弱碱性低共熔溶剂溶解角蛋白过程及氢键机制

利用低共熔溶剂(DES)较强的氢键拆解能力定向解构角蛋白分子间的次级键,结合还原剂和DES高效断裂二硫键的能力,建立了一种弱损溶解并提取鸡毛中角蛋白的方法。以氯化胆碱为氢键受体(HBA)、乙醇胺、乙二醇、乳酸等为氢键供体(HBD),设计合成了3类(碱性、中性和酸性)13种功能性的DES,考察了还原剂用量(以鸡毛质量为基准,下同)、温度、DES中水质量分数对角蛋白相对分子质量和提取率的影响,通过密度泛函(DFT)理论计算和溶剂显色参数分析了DES内部的氢键网络结构,研究了DES对鸡毛角蛋白的弱损溶解机制。结果表明,以乙醇胺为HBD,不添加还原剂,在n(乙醇胺)∶n(氯化胆碱)=2∶1、DES中不含水、温度65℃、0.5h的最优条件下,再生角蛋白提取率为31.8%,相对分子质量最高,为66000。以乙醇胺为HBD制备的DES具有还原性,作为碱性DES,其内部的氢键数量多,氢键作用小,氢键能低,可以打乱鸡毛内部的氢键网络,而不会对鸡毛二级结构造成太大破坏。

高分子质量细胞角蛋白结合前列腺特异性抗原及P53标记物在前列腺癌鉴别诊断中的临床意义

目的:提高对前列腺良、恶性病变的临床认识和鉴别诊断水平。方法:用免疫组化染色法分别对前列腺腺癌13例、前列腺上皮内瘤和不典型腺瘤样增生22例、良性前列腺增生74例患者病变组织作抗高分子质量细胞角蛋白抗体(CK34BE12)、前列腺特异性抗原(PSA)及突变型P53的表达。结果:9例前列腺癌的腺体基底细胞区CK34BE12染色为阴性;4例染色大部分区域呈现阴性,染色区域部分腺体CK34BE12的染色呈现断续的阳性反应,PSA表达阴性,P53表达呈阳性,阳性细胞标记指数>15%。13例前列腺上皮内瘤和不典型腺瘤样增生腺体基底细胞区CK34BE12染色呈阳性,9例基底细胞区CK34BE12染色呈现断续阳性的区域占主体,染色小部分区域呈现阴性,染色区域PSA表达减弱,P53表达呈阳性,阳性细胞标记指数<15%。74例良性前列腺增生的腺体基底细胞对CK34BE12染色均呈强阳性,染色的反应带呈现不规则粗线形连续环状强阳性着色围绕在腺周,染色区域中PSA表达呈现阳性,P53表达呈阴性。结论:在组织形态学观察的基础上联合应用CK34BE12及PSA标记物可特异地显示前列腺腺体基底细胞的存在及间接了解其基底细胞层的完整性与否,结合P53的表达判断致癌基因的存在;对前列腺良、恶性病变的鉴别诊断及肿瘤恶性程度的准确判断具有很大帮助,且对前列腺癌的早期诊断也有很好的应用价值。

经鼻持续气道正压通气联合高压氧对阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者C反应蛋白、细胞间黏附分子-1水平及睡眠质量的影响

目的探讨经鼻持续气道正压通气(nasal CPAP,nCPAP)联合高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)治疗阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者的疗效。方法选取2019年1月~2020年3月荆门市第二人民医院OSAHS患者106例,依据随机数字表法分为研究组和对照组,各53例。对照组采取nCPAP,研究组在对照组基础上采取HBO治疗。结果治疗后研究组Epworth嗜睡量表(Epworth sleep scale,ESS)、匹兹堡睡眠质量指数(Pittsburgh sleep quality index,PSQI)评分及呼吸暂停低通气指数(AHI)、低通气指数(hypopnea index,HI)、呼吸暂停指数(apnea index,AI)低于对照组(P<0.05);治疗后研究组白天嗜睡、晨起口干、夜间憋醒、睡眠打鼾率低于对照组(P<0.05);治疗后研究组血清C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)及细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecules 1,ICAM-1)水平低于对照组(P<0.05);研究组不良事件发生率为7.55%,与对照组(3.77%)比较无显著差异(P>0.05)。结论nCPAP联合HBO治疗OSAHS患者,可降低血清CRP、ICAM-1水平,改善呼吸紊乱功能及临床症状,提高睡眠质量,且安全性高。

