Rb1基因第24和25外显子缺失导致低外显性视网膜母细胞瘤

目的 探讨抑癌基因 Rb1大片段缺失与低外显性视网膜母细胞瘤 (low- penetrance retinoblas-toma)家系的相关性。方法 应用定量多重 PCR技术 (quantitative fluorescentmultiplex PCR,QFM- PCR)筛查 Rb1突变。应用长片段聚合酶链反应 (long fragment PCR)、逆转录聚合酶链反应 (reverse transcrip-tase- PCR,RT- PCR)、亚克隆、直接测序、Western印迹等技术分析 Rb1突变点的特征。结果 发现 1个家族4代 12 2人中 ,共有 18人携带 Rb1第 2 4和 2 5外显子缺失突变 ,而这些高风险的 Rb1突变基因携带者中 ,只有 11人 (39% )形成单眼或双眼视网膜母细胞瘤 (retinoblastoma ,RB) ,比常见的 Rb1基因突变者中有95 %形成 RB的发病率明显较低。该突变的缺失长达 4 kb基因组 DNA。 c DNA、RNA和测序研究证实 ,有174 bp碱基缺失导致 5 8个密码子丢失。 Western印迹检测出一个比正常 RB1蛋白短、相对分子质量 6 0 0 0(约 6 0 0 0 Da)的 RB突变蛋白得以表达。结论 应用 QFM- PCR技术在一个 RB呈低外显性的大家族中发现Rb1第 2 4和 2 5外显子完全缺失。该突变在基因组 DNA、RNA和蛋白质水平的研究结果 ,为遗传性低外显性视网膜母细胞瘤与该段 DNA缺失相关提供了新的依据 ,并为遗传咨询提供了有价值的资料。

参芪扶正注射液在眼外期视网膜母细胞瘤中的应用

目的总结参芪扶正注射液对眼外期视网膜母细胞瘤(RB)患儿化疗相关毒副作用的疗效。方法回顾性分析2005年9月-2010年5月本科收治的眼外期患儿101例(男61例,女40例),总结研究组(应用参芪扶正注射液+化疗及放疗)以及对照组(单纯应用化疗及放疗)的临床资料。分析外周血WBC下降水平及恢复时间、生活质量评分、化疗相关毒副作用的统计学差异。结果 (1)造血恢复:研究组WBC恢复中位时间为(10.1±1.5)d,对照组为(13.4±2.3)d,差异有显著性(χ2=4.56,P=0.032);(2)KPS评分:研究组为90.4±2.45,对照组为80.2±2.36,差异有显著性(t=4.659,P=0.001);(3)化疗相关毒副作用:研究组Ⅰ级51例(83.6%),Ⅱ级8例(13.1%),Ⅲ级2例(3.4%);对照组Ⅰ级为28例(70.0%),Ⅱ级6例(15.0%),Ⅲ级3例(7.5%),Ⅳ级3例(7.5%),差异有显著性(t=3.058,P=0.03)。结论参芪扶正注射液可提高眼外期RB患儿化疗后生活质量,缩短骨髓恢复时间并减轻化疗相关毒副作用。参芪扶正注射液可应用于晚期RB患儿的辅助治疗。

微小RNA与磷酸化胞外信号调节激酶在视网膜母细胞瘤中的表达及其相关性分析

目的探讨miRNA和磷酸化胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal regulated kinase,P-ERK)在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)中表达的变化及其相关性。方法手术切除获取Rb组织标本经组织病理学检查分为低分化、中分化和高分化Rb组织,肿瘤外的正常视网膜组织作为对照组;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测正常视网膜组织和不同分化程度Rb组织中miRNA表达水平,Western blot检测正常视网膜组织和不同分化程度Rb组织中P-ERK蛋白表达情况。结果 Rb组织中miRNA基因表达(低分化0.214±0.140、中分化0.246±0.200、高分化0.256±0.180)、P-ERK蛋白表达(低分化0.367±0.270、中分化0.562±0.190、高分化0.609±0.110)明显高于癌旁正常视网膜组织(miRNA:0.200±0.190、P-ERK蛋白:0.211±0.260),差异均有统计学意义(均为P<0.05)。miRNA、P-ERK蛋白表达与Rb组织分化程度有相关性;miRNA和P-ERK蛋白表达呈正相关。结论 miRNA和P-ERK蛋白在Rb组织中表达均高于正常视网膜组织,并且二者表达呈正相关。

