不同SDS电泳法对家蚕低分子Kunitz型抑制剂分子量鉴定的影响

采用 15 %SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和tricine -SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分别对家蚕血液中低分子Kunitz型胰凝乳蛋白酶抑制剂CI - 13的分子量进行了检测 ,SDS -PAGE结果为12 .5kDa ,而tricineSDS -PAGE结果为 7.3kDa。另根据CI - 13的氨基酸组成 ,算出分子量为 7,113Da ,这表明tricineSDS -PAGE的结果与氨基酸组成测定值接近 。

新型两亲性低分子多胺页岩抑制剂的特性

为提高胺类抑制剂的抑制性和抗温性,优选一种新型两亲性低分子多胺BHTA,设计页岩滚动分散实验、抑制膨润土造浆实验、粒度分布测试评价抑制性能.结果表明:BHTA抑制性优于传统的无机盐类抑制剂KCl和国外聚胺产品Ultrahib,能有效抑制黏土水化膨胀和分散,耐温性优良,可用作泥页岩水化抑制剂.采用Zeta电位测试、红外光谱分析、改性膨润土吸水实验及X线衍射分析测试黏土层间距等,探讨BHTA的作用机理,表明BHTA主要通过质子化胺基与黏土颗粒的静电作用、氢键吸附在黏土表面,以静电吸附为主,通过疏水屏蔽作用发挥抑制作用;BHTA单层吸附进入黏土层间,能最大限度降低黏土水化层间距,破坏黏土水化结构.

低分子量肝素对免疫复合物型肾炎大鼠纤溶酶原激活物抑制剂-1的影响

目的 观察低分子肝素 (LMWH)治疗免疫复合物型肾炎大鼠蛋白尿的效果及其对肾组织纤溶酶原激活物抑制剂 - 1 (PAI- 1 )的作用。方法 将 2 0只大鼠平均分为正常组、对照组、模型组及 L MWH治疗组。模型组及 LMWH治疗组大鼠以阳离子化小牛血清白蛋白 (C- BSA)诱导成为免疫复合物型肾炎 ,LMWH治疗组以 1 2 5u日 1次皮下注射 ,共治疗 8w。结果 L MWH治疗组尿蛋白下降 ,肾组织中 PAI- 1、纤维粘连蛋白(FN)、层粘连蛋白 (LN)较模型组明显下降 (P<0 .0 5) ,肾小球系膜基质增生有显著改变 ,但上述各项指标均未达到正常组及对照组水平 (P>0 .0 5) ;各组凝血酶原时间 (PT) ,部分凝血活酶时间 (APTT)比较差别无显著意义。结论 L MWH可以降低免疫复合物型肾炎大鼠蛋白尿 ,降低肾组织中PAI的表达 ,通过干扰 PAI- 1减轻肾小球系膜基质增生 ,而且出血危险性小 ,便于长期应用。

大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂(SKTI)研究进展

大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂 (SKTI)是一种典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂 ,主要集中在大豆的子叶中。近 60年来 ,对其生化特性及结构已有较多研究 ,通常认为这种蛋白酶抑制剂具有贮藏、调节内源蛋白酶活性及植物防御等作用。研究表明 ,这种蛋白酶抑制剂抗虫谱广 ,能显著抑制幼虫的生长发育不易产生抗性 ,对人畜无害 ,因此对其进行研究及开发利用具有重要的经济和社会效益。迄今为止 ,至少已有 4种基因被克隆 ,通过转基因技术在烟草、水稻、小麦等作物获得了抗性植株 .本文从SKTI的类型、基因克隆及生理功能等方面作一简单综述。