低分子肝素对脓毒症大鼠可溶性血栓调节蛋白、可溶性内皮细胞蛋白C受体及可溶性E-选择素的影响

目的探讨低分子肝素对脓毒症大鼠肺血管内皮细胞功能的影响。方法采用大鼠盲肠结扎穿孔术(CLP)复制大鼠脓毒症模型。清洁级雄性Wistar大鼠104只被随机分为正常对照组、假手术组、脓毒症模型组和低分子肝素治疗组,每组8只,其中后三组按术后处死时间分为12、24、48、72 h共4个亚组。各组分别在相应时间点处死大鼠,经腹主动脉取血进行常规检测,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定可溶性血栓调节蛋白(s TM)、可溶性内皮细胞蛋白C受体(s EPCR)浓度以及炎症反应可溶性E-选择素(s E-selectin)的含量。结果正常对照组和假手术组s TM、s EPCR和s E-selectin的表达水平均无显著差异(P均>0.05)。脓毒症模型组伤后12 h开始在各个时间点s TM、s EPCR和s E-selectin的表达均有不同程度增高(P均<0.05),并持续至伤后72 h;与模型组比较,低分子肝素治疗组于CLP后12 h开始,至24、48 h,s TM、s EPCR和s E-selectin的表达均明显降低,并持续至72 h(P均<0.05)。结论低分子肝素能通过对脓毒症凝血-炎症网络的调节,降低脓毒症大鼠s TM的表达水平,并降低大鼠体内s E-selectin的水平,从而减轻肺组织炎症损害,在一定程度上缓解脓毒症的进程。

细胞角蛋白、高分子量细胞角蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义

目的检测细胞角蛋白(CK19)和高分子量细胞角蛋白(34βE12)在甲状腺乳头状癌(PTC)组织中的表达,筛选甲状腺乳头状癌的辅助诊断指标及预测淋巴结转移的可能性。方法采用免疫组化S-P法、DAB显色检测结节性甲状腺肿伴乳头状增生15例,乳头状癌32例(无淋巴结转移22例,有淋巴结转移10例)中CK19、34βE12的表达。结果CK19表达以甲状腺乳头状癌有转移最强(100%),无转移较低(90.9%),甲状腺乳头状增生更低(20%),三者差异有显著性(χ2=29.371,P<0.0005)。34βE12表达以甲状腺乳头状癌有转移最强(100%),无转移较低(81.8%),甲状腺乳头状增生更低(26.7%),三者差异有显著性(χ2=17.192,P<0.0005)。两种蛋白表达强度相互之间相关性没有统计学意义。结论CK19具有上皮组织表达特异性,在鉴别甲状腺乳头状癌与结节性甲状腺肿方面,表达水平具有重要的诊断价值。甲状腺乳头状癌34βE12表达阳性率约90%,且阳性范围与强度均显著强于结节性甲状腺肿,有助于区别甲状腺乳头状癌与结节性甲状腺肿。两项指标在甲状腺乳头状癌组织中的表达,与甲状癌乳头状癌的发生发展和转移有关,对于甲状腺乳头状癌的临床诊断和治疗决策具有指导作用。

膜联蛋白32与低分子质量单链尿激酶融合基因的构建及高效表达

目的：构建膜联蛋白32（annexin32，Anx32）和低相对分子质量单链尿激酶（ScuPA32k）的融合基因，并在大肠杆菌系统内作表达。方法：利用重叠区扩增法进行基因拼接，然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达，Western印迹验证表达产物。结果：重叠区扩增得到 1．8 kb融合基因，该基因在原核表达系统内得到高效表达，表达量占菌体总蛋白的 26％，Western印迹证明表达产物正确。结论：用重叠区扩增法进行基因拼接快速、简便。

低相对分子质量肝素联合多柔比星对肝癌细胞迁移能力的影响

目的探讨低相对分子质量肝素(LMWH)联合多柔比星(DXRB)对肝癌细胞迁移能力的影响及其作用机制。方法实验分为阴性对照组、LMWH组、DXRB组、LMWH与DXRB联合应用组。用MTT法检测药物对HepG2细胞增殖的影响;用细胞划痕实验和Transwell小室法检测HepG2细胞的迁移能力;Western-blot和实时RT-PCR法检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达;ELISA法检测肿瘤细胞培养液中乙酰肝素酶的表达。结果 MTT结果显示,LMWH和DXRB对肝癌HepG2细胞均有显著的增殖抑制作用。LMWH与DXRB联合用药时,对肝癌HepG2细胞的迁移抑制作用明显高于单用DXRB组。LMWH和DXRB均可下调MMP-9、MMP-2和乙酰肝素酶的表达,且合用时对乙酰肝素酶表达的抑制作用更明显。结论 LMWH具有增强DXRB抑制肝癌HepG2细胞迁移的作用,其机制可能与下调MMP-9、MMP-2和乙酰肝素酶的表达有关。

