脱氧雪腐镰刀菌烯醇抑制体外培养人外周血单个核细胞低分子量蛋白酶体-2表达

探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对人外周血单个核细胞参与抗原呈递的低分子量蛋白酶体-2(LMP-2)表达的影响。采用流式细胞术(FCM)和半定量RT-PCR方法从蛋白质和mRNA水平分析了不同剂量DON对体外培养人外周血单个核细胞LMP-2分子表达的影响及其量效关系。FCM定量检测结果表明,不同浓度DON处理均可一定程度抑制人外周血单个核细胞LMP-2的表达,50ng/mlDON组、100ng/mlDON组、1000ng/mlDON组和2000ng/mlDON组LMP-2平均荧光强度分别为6.99±0.72、6.21±0.55、5.34±0.56和5.03±0.43,在50～2000ng/mL范围内随着DON浓度增加,外周血单个核细胞LMP-2表达降低,与DON浓度呈显著负相关(r=0.824,P<0.01)。半定量RT-PCR结果显示,不同浓度DON处理均可抑制人外周血单个核细胞LMP-2mRNA表达。DON在蛋白质和mRNA水平可剂量依赖地抑制体外培养的人外周血单个核细胞LMP-2的表达。

子宫颈病变组织中低分子量蛋白酶体表达与HPV16感染的关系

目的观察低分子量蛋白酶体(low molecular-weight protein,LMP)在子宫颈病变组织中的mRNA和蛋白表达,探讨其与HPV16感染的关系。方法以152例新疆维吾尔族妇女正常子宫颈上皮、子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和子宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)患者为研究对象,采用RT-PCR和免疫组化法鉴定LMP2和LMP7mRNA及蛋白表达水平;采用PCR技术检测相应标本HPV16感染情况。结果 (1)LMP2、LMP7随着子宫颈病变的加重其蛋白表达逐渐降低,且mRNA表达水平与蛋白表达趋势相一致。在CIN中LMP2、LMP7蛋白表达下调和缺失率分别为25.0%/15.6%、29.7%/23.4%;在子宫颈癌中LMP2、LMP7蛋白的表达下调和缺失率分别为17.5%/34.9%、23.8%/41.3%。临床病理参数进行分析发现LMP2、LMP7与子宫颈癌分化程度及淋巴结转移密切相关(P<0.05)。(2)PCR结果显示,HPV16的检出率随着子宫颈病变的进展而增加,在慢性子宫颈炎、CIN和子宫颈癌组织中阳性率分别为8%(2/25)、67.2%(43/64)和77.8%(49/63),且随着肿瘤恶性程度的增加其阳性表达率增加,各组间阳性表达差异有统计学意义(P<0.05)。在CIN中LMP7表达下调与HPV16感染有关(P<0.05),子宫颈癌中LMP2和LMP7表达下调与HPV16感染有关(P<0.05)。结论 LMP基因的转录表达下调或蛋白质表达缺失与维吾尔族妇女子宫颈癌病变进程密切相关,其中HPV16感染可能是重要原因之一。

维吾尔族女性乳腺癌与低分子量蛋白酶体蛋白表达缺失的关系

目的:探讨低分子量蛋白酶体(LMP)蛋白表达与乳腺癌的关系及其在维吾尔族和汉族女性中的表达差异。方法:收集维吾尔族和汉族女性乳腺纤维腺瘤及乳腺癌患者的石蜡包埋组织标本165例,应用免疫组织化学SP法检测LMP2、LMP7、LMP10蛋白的表达水平。结果:与乳腺纤维腺瘤组相比,LMP2和LMP7蛋白在乳腺癌组织中表达水平显著下降,表达完全缺失率明显上升,分别为67%和46.1%,差异均具有统计学意义(P<0.01);LMP10在乳腺纤维腺瘤和乳腺癌组中的表达缺失率分别为48%和56.5%,两组之间表达差异无统计学意义(P>0.05)。LMP2、LMP7和LMP10蛋白在维吾尔族女性乳腺癌患者中的表达率分别为43.1%、43.1%和47.7%,汉族分别为46%、42%和42%,不同民族女性患者之间表达的差异均无统计学意义(P均>0.05)。LMP2、LMP7和LMP10与乳腺癌淋巴结转移及远处转移相关,差异均有统计学意义(P均<0.05),同时LMP10表达降低与肿块大小有明显关系(P<0.01)。结论:LMP蛋白表达水平降低或缺失可能与乳腺癌的发生有关,其变化趋势在维吾尔族和汉族间有共性,可能反映乳腺癌发生的分子机制和特有的遗传背景。

