LMP7、TAP2基因多态性与云南汉族非小细胞肺癌的相关性

目的:探讨低相对分子量蛋白酶体7基因(LMP 7)及抗原处理相关转运体2基因(TAP 2)中的单核苷酸多态性(SNP)与云南汉族人群非小细胞肺癌的相关性。方法:选取云南汉族非小细胞肺癌患者467例作为病例组、同期健康正常人群488例作为对照组,采用Taq Man探针基因分型方法对TAP2基因的SNP位点rs241447及LMP7基因的SNP位点rs2071543进行基因分型,分析rs241447和rs2071543等位基因和基因型在病例组和对照组间的分布差异,分析这两个SNP位点在肺癌不同临床分期的中分布差异。结果:rs241447在对照组和病例组中基因型的分布频率比较,差异有统计学意义(P=0.015);在超显性遗传模式下,rs241447基因型C/C-T/T可能是云南汉族人群非小细胞肺癌的风险因素(OR=1.38,95%CI为1.07~1.78,P=0.014),rs2071543的等位基因和基因型在对照组和病例组中的分布频率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TAP2基因中的SNP位点rs241447可能与云南汉族人群非小细胞肺癌的易感性相关。

低亲和力钠依赖二羧基转运蛋白随增龄表达变化的研究

目的 研究大鼠及人类肾脏低亲和力钠依赖(Na^+/)二羧基转运蛋白(NaDC1)随增龄的表达变化规律并探讨其在肾脏衰老变化中的意义。方法 采用Northern杂交、Western印迹及免疫组化等方法对大鼠出生后1d、7d、1个月、3个月、12个月、24个月及少年、中青年、老年正常人肾脏 NaDC1的表达变化。结果 大鼠NaDC1 mRNA表达呈现随肾组织发育成熟表达逐渐增强,1个月达高峰,后随增龄表达下降的趋势(P<0.05)。Western印迹显示NaDC1蛋白随鼠龄增高表达逐渐增强,3个月达高峰,后表达渐降的趋势。免疫组化结果显示大鼠及人类肾组织NaDC1分别表达于近端小管刷状缘,大鼠生后1d表达最弱,后表达渐强,到3个月达高峰(5.30±1.52比1.40±0.43,P<0.01),后呈现渐降的趋势(P<0.05)。人类肾组织NaDC1表达呈现随增龄渐降的趋势。结论 大鼠及人肾组织进入衰老时,NaDC1 mRNA及蛋白表达均呈现下降的趋势,可作为对肾脏衰老观察的指标之一。

大鼠低亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白对枸橼酸及草酸转运电生理特性的研究

目的 探讨大鼠低亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白(SDCT1)对枸橼酸及草酸的转 运特点。方法 克隆出大鼠SDCT1全长cDNA基因。应用爪蟾卵母细胞异源性表达SDCT1,并 使用双电极电压钳法记录通道电流。通过改变灌流液中枸橼酸、草酸的浓度,以及两种底物转运 时钠离子的浓度及pH值,对其特性进行了研究。结果SDCT1对枸橼酸及草酸的转运均为底 物浓度及钠离子依赖。pH值变化显著影响2者的转运。但低pH对草酸的转运影响要远大于枸 橼酸。结论 在临床实践中,虽然升高尿液pH值可以抑制枸橼酸的重吸收,发挥其抑制钙盐沉 积的功能。但过度地碱化尿液也会使草酸的重吸收受到抑制,使草酸大量存留在尿中而导致结 石。保持适当的尿酸碱度是必要的。

拟南芥AtMGT3基因转运功能研究

对拟南芥AtMGT3基因的Mg2+转运功能进行了初步研究.AtMGT3转录本的半定量分析表明,AtMGT3在根、茎、叶、花、角果中均有表达,但在花中表达量最高,根中最少.MM281功能互补和液体生长曲线结果表明:At-MGT3功能互补细菌Mg2+转运突变株,具有Mg2+转运能力;AtMGT3介导Mg2+的低亲和性吸收,是一个低亲和性Mg2+转运蛋白;AtMGT3可能还能转运Fe2+,但转运Fe2+浓度超出了正常的生理浓度.在正常生理条件下,At-MGT3的主要生理功能是作为Mg2+转运蛋白起作用.