大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂新类型Tid的全序列分析

It was widely thought that 3 variants of Kunitz type trypsin inhibitor(SBTi A 2) existed in soybean seed storage protein.Three of codominant alleles Ti a,Ti b and Ti c were identified to decode these SBTi A 2 inhibitors and the amino acid sequences of them were determined,of which one or more different amino acid were found.Ti d was a new variant allele of SBTi A 2 discovered after analyzing more than 15 000 samples of soybean seed in China.In order to study the structure features of Ti d protein,the amino acid sequence of this protein was deduced from its coding region which was amplified by PCR from soybean genomic DNA and sequenced.By comparison with Ti a protein,two different amino acid residue were found between Ti a and Ti d proteins.One was an extra Ala inserted in the signal peptide of Ti d,with 8 residues from N terminal,and the other existed in the mature protein,with Glu 69 in Ti a protein turned into Lys 69 in Ti d protein.The amino acid sequence of Ti d mature protein was also different from those of Ti a and Ti b.

基于分子对接和QSAR方法预测B-Raf Ⅱ型抑制剂活性

B-Raf激酶在促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路中起着重要作用,已被确定为癌症治疗非常有吸引力的靶标.新型高效B-Raf抑制剂的开发成为癌症治疗的一个热门研究领域.本文以结构多样的B-Raf II型抑制剂为研究对象,联合应用分子对接和定量构效关系(QSAR)模型研究其定量构效关系去探讨抑制活性的起源.两个主题作为研究重点:生物活性构象和描述符.首先对分子对接方法(Glide、Gold、Ligand Fit、Cdocker和Libdock)进行准确性评价,后将研究的对象分子对接到B-Raf活性位点并获得生物活性构象.基于准确的对接结果,计算得到16个打分评价函数和21个能量描述符,以此构建定量构效关系模型.QSAR结果表明模型具有高度精确的拟合和强的预测能力(模型M1:r2=0.852,=0.790,=0.864;模型M2:r2=0.738,=0.812,=0.8605).同时探讨了对抑制活性有重要影响的描述符,结果表明打分评价函数(G_Score,-ECD,Dock_Score,PMF)与能量描述符(S(hb_ext),DE(int),Emodel)对抑制活性影响非常大.通过虚拟筛选和QSAR模型理论预测,一些新的具有潜在抑制活性的化合物作为B-Raf II型抑制剂被获得.上述信息对于进一步设计新颖高效的B-Raf II型抑制剂提供了有用的指导.

多年生野生大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及分析

利用RT-PCR方法,从对蚜虫高抗的多年生野生大豆短绒野大豆(G.tomentella)(2n=78)未成熟子叶中扩增到了大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂同源基因单一目的片段,该基因和蛋白分别被命名为KTiPW54和KTiPW54。序列分析表明:该片段为654 bp的完整编码序列,编码218个氨基酸残基,编码的蛋白与栽培大豆(G.max)、野生大豆(G.soja)、短绒野大豆(G.tomentella)的Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因编码蛋白高度保守的区域一致。将KTiPW54编码区克隆到表达载体pTWIN1,在宿主菌BL21(DE3)中经IPTG诱导获得高效表达。

大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因RNAi载体的构建

采用PCR技术扩增得到胰蛋白酶抑制剂KTi基因正义和反义片段、大豆种子特异性启动子7αP和作为内含子的GUS基因片段,将其分别连入克隆载体pMD18-TVector中。然后以植物表达载体pCAMBIA1301为基础,通过AHLG作为中间载体,根据RNAi原理将组成RNAi结构的4个目的片段分别连入其中,成功构建了种子特异性RNAi表达载体p1301-KTiRi。研究结果为RNAi技术在大豆品质改良中的应用提供了基础。

Kunitz型胰蛋白酶抑制剂缺失大豆新品系培育及其饲草价值分析

大豆作为饲料蛋白质的重要来源,既含有丰富的营养成分,也有影响蛋白质消化吸收的胰蛋白酶抑制剂等抗营养因子。本研究以合丰50为母本,中黄16为父本,通过常规杂交育种及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的分子辅助育种技术,经过多年选育,获得适合黑龙江省栽培的Kunitz型胰蛋白酶抑制剂缺失稳定遗传的大豆新品系“HZ8009”。该品系生育期120 d,植株高大茎叶繁茂,无限结荚习性,籽粒蛋白质含量42%,脂肪含量20%。利用饲草质量检测技术对高代品系“HZ7009”植株饲草营养价值分析表明,与牡丹江秣食豆相比,“HZ7009”干草产量高21.39%,干物质中粗蛋白质含量高3.92%,且最佳刈割时期为花期至结荚期。大豆新品系“HZ8009”具有高蛋白、高生物量的特性,可作饲草资源品种加以广泛利用。