低分子量蛋白酶体2/低分子量蛋白酶体7基因多态性与大兴安岭地区哈萨克族人群食管鳞癌相关性的研究

目的 探讨低分子量蛋白酶体2（LMP-2）/LMP-7基因多态性与大兴安岭地区哈萨克族人群食管鳞癌的关系.方法 运用两步法聚合酶链反应技术及免疫组化方法研究LMP2/LMP7基因在大兴安岭地区汉族与哈萨克族食管鳞癌患者血液中的表达情况,并与该地区健康人群对比.结果 300例哈萨克族食管鳞癌患者中188例（62.7％） LMP2/LMP7基因表达呈阳性,其中LMP-2检测出5种分型,H型占9.6％（18/188）,R型占23.9％（45/188）,H/H型占2.7％ （5/188）,H/R型占11.2％（21/188）,R/R型占3.2％ （6/188）;LMP-7检测出5种分型,Q型占18.6％（35/188）,K型占10.6％（20/188）,Q/Q型占4.8％（9/188）,Q/K型占4.3％ （8/188）,K/K型占11.2％ （21/188）.300例汉族食管鳞癌患者中仅2例（0.7％）阳性,其中LMP-2检测出的5种分型比率分别是H型占10.0％（2/20）,R型占15.0％（3/20）,H/H型占5.0％（1/20）,H/R型占0.0％ （0/2）,R/R型占20.0％（4/20）;LMP-7的5种分型中Q型占10.0％（2/20）,K型占3.5％（7/200）,Q/Q型占25.0％（5/20）,Q/K型占5.0％ （1/20）,K/K型占6.5％（13/200）.对照组（汉族和哈萨克族人各300例）检测结果为阴性.结论 LMP-2/LMP-7基因高表达可能与哈萨克族食管鳞癌密切相关,可以作为判断病情和预后评价的指标.

LMP2/LMP7基因编码区多态性及单倍体型与胃癌易感无相关性

目的:探讨中国汉族人群中肿瘤抗原递呈的限速基因LMP2/LMP7单核苷酸多态性与胃癌的遗传易感性关联.方法:提取145例胃癌患者及152例健康献血员外周血基因组DNA,用PCR-RFLP方法检测两组人群中LMP2-codon60/LMP7-codon145两个多态性位点的基因型;并采用PHASE1.0软件构建这两个多态性位点的个体单倍体型,以非条件Logistic回归校正混杂因素,并进行多态性与胃癌患者风险关联的统计学分析.结果:PCR-RFLP检测结果显示:LMP2-codon60与LMP7-codon145处的多态性在中国人群中普遍存在,LMP2/LMP7多态性位点的各自的等位基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律;最后的统计分析表明:在145例胃癌患者与152例健康对照人群中LMP2/LMP7两个多态性位点的基因型频率、以及所构建的4个单倍体型频率均没有统计学差异(P值均大于0.05).结论:在中国汉族人群中,LMP2/LMP7基因编码区两个位点的多态性以及单倍体型与胃癌易感无相关性.