基质金属蛋白酶-2和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在视网膜母细胞瘤中的表达

目的:探讨基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)中的表达及其与临床病程的关系。方法:用免疫组织化学SABC法分别检测39例Rb中MMP-2及EMMPRIN的表达;用LEICA IM 50型全自动医学图像分析系统测量其平均灰度值,比较不同临床和病理阶段Rb中表达MMP-2和EMMPRIN的差异及二者阳性表达之间的关系。结果:Rb患者39例中MMP-2阳性表达35例(灰度值为109.64±14.52),占90%;EMMPRIN阳性表达33例(灰度值为108.01±13.60),占85%;青光眼期Rb中MMP-2和EMMPRIN的表达(灰度值分别为108.21±11.47,107.56±14.32)明显高于眼内期(灰度值分别为121.13±11.32,119.34±12.66;P<0.01,P<0.05),眼外期二者表达(灰度值分别为91.03±11.71,92.26±12.93)明显高于青光眼期(P<0.01,P<0.05);视神经浸润组Rb中MMP-2和EMMPRIN的表达(灰度值分别为103.89±13.39,105.23±14.00)明显高于无视神经浸润组(灰度值分别为118.39±15.11,117.53±16.13;P<0.01,P<0.05)。结论:MMP-2及EMMPRIN的表达水平可能与Rb的浸润转移有关。

视网膜母细胞瘤的外照射放疗

视网膜母细胞瘤是最常见的儿童眼内肿瘤。由于放射治疗导致外观发育不全[1,2]和诱发肿瘤风险[3],因此外照射不再是治疗视网膜母细胞瘤的首选。随着计算机技术的进步和影像学的发展,放射治疗经历体表解剖定位阶段、骨性解剖定位阶段,发展为基于三维影像重建而实施定位、计划、照射时代。现代放疗技术减少了正常组织的照射剂量,外照射治疗视网膜母细胞瘤的价值需重新认识[4]。

基质金属蛋白酶-14和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在视网膜母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-14(matrix metalloproteinase-14,MMP-14)和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extra-cellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)中的表达及其与临床病程的关系。方法用免疫组织化学SP法分别检测39例Rb中MMP-14及EMMPRIN的表达;用LEICA IM 50型全自动医学图像分析系统测量其平均灰度值,比较不同临床和病理阶段Rb中表达MMP-14和EMMPRIN的差异及二者阳性表达之间的关系。结果39例Rb中MMP-14阳性表达34例,占87.18%;EMMPRIN阳性表达33例,占84.62%;青光眼期Rb中MMP-14和EMMPRIN的表达明显高于眼内期(P<0.01及P<0.05),眼外期二者表达明显高于青光眼期(P<0.01及P<0.05);视神经浸润组Rb中MMP-14和EMMPRIN的表达明显高于无视神经浸润组(P<0.01及P<0.05);Rb中MMP-14和EMMPRIN的阳性表达水平呈密切相关(P<0.01)。结论MMP-14及EMMPRIN的表达水平可能与Rb的浸润转移有关,二者共同促进Rb的浸润转移。

视网膜母细胞瘤体外集落培养的实验研究

研究了不同的培养条件对视网膜母细胞瘤细胞株Ｙ－７９及Ｓｏ－Ｒｂ５０体外集落形成能力的影响。结果表明，甲基纤维素法优于双琼脂培养法，各种培养条件中以甲基纤维素加胎牛血清为佳。实验还表明，来源于Ｒｂ裸鼠移植瘤的组织标本在体外很难进行集落培养，有待于进一步研究。

视网膜母细胞瘤细胞的体外培养及建系

对60例视网膜母细胞瘤进行体外培养,其中10例生长期超过3个月,1例已建成连续视网膜母细胞瘤系(SO-Rb50)我们认为视网膜母细胞瘤体外培养能否成功,除与Rb细胞的恶性程度有关外,尚与取材方法,培养基的成分、接种及传代细胞的优选及密度等有密切关系。