日本囊对虾Kunitz型蛋白酶抑制剂在毕赤酵母中的表达纯化及活性分析

SKPI(shrimp Kunitz-type protease inhibitor)是日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)体内的一个小分子多肽,含有一个Kunitz型结构域,属于丝氨酸蛋白酶抑制剂。目前已知丝氨酸蛋白酶抑制剂在节肢动物免疫系统中起着非常重要的作用,为了了解SKPI在对虾天然免疫系统中的作用,首先对其进行了重组表达。从日本囊对虾肝胰腺中扩增skpi的cDNA片段,插入改造后的pPIC9K酵母表达载体,获得的重组质粒转化至毕赤酵母GS115进行表达。由于改造的pPIC9K载体加入了6-His标签,因此利用Ni Sepharose High Performance对SKPI进行了高效纯化。初步的活性研究表明,重组表达的SKPI能特异性地抑制胰蛋白酶的水解活性。

磷酸二酯酶 3型抑制剂西洛他唑对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞释放可溶性粘附分子的影响(英文)

目的 :研究新型磷酸二酯酶 3型抑制剂西洛他唑 (cilostazol)对TNF α诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)释放可溶性细胞粘附分子 (sCAMs)的影响 ,并探讨其作用机制。方法 :体外培养第 4～ 6代HUVECs,以TNF α (10 μg·L-1)刺激细胞 ,并与西洛他唑 (1～ 10 μmol·L-1)共培养 2 4h ,取培养上清 ,通过ELISA法测定可溶性血管细胞粘附分子 1(sV CAM 1)、细胞间粘附分子 1(sICAM 1)以及E 选择素(sELAM 1,sE selectin) ,并以四唑蓝 (MTT)法考察细胞生长状态。结果 :1～ 10 μmol·L-1的西洛他唑对TNF α诱导的HUVECs释放sICAM 1和sE selectin无明显影响 ,但显著抑制sVCAM 1的生成 ,并且该作用被一种非选择性一氧化氮合成酶 (NOS)抑制剂Lω NAME(0 .1μmol·L-1)所阻断。MTT法测定结果显示 ,西洛他唑作用于HUVECs 2 4h ,低浓度(1μmol·L-1)可显著改善细胞生长状态 ;高浓度(30 μmol·L-1)表现为抑制 ,而中浓度 (10 μmol·L-1)对细胞生长状态几乎无影响。结论 :西洛他唑显著抑制由TNF α诱导的HUVECs释放sVCAM 1,该作用可能与激活NOS并通过NO依赖性通路介导有关 ,提示该药可在一定程度上对抗由细胞因子所引起的部分粘附反应 。

A型肉毒毒素抑制剂的分子全息定量构效关系研究

目的:建立A型肉毒毒素抑制剂的定量构效关系模型。方法:应用分子全息定量构效关系(HQSAR)技术,研究了14种A型肉毒毒素抑制剂的抑制活性与其二维分子结构之间的关系,讨论了碎片区分参数及碎片长度对模型质量的影响。结果:最佳全息条件下产生的模型相关系数r2为0.780,交叉验证相关系数q2LOO为0.583。所建模型具有良好的拟和效果和较高的预测能力,HQSAR模型贡献图显示抑制剂分子中的噻吩环及羟胺对活性有较大贡献。结论:本研究对新抑制剂的设计具有一定的指导作用。