LMP2/LMP7基因单倍型与肠道结核感染易感的相关性研究

目的探讨中国汉族人群中抗原递呈基因LMP2/LMP7单倍体型与肠道结核感染的遗传易感性关联。方法提取189例肠道结核感染患者及221例健康志愿者外周全血基因组DNA,采用PCR-RFLP的方法检测两组人群中LMP2-60/LMP7-145位于基因编码区的两个多态性位点基因型;利用PHASE1.0软件构建两个多态性位点的个体单倍体型,以非条件Logistic回归校正混杂因素,并进行单倍体型与肠道结核感染易感风险关联的统计学分析。结果 LMP2-60/LMP7-145多态性在中国人群中均存在,LMP2/LMP7多态性位点各自的等位基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律;肠道结核感染患者与健康对照人群中LMP2/LMP7两个多态性位点的基因型频率没有统计学差异(P>0.05);经校正混杂因素后,Logistic回归分析结果显示两个位点所构建的单倍体型LMP2(Cys)-LMP7(Lys)在两组间具有统计学差异(P=0.001、OR=4.02、95%CI 2.48～9.62)。结论在中国汉族人群中,LMP2/LMP7基因编码区两个多态位点的单倍体型与肠道结核的感染有着较强的遗传易感关联。

LMP7基因多态性与新疆哈萨克族食管鳞癌易感性的研究

目的：检测新疆哈萨克族（哈族）及正常人群中低分子量蛋白酶体（LMP7）基因多态性的分布，探讨LMP7基因遗传多态性与新疆哈族食管鳞癌易感性的相关性。方法：应用PCR-RFLP方法检测168例哈族食管癌石蜡组织和283例同一地区无肿瘤病史的哈族正常人群血样LMP7基因型分布。应用SPSS11.5对实验结果进行统计学分析，并进行Hardy-Weinberg检验。结果：在新疆哈族食管癌组中，LMP7三种基因型Q/Q、Q/K、K/K所占比例分别是81.55%、14.88%、3.57%，与哈族正常对照组中68.55%、29.68%、1.77%相比差异有统计学意义（χ^2=13.39、P〈0.05），杂合型LMP7Q/K降低机体患食管癌风险0.42倍（OR=0.42 95%CI=0.26-0.70）。结论：LMP7基因遗传多态性与新疆哈族食管鳞癌易感性相关联;其中杂合型LMP7Q/K可能为新疆哈萨克族食管鳞癌患者的保护因素。

血浆GFAP、FN及LMP2水平与急性脑梗死介入术后出血性转化及预后的关系

目的探究血浆神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、纤维连接蛋白(FN)及低分子量蛋白酶2型(LMP2)水平与急性脑梗死介入术后出血性转化(HT)及预后的关系。方法回顾性分析2019年5月至2022年5月商丘市第一人民医院收治的介入术治疗的80例急性脑梗死患者的临床资料。根据患者是否发生HT分为HT组(32例)和非HT组(48例)。比较两组患者血浆GFAP、FN、LMP2水平,绘制受试者特征(ROC)曲线分析患者血浆GFAP、FN、LMP2对HT的预测效能。根据患者治疗效果分为治愈组(11例)、显效组(33例)、有效组(27例)和无效组(9例),比较不同预后患者血浆GFAP、FN、LMP2水平,使用Spearman法分析患者血浆GFAP、FN、LMP2水平与预后的相关性。结果HT组患者血浆GFAP、FN、LMP2水平高于非HT组(P<0.05)。ROC曲线结果显示,血浆GFAP、FN、LMP2均具备较高对急性心肌梗死患者HT的预测效能(AUC=0.810、0.733、0.972,P<0.05)。治愈组、显效组、有效组、无效组患者血浆GFAP、FN、LMP2水平依次上升(P<0.05)。Spearman结果显示,急性心肌梗死患者血浆GFAP、FN、LMP2水平均与患者预后呈负相关(r<0,P<0.05)。结论HHT患者血浆GFAP、FN、LMP2水平高于非HT患者,GFAP、FN、LMP2水平可预测急性脑梗死患者HT发生,且与患者预后呈负相关。