体外视网膜母细胞瘤细胞对不同化疗药物的敏感性分析

【目的】研究视网膜母细胞瘤(retinoblastma,RB)细胞对化疗药物的体外敏感性,以制定合理的RB临床个体化化疗方案。【方法】应用3-(4,5)-双甲基-2噻唑-(2,5)-二甲基溴化四氮唑蓝(MTT)体外药敏法,测定35例RB患儿瘤细胞对常用的阿霉素、长春新碱、鬼臼乙叉苷、卡铂、甲氨喋呤、放线菌素D和噻替哌共7种化疗药物的敏感性。【结果】RB的药敏可评价率是86.7%。同一种药物对不同的肿瘤细胞有不同的抑制率,7种药物的最高抑制率是卡铂(91.8%)、噻替哌(90.7%)、放线菌素D(89.7%)、鬼臼乙叉苷(88.4%)、阿霉素(86.61%)、甲氨喋呤(58.66%)、长春新碱(54.95%);最低的直接抑制率均是0。【结论】不同RB个体的瘤细胞对不同的化疗药物有不同的敏感性,体外药敏试验筛选敏感化疗药物对临床RB个体化治疗有应用价值。

自体外周血造血干细胞移植在小儿视网膜母细胞瘤的临床应用

目的探讨大剂量化疗并自体外周血造血干细胞移植(APBSCT)治疗小儿眼外期视网膜母细胞瘤的可行性及疗效。方法对3例视网膜母细胞瘤眼外转移患儿,在常规化疗后进行APBSCT治疗。大剂量化疗(预处理)方案采用卡铂(250 mg/m2,-7～-3 d),依托泊苷(350 mg/m2,-7～-3 d),环磷酰胺(1.6 g/m2,-6～-3 d)。从第0天开始输入自体外周血造血干细胞。结果3例患儿均获得移植成功,外周血白细胞总数>1.0×109/L的平均时间为10 d,中性粒细胞>0.5×109/L的平均时间为12 d,白细胞总数恢复正常的平均时间为15 d,血小板计数>50×109/L的平均时间为23 d;血红蛋白含量平均在移植后第15天升至100 g/L;随访时间6个月～14个月,至今3例患儿均生存。结论大剂量化疗加自体干细胞移植是治疗眼外转移的视网膜母细胞瘤的有效治疗方法。因观察例数和随访时间有限,其远期效果还有待进一步评估。

视网膜母细胞瘤综合治疗的临床分析

目的分析视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)患儿综合治疗疗效。方法对67例(92只眼)视网膜母细胞瘤患儿采用化疗、激光光凝、冷冻及眼球摘除相结合的综合治疗,对其疗效进行临床分析。结果患儿总的生存率为97.0%(65/67),92只患眼中A期(8只眼)和B期(15只眼)保眼率均为100.0%,C期(9只眼)保眼率77.8%,D期(35只眼)保眼率51.4%,E期(25只眼)保眼率16.0%。患儿最常见的首发症状为白瞳症74.6%(50/67),斜视11.9%(8/67),眼红痛,视力下降及其他症状13.4%(9/67),67例患者中仅2例(3.0%)有家族遗传史。病理检查显示单纯眼球摘除有脉络膜或视神经侵犯的为41.7%(5/12),而保守治疗后眼摘的为75.0%(21/28)。结论 RB的综合治疗可以提高RB患儿的保眼率及生存率,但E期患儿的眼摘比例仍然很高,因此早期发现及治疗是关键,同时要注意保眼治疗中肿瘤转移的风险。

视网膜母细胞瘤治疗研究进展

随着现代诊疗技术的提高,视网膜母细胞瘤的传统治疗目标和模式正在发生转变,目前视网膜母细胞瘤的治疗方法主要包括眼球摘除术、化学疗法、外放射疗法、温热疗法以及基因疗法。关于这些治疗方法的使用近年来又有了一些新的观点,本文就这些新的观点和治疗方法作一综述。

新生儿视网膜母细胞瘤1例

视网膜母细胞瘤是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤,具有较高的致盲率和致死率,发病率约为1：14000至1：20000[1],90%的患儿在3岁前发病,占5岁以下儿童肿瘤的6.1%。双眼发病约占30%～35%,双眼受累的发病年龄要早于单眼者。约40%病例属遗传型,为常染色体显性遗传;60%为非遗传型,为视网膜母细胞突变所致。由于视网膜母细胞瘤发生于婴幼儿,早期不容易发现,

小檗胺对视网膜母细胞瘤HXO-RB_(44)细胞增殖的抑制作用

目的:探讨小檗胺对视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞增殖和细胞周期的影响。方法:体外培养视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定0、2、4、8、16、32mg/L小檗胺作用24、48和72h后对HXO-RB44细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测0、4、8、16mg/L小檗胺作用HXO-RB44细胞24h后的细胞周期。结果:随着小檗胺浓度的增加和作用时间的延长,其对HXO-RB44抑制率逐渐增加,作用24、48、72h的IC50分别为25.26、10.94和6.25mg/L。流式细胞分析显示,与空白对照组比较,小檗胺可显著抑制细胞周期,使G2/M期细胞增多(P<0.01)。结论:小檗胺在体外可抑制视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞的增殖,并可诱导G2/M期阻滞,可能成为一种有效的抗视网膜母细胞瘤药物。