胶质瘤促血管生成素2基因表达的临床意义(附52例分析)

目的 探讨胶质瘤促血管生成素2 (Ang2) 基因在脑胶质瘤的表达及其临床意义。方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR) 和链酶亲和素过氧化物酶复合物SABC法检测52例人脑胶质瘤和8例正常脑组织中Ang2基因表达。结果 50 例脑胶质瘤和8 例正常脑组织均可表达Ang2 mRNA片段。高恶度胶质瘤Ang2 mRNA及蛋白表达显著高于低恶度胶质瘤(P<0 01); 低恶度胶质瘤Ang2 mRNA及蛋白表达显著高于正常脑组织(P<0 05)。免疫组化染色显示, Ang2蛋白主要分布在高恶度胶质瘤组织的瘤细胞和内皮细胞, 低恶度胶质瘤呈低水平表达, 正常脑组织不表达。结论 Ang2的表达与胶质瘤的分级密切相关, 可能对胶质瘤的恶性演进起促进作用。

武运粳7号超表达OsNRT1.2后对硝酸盐的响应

应用公开的植物基因组数据库和生物信息学分析确定了一个水稻低亲和硝酸盐运输蛋白候选基因OsNRT1.2。利用农杆菌介导Ubiquitin启动子过量表达OsNRT1.2,研究了该基因在武运粳7号中的获得性功能特征。OsNRT1.2的cD-NA序列从KOME网站中获得,该序列全长为2178bp,编码阅读框为1732bp,编码533个氨基酸。采用半定量RT-PCR技术分析,OsNRT1.2在武运粳7号中表达存在器官特异性,主要在根系表达,地上部分几乎不表达。通过将pUbi-OsNRT1.2在武运粳7号中转化,得到OsNRT1.2基因超量表达材料。0.2mmol/L NO3-和5.0mmol/L NO3-处理野生型(WT)和T2转基因植株OE1、OE2和OE8 30d,每10d跟踪记录株高和根长。转基因植株(除OE8在5.0mmol/L NO3-供氮水平外)与WT株高无明显差异,根长增加量显著降低。在0.2mmol/L NO3-供氮水平下,转基因植株和WT地上部分和根系的全氮含量均无显著差异;在5.0mmol/L NO3-供氮水平下,除OE1外,OE2和OE8地上部分全氮含量显著增加,3个转基因株系比WT根系全氮含量显著降低。在两个氮素水平处理条件下,转基因植株根冠比都显著降低;生物量比WT都增加,在0.2mmol/L NO3-供氮水平下增加了9.4%～31.1%,在5.0mmol/L NO3-供氮水平下增加了12.5%～43.8%。研究表明,OsNRT1.2基因在武运粳7号中可能参与了氮素从根系向地上部的转运,从而导致地上部生物量增加。

植物吸收硝态氮的分子生物学进展

植物吸收NO-3分为高亲和力(HATS,high affinitynitratetransportsystem)和低亲和力(LATS,low affinitynitratetransportsystem)转运系统。这两个系统的编码基因均已被克隆,其中HATS由NRT2基因家族和NAR2基因家族共同编码,LATS由NRT1基因家族编码。本文比较详细地介绍了这些转运蛋白的结构和功能以及在这方面的最新进展,概要性地介绍了这些基因的表达调控;同时摘要点评了该研究领域中还没有解决的一些问题。