南极海洋产耐有机溶剂变性剂氧化剂蛋白酶链霉菌菌株XE-1的初步鉴定及酶学性质(英文)

【目的】从南极海泥土壤中分离得到一株高产蛋白酶的放线菌(XE-1),对所产蛋白酶进行纯化以得到具有特殊性质的酶产物。【方法】通过对XE-1的生理生化和16S rRNA基因序列分析,初步将其确定为灰红链霉菌的变种。利用乙醇沉淀、离子交换、凝胶等方法纯化后,利用冻干浓缩获得其胞外蛋白酶,用SDSPAGE测定分子量并进行性质表征。【结果】得到一种对高浓度的有机溶剂、变性剂、氧化剂耐受的,表观分子量为14kDa的碱性丝氨酸蛋白酶,进一步分析,其最适pH 8.2,温度为55℃,米氏常数Km和Vmax分别为1.9mg/mL和973 u/mL。此蛋白酶活性于25%的有机溶剂为50%-180%的初始活性;在不同浓度的氧化剂中为110%-140%的初始活性,在0.2 mol/L到4 mol/L的变性剂中表现为100%-150%的初始活性。【结论】从南极海洋链霉菌XE-1中分离得到一种耐有机溶剂、变性剂、氧化剂,大小约为14kDa碱性蛋白酶,其特殊的酶学性质可用于工业生产或药学等领域。

LMP2基因多态性与云南汉族人群非小细胞肺癌的发生发展的相关性

目的:探讨云南汉族人群低相对分子量蛋白酶体(LMP)2基因单核苷酸多态性(SNP)与非小细胞肺癌的相关性。方法:选择云南汉族非小细胞肺癌患者467人(病例组)和健康正常对照490人(对照组),对病例组患者进行病例分型和临床分期,采用TaqMan探针基因分型法对所有对象进行LMP2基因的3个SNPs(rs1351383、rs17587和rs2127675)位点基因分型,用卡方检验比较病例和对照组间3个SNP等位基因和基因型的分布差异,用Haploview软件构件这3个SNP的个体单倍型,并分析两组间及不同病理类型肺癌患者与对照间的单倍型分布差异。结果:3个SNP位点的等位基因及基因型在病例组和对照组中的分布差异均无统计学意义(P>0.05),但rs1351383位点的C等位基因在鳞癌组中的频率显著高于对照组,差异具有统计学意义(P=0.049,OR=0.769,95%CI:0.591~0.999);单倍型rs1351383-rs17587-rs2127675的G-C-G在病例组中(OR=1.461,95%CI:1.075~1.984)以及肺腺癌患者组(OR=1.608,95%CI:1.142~2.265)中的分布显著高于对照组,单倍型rs1351383-rs17587-rs2127675的G-C-A在总病例组中(OR=0.593,95%CI:0.422~0.834)以及肺腺癌患者组(OR=0.541,95%CI:0.365~20.823)中的分布显著低于对照组。结论:LMP2基因的3个SNPs(rs1351383、rs17587和rs2127675)单个位点与云南汉族人群肺癌无相关性,但3个SNPs构建的单倍型可能是云南汉族人群肺癌患病的风险因子。

LMP7、TAP2基因多态性与云南汉族非小细胞肺癌的相关性

目的:探讨低相对分子量蛋白酶体7基因(LMP 7)及抗原处理相关转运体2基因(TAP 2)中的单核苷酸多态性(SNP)与云南汉族人群非小细胞肺癌的相关性。方法:选取云南汉族非小细胞肺癌患者467例作为病例组、同期健康正常人群488例作为对照组,采用Taq Man探针基因分型方法对TAP2基因的SNP位点rs241447及LMP7基因的SNP位点rs2071543进行基因分型,分析rs241447和rs2071543等位基因和基因型在病例组和对照组间的分布差异,分析这两个SNP位点在肺癌不同临床分期的中分布差异。结果:rs241447在对照组和病例组中基因型的分布频率比较,差异有统计学意义(P=0.015);在超显性遗传模式下,rs241447基因型C/C-T/T可能是云南汉族人群非小细胞肺癌的风险因素(OR=1.38,95%CI为1.07~1.78,P=0.014),rs2071543的等位基因和基因型在对照组和病例组中的分布频率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TAP2基因中的SNP位点rs241447可能与云南汉族人群非小细胞肺癌的易感性相关。