低相对分子质量肝素联合紫杉醇对鼻咽癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的探讨低相对分子质量肝素(LMWF)联合紫杉醇对鼻咽癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其相关的分子机制。方法采用MTT法检测药物对鼻咽癌细胞CNE1、CNE2的增殖抑制效应;细胞划痕实验、Transwell小室法检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的表达;ELISA法检测细胞培养液中乙酰肝素酶(HPA)的表达。结果 MTT结果显示,不同浓度LMWH和紫杉醇对鼻咽癌细胞CNE1、CNE2均具有显著的增殖抑制作用。200 U·ml^(-1) LMWH与0.1μmol^(-1)紫杉醇联合作用于CNE1、CNE2细胞24 h的迁移抑制率分别为66.70%、70.53%,较单用紫杉醇的迁移抑制率明显提高。同时LMWH与紫杉醇联合作用于CNE1、CNE2细胞的侵袭抑制作用也明显高于单用紫杉醇的作用。LMWH与紫杉醇均可下调MMP-9和HPA的表达,且合用时作用更加明显。结论 LMWH具有增强紫杉醇抑制鼻咽癌细胞侵袭和迁移的作用,其机制可能与下调MMP-9和HPA的表达有关。

低碘对大鼠胸腺细胞角蛋白18阳性上皮细胞的影响

目的 探讨甲状腺功能降低时大鼠胸腺上皮细胞的变化。方法 将断乳后 1个月的 30只Wistar大鼠随机分为2组 :正常组饲以正常饲料 ,饮用自来水 ;低碘组饲以低碘饲料 ,饮用去离子水。测定各组大鼠的尿碘、血清甲状腺激素、胸腺指数及胸腺CK18阳性上皮细胞体密度和数密度的变化。结果 低碘组大鼠的尿碘、血清甲状腺激素及胸腺指数显著降低 ;实验 6个月后 ,CK18阳性上皮细胞的体密度和数密度显著升高。结论 低碘可促进大鼠胸腺CK18阳性上皮细胞增生。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇抑制体外培养人外周血单个核细胞低分子量蛋白酶体-2表达

探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对人外周血单个核细胞参与抗原呈递的低分子量蛋白酶体-2(LMP-2)表达的影响。采用流式细胞术(FCM)和半定量RT-PCR方法从蛋白质和mRNA水平分析了不同剂量DON对体外培养人外周血单个核细胞LMP-2分子表达的影响及其量效关系。FCM定量检测结果表明,不同浓度DON处理均可一定程度抑制人外周血单个核细胞LMP-2的表达,50ng/mlDON组、100ng/mlDON组、1000ng/mlDON组和2000ng/mlDON组LMP-2平均荧光强度分别为6.99±0.72、6.21±0.55、5.34±0.56和5.03±0.43,在50～2000ng/mL范围内随着DON浓度增加,外周血单个核细胞LMP-2表达降低,与DON浓度呈显著负相关(r=0.824,P<0.01)。半定量RT-PCR结果显示,不同浓度DON处理均可抑制人外周血单个核细胞LMP-2mRNA表达。DON在蛋白质和mRNA水平可剂量依赖地抑制体外培养的人外周血单个核细胞LMP-2的表达。

IgA肾病与低相对分子质量尿蛋白的关系

目的观察IgA肾病患者尿蛋白相对分子质量与肾小管间质损害及临床指标之间的关系,探讨低相对分子质量尿蛋白在IgA肾病发病机制中的作用。方法采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法检测34例同步行肾活检诊断明确的IgA肾病尿蛋白相对分子质量。结果据SDS-PAGE法,尿蛋白可分为4组类型:小球性尿蛋白组,生理性尿蛋白组,混合性尿蛋白23×103组,混合性尿蛋白10×103组。IgA肾病患者肾小管间质损害评分、24小时尿蛋白定量及血清肌酐(Scr)水平比较,混合性尿蛋白10×103组均较23×103组升高(P<0.05)。结论 SDS-PAGE分型10×103组尿蛋白对判断IgA肾病肾小管间质损害程度有临床意义,其作为无创性检测手段,可以作为判断IgA肾病肾小管间质损害程度的指标。

