低分子量肽分离方法的研究状况

列出了聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、高效液相色谱(HPLC)、凝胶过滤色谱、方法联用等分离低分子量肽的方法。用PAGE法分离时,小分子量肽常堆积在浓缩胶中很难分离;HPLC法在分离时,过程要不断优化;IE-CEC法对二肽、三肽分离效果好。这些方法都各有利弊。

密粘褶菌Gloeophyllum trabeum胞外低分子量多肽的分离纯化及其对纤维素生物降解作用

通过HPLC高效液相层析由褐腐真菌中能强烈降解木质纤维素的代表菌株密粘褶菌Gloeo phyllumtrabeum的胞外培养液 ,分离纯化得到一低分子量的活性多肽组分 (Gt因子 ) .Gt因子具有较好热稳定性 ,在pH 2 5～ 6 5范围内保持稳定 .Gt因子分子量在 4 0 0 0左右 ,等电点pI 6 6 .Gt因子具有络合Fe3 + 的能力 ,且能够将Fe3 + 还原为Fe2 + .在O2 存在时 ,能以纤维素物质为电子供体形成羟基自由基HO·.利用循环伏安法 ,观察到Gt因子与纤维素底物之间的氧化还原过程 .研究表明 ,Gt因子极有可能在褐腐菌的纤维素降解初期起着重要的作用 .

密粘褶菌胞外低分子量多肽在纤维素降解中作用的研究

从褐腐真菌中能强烈降解纤维素的代表菌株密粘褶菌 (Gloeophyllumtrabeum)的胞外酶液中首次分离纯化得到一低分子量的活性多肽组分 (称作Gt因子 ) ,此组分能在有O2 和Fe3 + 存在时产生羟基自由基HO·;对纤维素降解的研究表明 ,Gt因子不同于纤维素酶对纤维素的β 1 4 糖苷键的水解作用 ,而以HO·氧化的途径作用于纤维素 ,导致纤维素中氢键的断裂 ,降低纤维素的结晶度 ,使其暴露出更多的末端 。

广东汉族人低分子量多肽基因的多态性

目的:了解广东汉族人LMP基因的分布特点,并与其它地区人群进行比较。方法:应用聚合酶链反应技术对正常人低分子量多肽基因LMP2和LMP7进行扩增以cfoI进行限制性酶切图谱分析。结果:广东汉族人的LMP2LMP7的基因频率分别是LMP2A0.3200,LMP2B0.6800,LMP7A0.4166,LMP7B0.5834。结论:广东汉族人LMP基因的分布与其它地区人群的分布有不同。

血浆低分子量蛋白与多肽的研究进展

血浆是临床上使用频率最高的体液样本,具有采样无创、使用便捷以及内含物丰富等特点,是挖掘疾病相关潜在生物标志物的重要来源。血浆中低分子量蛋白与多肽(low molecular weight proteins and peptides,LMWPs)包括细胞因子、生长因子、多肽类激素和蛋白质降解产物等,其以分子质量较小、序列可表征、来源广泛等优势,得到了研究人员的青睐。近年来,随着高分辨率、高灵敏度质谱仪与计算科学的不断发展,新技术新方法的融入,LMWPs相关研究也有了新的发展。本文结合当前本领域的研究热点,介绍了血浆LMWPs的分类,包括完整小蛋白、蛋白质降解物、神经肽、免疫多肽、载体蛋白结合的LMWPs和小开放阅读框编码的多肽,同时总结了血浆LMWPs在富集方法、研究策略、功能研究以及疾病相关生物标志物方面的研究进展,并对血浆LMWPs面临的挑战和未来的研究方向进行了讨论。