云南省汉族人群LMP基因多态性与结核病易感性的关联性研究

目的:研究云南省汉族人群LMP2、LMP7基因单核苷酸多态性(SNP)与结核病(TB)的相关性。方法:选取449例云南省汉族TB患者(其中肺TB 324例、肺外TB 125例)作为病例组,367例健康人群作为对照组;采用SNaPshot分型法对LMP 2基因的3个SNP位点rs1351383(T>G)、rs17587(C>T)、rs2127675(A>G)和LMP 7基因的rs2071543(G>T)位点进行基因分型,比较这4个SNP位点等位基因和基因型在病例组和对照组中的频率,结合遗传模式分析和单倍型分析,研究LMP 2和LMP 7基因SNP多态性与TB的相关性。结果:经Bonferroni校正后,4个SNP位点的等位基因及基因型频率在病例组和对照组中差异均无统计学意义(P>0.0125);但在分层研究中,rs1351383位点的C等位基因在肺外TB患者中的频率显著高于对照组(P=0.010,OR=1.377,95%CI为1.030~1.841),加性遗传模式分析显示该位点基因型在病例组和对照组间频率的差异具有统计学意义(P=0.008,OR=1.520,95%CI为1.120~2.080);rs1351383-rs17587-rs2127675-rs2071543单倍型C-G-G-G在肺外TB患者中的频率显著高于对照组(P=0.003,OR=1.982,95%CI为1.246~3.154)。结论:云南省汉族人群中LMP基因的多态位点rs1351383的C等位基因及其rs1351383-rs17587-rs2127675-rs2071543单倍型C-G-G-G可能增加肺外TB的患病风险。

LMP基因多态性与脊髓灰质炎疫苗诱导抗体应答的相关性

目的探讨低相对分子量蛋白酶体(LMP)基因单核苷酸多态性位点(SNPs)与脊髓灰质炎疫苗序贯免疫诱导的脊髓灰质炎病毒抗体应答的相关性分析。方法选取357名2~3月龄的婴幼儿接种2剂灭活脊髓灰质炎疫苗(IPV,由Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三类脊灰病毒灭活制成)和1剂二价口服脊髓灰质炎疫苗(bOPV),于疫苗免疫前和基础免疫后第28天时检测婴幼儿血清中3种型别的脊髓灰质炎病毒中和抗体水平;采用TaqMan探针基因分型法对LMP 2基因SNPs位点rs17587(G>A)和LMP 7基因rs2071543(G>T)进行基因分型,分析这2个SNPs位点与脊髓灰质炎病毒抗体应答的相关性。结果Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和抗体几何平均滴度(GMT)水平在携带rs17587和rs2071543位点不同等位基因的个体间比较,差异无统计学意义(P>0.05);rs17587和rs2071543不同基因型携带者的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和抗体GMT水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);rs17587-AA基因型携带者的脊髓灰质炎病毒Ⅱ型中和抗体GMT水平高于AG和GG基因型携带者(P<0.05),但经Bonferroni校正后,rs17587-AA基因型携带者的脊髓灰质炎病毒Ⅱ型中和抗体GMT水平与GG基因型携带者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论LMP基因的SNPs位点rs2071543和rs17587与脊髓灰质炎疫苗免疫后抗体应答无相关性,不是影响脊髓灰质炎疫苗抗体应答的主要遗传因素。