血管转换酶抑制剂联合低分子肝素治疗糖尿病肾病的临床研究

目的探讨血管转换酶抑制剂联合低分子肝素治疗糖尿病肾病的方法及疗效。方法随机抽取收治的80名糖尿病肾病患者,随机分为两组。对照组38名,行常规治疗方案。实验组42名,加用血管转换酶抑制剂联合低分子肝素治疗。随访1～2个月,对比两组患者的临床疗效。结果两组间相比,治疗后实验组患者的总有效率为95.2%,高于对照组的81.6%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论运用血管转换酶抑制剂联合低分子肝素治疗糖尿病肾病,可显著提高临床疗效,改善患者的生活质量。

低分子肝素钙联合骨吸收抑制剂对老年压缩性腰椎骨折术后骨密度的影响

目的探讨低分子肝素钙联合骨吸收抑制剂对老年压缩性腰椎骨折术后骨密度的影响。方法选择该院收治的老年压缩性腰椎骨折患者60例,随机分为观察组和对照组。两组均实施经皮椎体成形术,对照组术后服用碳酸钙D3片,观察组术后给予阿仑膦酸钠服用,连续用药3个月。观察两组治疗前后骨密度、日常生活活动能力、术椎椎体高度、疼痛程度改变情况。结果观察组治疗后的腰椎骨密度、股骨颈骨密度、椎体前缘高度、椎体中部高度分别高于对照组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗后的日常活动能力评分和疼痛评分分别低于对照组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论低分子肝素钙联合骨吸收抑制剂(阿仑膦酸钠)能够提高老年压缩性腰椎骨折术后骨密度,减轻术后疼痛,利于术后日常生活活动能力恢复,效果显著。

低分子有机浮选抑制剂

本文分羟基羧酸、硫代酸盐、硫基化合物、萘磺酸及苯磺酸介绍了近年来在浮选工业上应用的十七种有机低分子抑制剂,并介绍了其中部分抑制剂的抑制机理。

低分子肝素联合血管转换酶抑制剂对糖尿病肾病显性蛋白尿的治疗观察

目的观察低分子肝素联合血管转换酶抑制剂对糖尿病肾病显性蛋白尿的治疗效果。方法将64例糖尿病肾病显性蛋白尿患者随机分为A、B、C3组。A组常规降血糖和饮食控制及对症治疗;B组在A组的基础上加用低分子肝素2500U皮下注射,2次/d;C组在A组的基础上加用洛汀新10mg口服,2次/d;D组在A组的基础上加用低分子肝素2500U皮下注射,2次/d,同时给予洛汀新10mg口服,2次/d。观察治疗前后24h尿蛋白定量、血清白蛋白(ALB)、血肌酐(Scr)、内生肌酐清除率(Ccr)的变化。结果A组病情改善不明显,部分病例有不同程度的恶化;B组及C组24h蛋白尿定量均有明显下降、ALB明显升高,Ccr有轻度下降,但不明显。D组24h蛋白尿明显下降,ALB及Ccr均明显升高。结论低分子肝素联合血管转换酶抑制剂对糖尿病肾病显性蛋白尿的治疗有明显效果,且优于单用LMWH或单用血管转换酶抑制剂。

低分子肝素联合血管转换酶抑制剂在糖尿病肾病中的应用

目的 :观察低分子肝素联合血管转换酶抑制剂对糖尿病肾病的治疗效果。方法 :5 0例糖尿病肾病患者随机分为A组、B组 ,A组仅给降糖、降脂、保肾康治疗 ,B组在A组常规治疗的基础上加用低分子肝素 5 0 0 0u ,每日 2次皮下注射、洛汀新 5mg每日 1次口服 ,1 0d为 1疗程。结果 :B组经治疗后尿蛋白明显减少 (P <0 0 5 ) ,A组治疗后无明显变化 ,AB两组疗效比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论 :低分子肝素联合血管转换酶抑制剂对糖尿病肾病的尿蛋白排出有显著疗效。

Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构与功能研究

蛋白酶抑制剂在酶学及蛋白质的结构与功能关系研究中有重要意义,Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂是其中最重要的,也是研究最广泛的蛋白酶抑制剂之一.该类蛋白酶抑制剂三维结构高度保守:由一个明显的疏水核心、三对高度保守的二硫键桥、三链β 折叠和一个N端310螺旋及一个C端α 螺旋组成.3对二硫键对分子空间结构的稳定起着非常重要的作用.这一类型抑制剂有5个主要的活性位点:P1、P1′、P3、P3′、P4,它们都位于一个溶剂暴露的环上.P1位点是抑制作用的关键活性位点,抑制剂的专一性由P1位点氨基酸残基的性质决定;P1′位点氨基酸残基的侧链大小对抑制剂 酶的结合常数有很大影响,用大的侧链残基取代会导致结合常数降低;P4位点残基被取代经常产生负效应,会导致活性区域环的构象发生很大改变,从而影响酶与抑制剂的结合.

血清内皮细胞特异分子-1、 脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂水平对2型糖尿病大血管病变诊断的临床价值

目的探讨血清内皮细胞特异分子-1(Endocan-1)、脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)水平对2型糖尿病(T2DM)大血管病变(MVC)的临床诊断意义。方法选取72例患者,根据是否合并大血管疾病,分为T2DM组36例和MVC组36例;此外,选同期36例健康者作为对照组。利用酶联免疫吸附检测技术(ELISA)测定3组血清Endocan-1、Vaspin水平。结果T2DM组和MVC组血清Endocan-1水平均高于对照组,且MVC组高于T2DM组,差异有统计学意义(P<0.05)。MCV组Vaspin水平均低于T2DM组和对照组,T2DM组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Endocan-1与T2DM合并大血管疾病呈正相关,Vaspin与T2DM合并大血管疾病呈负相关。MVC组血清Endocan-1和Vaspin的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.910%、0.720%,截断值分别为1410 pg/mL、890 pg/mL,敏感度分别为81%、85%,特异度分别为76%、73%。结论血清Endocan-1、Vaspin的水平均与T2DM大血管病变相关,其可作为T2DM大血管病变的诊断依据。

TGF-βⅡ型受体小分子抑制剂ITD-1对骨髓基质细胞成骨分化和血管形成的作用

目的探讨TGF-βⅡ型受体(transforming growth factor beta receptorⅡ,TGFBR2)的小分子抑制剂ITD-1对小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化和血管形成的影响。方法将C57/BL6小鼠BMSCs分为3组:不经药物处理为空白组;1‰DMSO处理为DMSO组;10μmol/L ITD-1处理为ITD-1组。采用CCK-8检测细胞增殖变化;流式细胞仪检测凋亡细胞比例;实时荧光定量PCR(qPCR)测定成骨标志物碱性磷酸酶(ALP)、ostrix(OSX)、Ⅰ型胶原(collagen1,COL1)和骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)及成血管相关标志物血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管生成素1(angiopoietin1,ANGPT1)mRNA的表达;碱性磷酸酶染色检测ALP表达情况;茜素红染色检测成骨晚期矿化水平;免疫荧光染色检测成骨标志物OPN及成血管标志物VEGF的表达;小鼠组织培养实验检测体外培养小鼠肱骨骨密度。结果碱性磷酸酶染色显示ITD-1组染色变浅,茜素红染色结果提示ITD-1组钙盐结节显著减少;与DMSO组比较,ITD-1组BMSCs增殖水平显著降低;流式细胞仪检测显示10μmol/L的ITD-1不导致细胞凋亡;与DMSO组比较,ITD-1组成骨标志物ALP、OSX、COL1及OCN的mRNA相对表达量均显著降低(P<0.01),但成血管标志物VEGF和ANGPT1的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),OPN表达降低而VEGF表达升高(P<0.05),肱骨骨密度也显著降低(P<0.05)。结论TGFBR2的小分子抑制剂ITD-1可抑制骨髓基质细胞增殖,在不影响细胞凋亡的情况下对成骨分化具有显著抑制作用,但显著增强血管形成。