广东人低分子量多肽基因多态性与变应性鼻炎相关性研究

目的 :探讨广东人变应性鼻炎 (allergicrhinitis,AR)患者中低分子量多肽 (lowmolecularweightpepitide ,LMP)基因多态性与变应性鼻炎相关性。方法 :利用聚合酶链式反应技术对 6 9例广东籍变应性鼻炎患者及 10 0例正常对照者的低分子量多肽基因LMP2和LMP7进行扩增 ,并以HhaⅠ酶进行限制性酶切图谱分析。结果 :①变应性鼻炎患者LMP7A/A频率占 8.70 % ,低于正常对照组的 2 1.35 % ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,其余各型与正常对照组差异无显著性 (P >0 .0 5 )。②变应性鼻炎病人中LMP7等位基因A的频率占 36 .2 3% ,B的频率占 6 3.77% ,与正常对照组的A为 4 7.0 9%、B为 5 2 .91%差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :提示LMP7等位基因A与AR的发病呈负关联 ,B与AR的发病呈正关联。

低分子量多肽基因多态性与多发性硬化的相关性

目的对广东地区汉族多发性硬化症(MS)患者作低分子量多肽(LMP)基因分型,探讨LMP基因与广东人群中MS遗传易感性的可能关系.方法采用聚合酶链式反应———限制性片段长度多态性技术对30例无亲缘关系的MS患者和95例无血缘关系的广东籍健康汉族人作LMP基因分型.结果LMP7和LMP2各等位基因基因型频率在MS组和正常人组间无显著差异(p均>0.05).结论从目前调查的例数,广东人群中MS与LMP基因不关联.

色素膜炎与低分子量多肽基因关联的初步探讨

目的 探讨低分子量多肽基因多态性与前葡萄膜炎 (AAU)的关系 .方法 应用聚合酶链反应技术对 33例AAU病人及 10 3例正常人LMP进行扩增以cfoI进行限制性酶切图谱分析 .结果 AS病人LMP基因频率为LMP2 A0 .32 0 0 ,LMP2 B 0 .6 80 0 ,LMP7 A 0 .47,LMP7 B 0 .5 30 0 .结论 前葡萄膜炎与LMP基因无明显相关 .

内外表面修饰介孔材料的制备及其在低分子量蛋白质富集中的应用

介孔材料由于其具有高度规则的孔径结构和一系列优良的物理化学性质,使其对复杂基质中选择性萃取低分子量蛋白质和多肽方面具有较大的优势和发展潜力。本研究采用共沉淀法结合后修饰法制备了一种介孔内表面修饰反相苯基基团、外表面修饰烷基二醇基的硅基介孔材料,并对其结构及选择性富集性能进行了考察。傅立叶变换红外光谱图表明,苯基和烷基二醇基成功修饰到介孔材料上;萃取实验结果表明,内外表面的双重修饰使其对标准蛋白、人血浆等复杂样品中低分子量蛋白质(分子量小于10 kDa)具有良好的富集选择性。

低分子量多肽2基因多态性与强直性脊椎炎表型的关系

目的研究低分子量多肽（ｌｏｗｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｐｅｐｔｉｄｅ，ＬＭＰ）基因多态性与强直性脊椎炎（ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ，ＡＳ）表型的关系。方法收集各种类型ＡＳ和单纯虹膜炎（Ａｃｕｔｅａｎｔｅｒｉｏｒｕｖｅｉｔｉｓ，ＡＡＵ）血标本１１８例。应用聚合酶链反应技术对正常人和患者进行ＨＬＡ－Ｂ２７检测以及ＬＭＰ２和ＬＭＰ７扩增，以ＣｆｏⅠ进行限制性酶切图谱分析。结果ＡＳ有ＡＡＵ病史患者ＬＭＰ２基因ＢＢ型频率较正常人以及ＡＳ患者明显增高（Ｐ＜０．０５），ＯＲ为３．７１。少年型ＡＳ与成年型ＡＳ以及单纯中心型ＡＳ与伴有外周关节炎（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＰＡ）的ＡＳ之间ＬＭＰ２基因型没有明显差异（Ｐ＞０．０５）。ＰＡ＋／ＡＡＵ＋与ＰＡ＋／ＡＡＵ－患者间存在显著差异（Ｐ＜０．０５），ＯＲ值为４．６３６。ＡＡＵ患者与正常人存在显著差异（Ｐ＜０．０５），ＯＲ值为５．８３。ＬＭＰ７基因多态性无明显差异。结论ＬＭＰ２基因多态性与有ＡＡＵ病史的ＡＳ以及单纯ＡＡＵ发病存在明显相关，而与ＡＳ发病年龄以及关节类型没有明显关系。