Antioxidation Activities of Low-Molecular-Weight Gelatin Hydrolysate Isolated from the Sea Cucumber Stichopus japonicus

Gelatin extracted from the body wall of the sea cucumber （Stichopus japonicus） was hydrolyzed with flavourzyme. Low-molecular-weight gelatin hydrolysate （LMW-GH） of 700-- 1700 Da was produced using an ultrafiltration membrane bioreaetor system. Chemiluminescence analysis revealed that LMW-GH scavenges high free radicals in a concentration-dependent manner; IC50 value for superoxide and hydroxyl radicals was 442 and 285 μgmL-1, respectively. LMW-GH exhibited excellent inhibitory characteristics against melanin synthesis and tyrosinase activity in B16 cells. Furthermore, LMW-GH notably increased in- traeellular glutathione （GSH）, which in turn suppressed melanogenesis. LMW-GH performs antioxidation activity, holding the potential of being used as a valuable ingredient in function foods, cosmetics and pharmaceuticals or nutriceuticals.

海南黎族人群LMP/TAP基因单倍体型与结核病的相关性

目的探讨中国海南黎族人群低分子量蛋白酶体、抗原处理相关转运体基因单倍体型与肺结核病(TB)感染的易感性关联。方法应用PCR-RFLP技术对205例海南黎族肺结核患者及217例海南黎族健康人群LMP基因(即LMP2 Codon60/LMP7 Codon145这两个多态位点)和TAP基因(/即TAP1-1 Codon333/TAP1-2 Codon 637这两个多态位点)共四个多态性位点进行检测,采用PHASE1.0软件构建这四个多态性位点的个体单倍体型,并对其易感性进行分析。结果对所有的研究对象进行PCR-RFLP检测结果显示:LMP基因和TAP基因在两组人群中具有多态性;在这四个位点所构建的单倍体型中,我们的研究发现含有--B/+B/B、--/H+H/H单倍体型的个体在两组人群中差异有显著性,分别为OR=3.674,P<0.0001,95%CI[2.254-5.9888]和OR=3.573,P=0.009,95%CI[1.379-9.263];--/G+G/G、--/I+I/I单倍体型高于对照组,有统计学意义(P<0.05),分别为OR=0.33,P=0.043,95%CI[0.115-0.968]和P=0.034,OR=2.91,95%CI[1.084-7.807]。结论在这两个基因四个位点所构建的单倍体型中具有--B/+B/B、--/H+H/H单倍体的个体对于海南黎族结核的发生具有更强的易感关联,其增加结核患病风险约为3.674倍和3.573倍;而--G/+G/G、单倍体型和--/I+I/I单倍体型在病例组和结核组比较,均有统计学意义,(P<0.05),显示弱相关性;对于结核的发生也有着弱的易患关联,其增加结核患病风险约为0.33倍和2.91倍。

白血病细胞HL-60诱导分化后LMP/TAP的表达变化及其意义

目的研究急性髓系白血病细胞HL-60诱导分化后抗原处理相关转运体蛋白(TAP)及低分子量蛋白酶体(LMP)在该细胞模型中的表达变化及其意义。方法本实验分对照组、ATRA诱导组和PMA诱导组;Wright-Gimesa染色观察HL-60细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标记CD11b、CD14的表达,RT-PCR检测LMP/TAP在mRNA水平的表达,Western blotting检测细胞TAP2基因的蛋白表达。结果 0.8μmol/L全反式维甲酸(ATRA)和50 nmol/L乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)分别作用HL-60细胞72 h后可显著抑制细胞增殖,并诱导细胞向成熟粒细胞及巨噬细胞方向分化;CD11b和CD14表达水平均明显升高(P均<0.05);TAP/LMP的mRNA表达水平及TAP2的蛋白表达水平均升高(P均<0.05)。结论白血病来源的单核样细胞具有一定的免疫功能表型,为进一步研究LMP/TAP在白血病免疫逃逸中的作用奠定基础。