高分子量细胞角蛋白及前列腺特异性抗原在前列腺腺癌中的表达和意义

目的 提高对各种前列腺良恶性病变的诊断和鉴别诊断水平。方法 采用免疫组织化学染色方法分别对213例前列腺良恶性病变组织进行高分子量细胞角蛋白34βE_(12)及前列腺特异性抗原(PSA)标记,特异地显示前列腺基底细胞及间接了解基细胞层的完整性。结果 前列腺腺癌基底细胞均丢失,而前列腺增生性病变基底细胞绝大多数保存完好,只有少数Ⅲ级前列腺上皮内肿瘤和非典型性瘤样增生基底细胞不完整。大多数前列腺腺癌PSA低表达,少数分化好的癌组织呈阳性,而良性前列腺增生组织标本中PSA高表达。结论 联合应用特异显示基底细胞的高分子量细胞角蛋白34βE_(12)及间接了解基细胞层完整性的PSA标记物在前列腺良恶性病变的鉴别诊断及肿瘤恶性程度的判断中具有很好的应用价值。

高分子量细胞角蛋白与上皮钙粘蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义

目的:检测高分子量细胞角蛋白(34βE12)和上皮钙粘蛋白(E-cadherin)在甲状腺乳头状癌(PTC)组织中的表达,筛选甲状腺乳头状癌的辅助诊断指标及预测淋巴结转移的可能性。方法:采用免疫组化S-P法,DAB显色检测结节性甲状腺肿伴乳头状增生15例,甲状腺乳头状癌32例(无淋巴结转移22例,有淋巴结转移10例)中34βE12、E-cadherin的表达。结果:(1)34βE12表达以甲状腺乳头状癌有淋巴结转移最强(100%),无淋巴结转移较低(81.8%),甲状腺乳头状增生更低(26.7%),3组有显著差异(P<0.01)。(2)E-Cadherin表达以甲状腺乳头状增生最强(100%),甲状腺乳头状癌无淋巴结转移较低(36.4%),有淋巴结转移更低(10%),3组间有显著差异(P<0.01)。(3)根据两种蛋白表达阳性率行统计学分析,结果显示两种蛋白表达强度相互之间无相关性。结论:(1)甲状腺乳头状癌组织中34βE12表达率增高,而E-cadherin表达率低。(2)E-cadherin、34βE12对于甲状腺乳头状癌的诊断具有一定的指导作用。(3)E-cadherin有望作为预测淋巴结转移的参考指标。

高分子量细胞角蛋白在前列腺癌中表达的临床意义

目的 提高对前列腺良、恶性病变的认识和鉴别诊断水平。方法 用免疫组织化学染色方法分别对 2 13例前列腺良、恶性病变组织作了抗高分子量细胞角蛋白抗体 (34BE12 )染色 ,特异地显示前列腺基底细胞。结果 前列腺腺癌基底细胞均丢失 ,而前列腺增生性病变基底细胞绝大多数保存完好 ,只有少数 3级前列腺上皮内肿瘤和非典型性瘤样增生基底细胞不完整。结论 能特异显示前列腺基底细胞的 34BE12抗体在前列腺良、性病变的诊断和鉴别 ,以及对前列腺癌的早期诊断中均有很好应用价值。

低分子肝素对大鼠创伤性深静脉血栓形成中促细胞分裂原活化蛋白激酶通路的影响

观察低分子肝素治疗大鼠创伤性深静脉血栓形成的效果,从基因水平探讨低分子肝素治疗创伤性深静脉血栓形成的作用机制。将150只SD大鼠采用定量击打双侧大腿+双后肢石膏固定的方式造模,再将造模后5天有血栓形成的大鼠,随机分为药物治疗组和对照组,分别用低分子肝素和生理盐水进行干预,第一次干预后3h,各组随机取10只大鼠股静脉血管及其主要属支,采用Trizol一步法提取总RNA,运用Gene-chip Rat Genome 4302.0芯片测定股静脉RNA表达。倍数变化分析筛查出差异性表达基因,进一步行path-way分析。结果表明:对照组比较,药物组血栓消退率较高(x2=4.698,P<0.05);有1229个基因呈现差异性表达,该基因主要参与了MAKP、Ca2+、细胞因子及受体信号传导通路,参与MAPK通路的始动基因如IL1、TGF、FGF及其受体,末端效应基因如c-Junn、ur77、p53等均呈现上调。低分子肝素可调控促细胞分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路并影响血栓的预后。