急性髓系白血病患者外周血CD8^(+)T淋巴细胞中MagT1水平监测的临床价值

目的探讨急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者外周血CD8^(+)T淋巴细胞中Mg^(2+)转运蛋白1(MagT1)水平监测的临床价值。方法收集2014年3月至2018年12月收治的新发AML患者197例,同期体检者60例。分离外周血单个核细胞(PBMCs)和CD8^(+)T细胞备用。全自动生化分析仪检测血清Mg^(2+)浓度,RT-qPCR检测PBMCs中MagT1 mRNA表达。根据NCCN AML指南将AML患者分为低、中、高风险组,RT-qPCR和Western blot检测患者CD8^(+)T细胞中MagT1 mRNA和蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞PD-1和Tim-3表达水平;Spearson相关性分析MagT1蛋白与PD-1和Tim-3表达的相关性;Kaplan-Meier曲线分析CD8^(+)T细胞MagT1蛋白表达与患者无事件生存期(EFS)和总生存期(OS)的关系;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估MagT1蛋白表达水平对AML患者风险分层及预后的预测价值。结果与对照组比较,AML患者外周血中Mg;浓度降低,PBMCs中MagT1 mRNA相对表达量下调。与低风险组比较,中、高风险组患者CD8^(+)T细胞中MagT1 mRNA和蛋白相对表达量降低,而PD-1和Tim-3表达水平升高。CD8^(+)T细胞中MagT1蛋白与PD-1和Tim-3表达水平呈负相关;MagT1蛋白高表达患者的EFS和OS高于MagT1蛋白低表达患者;MagT1表达水平对AML患者预后(AUC=0.866,95%CI:0.817~0.915)及风险分层(AUC=0.724,95%CI:0.642~0.806)均具有一定的评估价值。结论AML患者外周血CD8^(+)T细胞中MagT1的表达降低与患者不良风险分层、CD8^(+)T淋巴细胞耗竭和不利的生存状况相关,对评估AML患者风险及预测预后有重要价值。

新疆过敏性哮喘患儿FCER2、CRHR1及GLCCI1基因多态性分析

目的分析低亲和力免疫球蛋白E受体2(FCER2)rs28364072位点、促肾上腺皮质激素释放激素受体1(CRHR1)rs37973位点及糖皮质激素诱导转录基因1(GLCCI1)rs242941位点基因型和等位基因在新疆维吾尔族、汉族及哈萨克族过敏性哮喘患儿中的差异性分布特征。方法用荧光染色原位杂交方法检测273例新疆过敏性哮喘患儿(其中维吾尔族96例,汉族118例,哈萨克族59例)的FCER2 rs28364072、GLCCI1 rs37973及CRHR1 rs242941基因多态性,并分析基因型频率和等位基因频率在不同民族患儿间是否存在差异性。结果新疆3个民族273例过敏性哮喘患儿间FCER2 rs28364072和GLCCI1 rs37973基因型频率及等位基因频率差异均无统计学意义(均P>0.05)。汉族患儿的CRHR1 rs242941 GG型基因型频率均显著高于哈萨克族和维吾尔族患儿,差异均有统计学意义(95.8%vs 84.7%,88.5%,均P<0.05)。结论在与吸入性糖皮质激素疗效的相关性研究中,需考虑CRHR1与民族因素的差异,可不用考虑FCER2、GLCCI1与民族差异性的因素。

SGLT2抑制剂对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征合并2型糖尿病患者的影响

目的评估钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂(Sodium-Glucose Cotransporter 2 inhibitor,SGLT2i)对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)合并2型糖尿病患者的影响。方法采用回顾性研究的方法,选取2016年10月~2018年12月在我院呼吸科住院OSAS合并T2DM患者为研究对象。98例患者均第一周给予达格列净5 mg,qd治疗,1周后加量到10 mg,qd,治疗前后分别由睡眠检测仪(荷兰飞利浦便携式)进行监测AHI,测定血糖化血红蛋白(HbA1c),以及患者体重(BW)、BMI、血压(BP)。结果达格列净治疗后所有患者的AHI、HbA1c、BW和BMI均显著降低,BP无变化;重度OSAS患者人数从65降至22。皮尔逊相关系数分析结果显示AHI改善程度与入院前AHI之间存在显著相关性(P<0.0001)。AHI改善程度与治疗前患者体重及药物治疗前后体重的改变无相关性。但在重度OSAS患者中,AHI的改善与治疗前后体重的变化呈正相关。结论SGLT2i不仅可以降低OSAS患者(尤其是重度OSAS患者)合并2型糖尿病的HbA1c、BW和BMI,还可以改善AHI症状。

非高血糖性糖尿病酮症酸中毒的诱因及发病机制研究进展

非高血糖性糖尿病酮症酸中毒(euDKA)是一种较为罕见的急性代谢紊乱综合征,其特征包括高阴离子间隙的代谢性酸中毒,血酮或尿酮阳性,血糖<13.9 mmol/L。因其血糖水平不高,euDKA在临床工作中容易被漏诊或延迟治疗,最终造成严重后果。近年已有较多euDKA的病例报道,但其诱因及发病机制尚不完全清楚。该文就euDKA的常见诱因及发病机制做一综述。