vIL-10对鼻咽癌细胞株MHC-1类分子抗原加工提呈“操纵子”表达的影响

目的研究病毒白介素-10(vIL-10)对鼻咽癌细胞株MHC-1类分子抗原加工提呈"操纵子"表达的影响。方法收集不同时间段vIL-10处理的鼻咽癌细胞(CNE-1和CNE-2),采用RT-PCR、Western blot方法检测vIL-10处理的鼻咽癌细胞中MHC-1类分子抗原加工提呈"操纵子"(TAP-1、2,LMP-2、7及HLA-I)表达的变化。结果1mRNA水平:CNE-1和CNE-2的TAP-1水平在不同时间点均未表现出显著差异;vIL-10作用1、4、6、12h时,CNE-1和CNE-2的TAP-2、LMP-2均未出现变化,24h时,两者均出现显著下降甚至消失;CNE-1在vIL-10作用后4h即出现LMP-7下降,而CNE-2在vIL-10作用后6h出现下降;在vIL-10作用24h时CNE-1和CNE-2的HLA-I出现显著下降。2蛋白水平:vIL-10作用后24h时,两种细胞的TAP-1均出现显著下降,TAP-2则在vIL-10作用后1、6、12、24h出现逐渐下降;CNE-2的LMP-2、LMP-7在vIL-10作用后随时间逐渐下降,而CNE-1的两种蛋白仅在作用后12h出现显著下降;HLA-I在vIL-10作用后出现下降趋势,但在CNE-1中各时间段变化无统计学差异,CNE-2在24h显著下降。结论 vIL-10可明显抑制鼻咽癌MHC-I类分子抗原加工和提呈的"操纵子"的表达,并且呈一定的时间依赖性。

扁杏仁肽对血管紧张素转化酶的抑制作用研究

采用碱溶酸沉法从陕北扁杏仁制得杏仁总蛋白,并采用Osborne法分级制备清蛋白、醇溶蛋白、球蛋白和谷蛋白;用碱性蛋白酶Alcalase水解,超滤分离,制备不同分子量总蛋白杏仁肽和分级蛋白杏仁肽;利用高效液相色谱法测定水解物,系统研究杏仁肽对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制活性。结果表明,不同分子量的总蛋白杏仁肽均具有ACE抑制活性,且肽段分子量越小,抑制活性越强;分级蛋白杏仁肽中,谷蛋白肽的抑制活性最强,分子量低于1 ku的谷蛋白肽的IC50值为(96.21±0.06)μg/m L。

广东眼镜蛇毒低分子量多肽的分离纯化与性质鉴定

目的从广东眼镜蛇粗毒中分离纯化出色谱纯的低分子量多肽并对其部分性质进行鉴定。方法采用化学沉淀法对蛇粗毒进行预处理,经Sephadex G-50凝胶过滤和UND Sphere S阳离子交换层析得到高纯度低分子量多肽,用SDS-PAGE及HPLC对产物纯度进行鉴定,并用SDS-PAGE和质谱法测定分子量,采用蛙心灌流法考察产物是否具有心脏毒性。结果结果表明,经分离纯化后得到两种低分子量多肽GI2和GI3,均为单一组分,可达到色谱纯,SDS-PAGE法测得GI2分子量为14 300 Da,质谱法测得GI3分子量为6 725.8 Da,仅GI2具有心脏毒性,收率分别为9.5%和10.1%。结论通过化学沉淀预处理,并经2次柱色谱可从广东眼镜蛇毒中分离得到两种色谱纯的低分子量多肽,且收率较高。