低相对分子质量肝素对内毒素诱导的内皮细胞表达vWF:Ag、PAI-1和PS的影响

目的观察低相对分子质量肝素(LMWH)对内毒素(LPS)作用下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达血管性血友病因子相关抗原(vWF：Ag)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)及蛋白 S(PS)的影响。方法常规从脐带分离及培养 HUVEC,取第1～3代 HUVEC 于24孔板进行分组实验。应用酶联免疫吸附法(ELISA)或免疫比浊法测定 HUVEC 上清液中的 vWF：Ag、PAI-1及 PS。结果(1)在 LPS 刺激下,HUVEC 培养上清液中 vWF：Ag 量较对照组增加(由2.0% 增至3.5%),差异有显著性(P＜0.05)。不同浓度 LMWH(20 u/ml、50 u/ml、100 u/ml)均可抑制 LPS 对 HUVEC 表达 vWF：Ag 的影响,与内毒素组比较,差异有显著性(P＜0.05)；(2)在 LPS 刺激下,HUVEC 表达 PAI-1的量增加,与对照组比较,差异有显著性(P＜0.05)。加入不同浓度的 LMWH,可下调 LPS 对 HUVEC 表达 PAI-1的影响。各剂量组与 LPS 组比较,差异均有显著性(P＜0.05)；(3)以1μg/ml LPS 刺激 HUVEC,PS 表达量下降,与对照组比较,差异有显著性(P ＜0.05)。同时加入 LMWH 可上调 LPS 对 HUVEC 表达 PS 的影响,各剂量组与 LPS 组比较,差异有显著性(P＜0.05)。结论 LPS 可上调 HUVEC 表达 vWF：Ag 及 PAI-1,下调 HUVEC 表达 PS。LMWH 能拮抗上述作用。提示：LMWH 对 LPS 诱导的内皮细胞的活化与损伤有保护作用,在重症炎症状态下使用 LMWH 可能有利于器官功能的恢复和预防 DIC。

酪氨酸激酶抑制剂在分子靶向治疗中对耐药非小细胞肺癌患者角蛋白、PAX-8及DNA EGFR基因T790M突变的影响

目的探讨表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)在分子靶向治疗中对耐药非小细胞肺癌(NSCLC)患者角蛋白、配对盒基因8(PAX-8)及对血浆中EGFR基因耐药位点T790M突变的影响。方法回顾性选取2018年1月至2019年1月延安市人民医院收治的52例耐药NSCLC患者作为研究对象,均予以EGFR-TKIs治疗。分析两组患者的近期疗效;分析患者治疗前后临床特征和CK、PAX-8阳性表达的分布;复发转移及CK、PAX-8表达的关系;比较治疗前后的EGFR基因耐药位点T790M突变情况;比较CK、PAX-8表达及T790M突变与术后生存时间。结果NSCLC患者治疗4周时的有效率、稳定率分别为59.62%、88.46%,高于治疗1周时(26.92%、75.00%),差异均有统计学意义(P<0.05)。NSCLC患者治疗4周时的CK、PAX-8阳性表达率分别为17.31%、21.15%,显著低于治疗前(40.38%、63.46%),差异均有统计学意义(P<0.05)。淋巴结上的CK、PAX-8阳性表发复发转移率分别为61.90%、72.73%,较阴性表达(35.48%、36.84%)均显著偏高,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗4周时血浆中的EGFR基因耐药位点T790M突变率为13.46%,显著低于治疗前(69.23%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后5年总生存率为65.38%(34/52),CK、PAX-8及T790M阳性表达者的生存率均显著低于阴性者。结论耐药NSCLC患者的CK、PAX-8及DNA EGFR基因耐药位点T790M阳性表达越高预后效果越差,针对这3项指标的具体阳性表达情况科学、合理的予以EGFR-TKIs治疗可有效地降低CK、PAX-8阳性表达及DNA EGFR基因耐药位点T790M变异,有较好的临床应用与推广价值。

相对分子质量透明质酸在脐静脉内皮细胞增殖及连接蛋白Ezrin磷酸化表达中的作用研究

目的探讨高相对分子质量透明质酸(nHA)和低相对分子质量透明质酸(oHA)对脐静脉内皮细胞增殖能力及膜-细胞骨架连接蛋白埃兹(Ezrin)表达的影响。方法分别用nHA和oHA处理人脐静脉内皮细胞,以5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测透明质酸(HA)作用后细胞增殖能力;用荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测HA对Ezrin mRNA和蛋白表达的影响。结果与对照组相比,72 h后oHA(10μg/mL)显著促进血管内皮细胞增殖(P<0.001),24 h后促进Ezrin基因的表达,48 h后促进Ezrin蛋白磷酸化表达。而nHA(200μg/mL)则抑制血管内皮细胞的增殖(P<0.01)和Ezrin蛋白的表达磷酸化。结论oHA能有效促进血管内皮的增殖并促进其胞内连接蛋白Ezrin的表达磷酸化,nHA则抑制内皮细胞的增殖和Ezrin蛋白的表达。