视网膜母细胞瘤治疗的研究进展

随着现代诊疗技术的提高,视网膜母细胞瘤(RB)传统治疗目标和模式正在发生转变,目前RB的治疗方法主要包括化学减容法、外照射放疗、激光光凝、巩膜敷贴放疗、温热疗法、冷冻疗法和手术治疗。这些治疗方法的使用近年来又有了一些新的观点,本文就这些新的观点和治疗方法作一综述。

视网膜母细胞瘤的治疗与护理进展

视网膜母细胞瘤（retinoblastoma,RB）是以视网膜内颗粒层、细胞层和外颗粒层为起源的胚胎性恶性肿瘤,是常染色体显性遗传病,是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤[1],占儿童致盲原因的5%[2]。其发病机制有Knudson提出的＂二次突变学说＂[3],分型标准由Linn MurphreeA[4]提出的ABC分级,分为A,B,C,D,E五级,主要观察目标是玻璃体和视网膜下腔RB细胞的播散种植。RB治疗难度大。

基质金属蛋白酶-9和Ki-67在视网膜母细胞瘤中的表达和意义

视网膜母细胞瘤（RB）是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤之一，对视力和生命有严重的损害和威胁[1]。大量研究表明，基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在多种恶性肿瘤中呈过表达，降解、破坏靠近肿瘤表面的细胞外基质，使肿瘤细胞能够沿着受损的基底膜向着周围组织浸润，最终导致肿瘤的侵袭和转移[2]。

Ets-1、MMP-1及TIMP-1在视网膜母细胞瘤中的表达

目的探讨 E26转录因子-1(E26 transformation-specific-1,Ets-1),基质金属蛋白酶-1(matrixmetalloproteinase-1,MMP-1)及其抑制剂(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1)在视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma Rb)中的表达及其与肿瘤的浸润及转移的关系。方法以免疫组织化学法检测视网膜母细胞瘤中的 Ets-1,MMP-1和 TIMP-1的表达,并以免疫组织化学法检测视网膜母细胞瘤中 CD34的表达,计算肿瘤的微血管密度值(microvessel density,MVD)。并依肿瘤的分级进行统计学处理。结果 Ets-1和 MMP-1在视网膜母细胞瘤中呈高表达,TIMP-1呈低表达。Ets-1和 MMP-1主要表达于癌细胞胞浆中。Ets-1和 MMP-1高表达组的微血管密度明显高于 Ets-1和 MMP-1低表达组(P<0.01)。结论 Ets-1和 MMP-1的高表达及 TIMP-1的低表达可能与视网膜母细胞瘤的转移浸润有关。

化疗与外光束放疗使视网膜母细胞瘤减缩作用的比较

目的：测定全身化疗或外光束放疗(EBRT)治疗晚期眼内视网膜母细胞瘤中瘤体减缩的时间进程与程度。方法：回顾性分析Reese-EllsworthⅣ和V期的视网膜母细胞瘤患儿，这些患儿经用全身化学减容术或EBRT初步保存眼球疗法。在初步治疗阶段最初6个月，每隔一个月记录一次研究变量，第12个月再记录一次。应用超声检查法、体格检查及眼底照相复习所确定的基底部面积和高度值，计算出肿瘤体积。主要结果测量：结果量度包括肿瘤体积、肿瘤减缩度、退行方式、与治疗相关的并发症、转移及存活。结果：26例患儿的26只眼被用来评估肿瘤反应；其中18例患儿接受全身化疗，8例患儿采用EBRT。平均随访36个月。化疗1个周期后，肿瘤体积平均减少68％。与之相比。EBRT开始后于相似的时间内(1个月)缩小12％(P<0.004)。12个月随访观察时两种治疗形式对肿瘤体积的减缩差异无显著性。在本系列中，全身化疗与EBRT二者均达到100％的眼球保存及100％的患儿存活。结论：根据所应用的初期治疗视网膜母细胞瘤减缩显示有差别的时间进程。全身化疗比EBRT有较早的肿瘤减缩。