制备低分子质量猪血肽发酵条件的优化研究

为了优化发酵法制备低分子质量猪血肽的条件,应用响应面分析法(ResponseSurfaceMethodology,简称RSM)研究了发酵时间、发酵温度、接种量对低分子质量肽产量的影响。实验结果表明,发酵温度、时间及接种量对低分子质量猪血肽的生成有显著影响;发酵条件优化结果为:接种量4%、发酵温度31℃、发酵时间60h,水解度理论值为37.97%,验证值为37.96%。

低分子量多肽-2基因多态与汉族人群类风湿关节炎的相关性研究

目的 探讨低分子量多肽 2 (LMP 2 )基因多态与类风湿关节炎 (RA)的相关性。方法 用多聚酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)分析技术检测 86例RA患者和 80名正常人LMP 2第三外显子基因多态性 ,同时扩增DRB1基因第二外显子以筛选DR4 阳性标本。结果 LMP 2RH杂合子及LMP 2RR纯合子频率在RA组分别显著高于和低于正常对照组 (P均 <0 0 5 ) ,LMP 2H可使DR4+ 正常人患RA的相对危险度 (RR)增加 2 99倍 (P <0 0 5 )。结论 LMP 2RH频率升高及LMP 2RR频率降低可能是RA的特征之一 ,LMP 2H可能与汉族人群RA有一定的关联。

杂色曲霉素对人外周血单个核细胞TAP1及LMP2基因表达的影响

目的:探讨杂色曲霉素(ST)对体外培养的人外周血单个核细胞(HPBMc)抗原加工递呈相关基因TAP1、LMP2表达的影响。方法:采用RT-PCR和FCM方法,分析5种浓度ST处理对体外培养的HPBMcTAP1、LMP2基因在mRNA和蛋白水平表达的影响。结果:RT-PCR检测结果表明,ST处理24h后,低浓度ST组(0.125mg/L、0.25mg/L)HPBMcTAP1mRNA相对表达量明显高于对照组,而较高浓度组(0.5mg/L、1mg/L和2mg/L)TAP1mRNA则明显低于对照组,尤以1mg/L和2mg/L组为著。FCM定量分析表明,低浓度ST组HPBMcTAP1蛋白平均表达量略低于对照组,但无统计学意义,而较高浓度组TAP1表达则明显低于对照组(P<0.05)。在0.125mg/L到1mg/L浓度范围内,各ST处理组HPBMcLMP2蛋白表达量和mRNA的相对表达量均高于对照组。结论:ST对体外培养的HPBMcTAP1mRNA表达和蛋白表达的影响按ST剂量不同而变化,在0.125～1mg/L浓度范围内ST在mRNA及蛋白水平均可剂量依赖地提高体外培养的HPBMcLMP2的表达。

酒精性肝病羰基应激状态下蛋白酶体LMP7亚基表达研究

目的:分析酒精性肝病羰基应激状态下蛋白酶体活性亚基LMP7 mRNA的表达量,研究其在酒精性肝病发病机制中的作用。方法:利用酒精灌胃的方法建立大鼠酒精性肝病模型,分批于6、8、10、12周处死大鼠。采用2,4-二硝基苯肼比色法测定大鼠肝组织蛋白质羰基含量,荧光定量PCR方法测定蛋白酶体活性亚基LMP7 mRNA表达量。结果:模型各组肝组织中羰基含量均明显高于正常对照组(P<0.05),并随肝组织病理损害程度的加重而逐渐增高;LMP7亚基mRNA水平逐渐降低,并与羰基含量呈负相关。结论:酒精性肝病时组织处于羰基应激状态,蛋白酶体活性亚基LMP7基因表达下降,可能在酒精性肝病发病机制中发挥重要作用。