电针对APP/PS1转基因小鼠海马低密度脂蛋白受体相关蛋白-1及其mRNA表达的影响

目的:研究电针是否是通过影响LRP1mRNA水平、提高LRP1的表达,从而促进脑内Aβ清除。方法:将4月龄APP/PS1转基因鼠,随机分为模型组、电针治疗组,以同窝同背景转基因阴性小鼠为正常对照组。电针干预"涌泉"、"百会"0.1 m A,15 min/次,隔日1次,治疗6周。治疗后,以免疫组化法观察脑组织LRP1阳性表达,以Western blotting法检测海马LRP1表达,以Real-time PCR法检测海马LRP1mRNA表达。结果:LRP1表达于脑微血管内皮细胞、胶质细胞、神经元等处。模型组海马LRP1蛋白、LRP1mRNA相对表达量低于正常对照组(P<0.05),电针治疗组海马LRP1及LRP1mRNA比模型组有上升趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:电针干预可能影响5月龄APP/PS1转基因小鼠海马内所有细胞LRP1及LRP1mRNA表达,可能是电针干预AD发病的潜在靶点,但实验方案还需进一步完善。

机械牵张力和去甲肾上腺素协同激活小鼠血管平滑肌细胞α_1-肾上腺素能受体-ERK1/2信号促进细胞增殖

目的为证实α1-肾上腺素能受体(α1-AR)是否介导了机械牵张力和/或去甲肾上腺素(NE)对小鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的协同激活并加速血管重构。方法静息培养的小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)经有或无Prazosin(α1-AR抑制剂)预处理后,给予机械牵张力和/或NE刺激,Western Blotting检测ERK1/2的磷酸化水平,免疫荧光检测ki-67的表达(细胞增殖),RT-PCR检测细胞α1-AR亚型(α1A-,α1B-和α1D-AR)mRNA的表达。分别用三种亚型的α1-AR-siRNA预处理细胞,观察α1-AR各亚型基因沉默对机械牵张力诱导的VSMC ERK1/2磷酸化的影响。结果机械牵张力可分别上调α1B-和α1D-AR mRNA表达,但α1A-AR mRNA未检测到。机械牵张力和/或NE均可激活ERK1/2,引起ERK1/2磷酸化增加,而两种因素共同存在时ERK1/2激活更加明显;ki-67的表达呈现类似效应;这种由机械牵张力和/或NE激活的作用均可被Prazosin部分抑制。α1B-和α1D-AR-siRNA预处理可分别减少α1B-和α1D-AR mRNA的表达,进而相应地导致机械牵张力诱导的ERK1/2磷酸化的抑制。RT-PCR未能检测到经α1A-AR-siRNA预处理后的VSMC表达α1A-AR mRNA,但仍可见机械牵张力诱导的ERK1/2磷酸化被抑制。结论高血压机械牵张力和NE可协同促进VSMC ERK1/2激活及细胞增殖,导致血管重构加速;α1-AR部分介导了这一过程,α1-AR各亚型起着相似作用。本研究可望为深入探讨高血压异常机械力合并交感神经活性亢进协同促进血管重构的致病机制及防治新策略提供实验依据。

螺内酯对醛固酮诱导的人脐静脉内皮细胞LOX-1 mRNA表达的影响

目的通过体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)并加醛固酮(ALD)诱导,观察氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)mRNA表达的影响。方法体外培养的HUVECs按细胞不同处理方式分为6组:阴性对照组(1640培养基,A组)、不同浓度ALD组(10、100、1 000 nmol/L,分别为B、C、D组)、ALD+LOX-1受体阻滞剂多聚肌苷酸(Poly I)组(E组)、ALD+螺内酯组(F组)加入HUVECs中共孵育24 h,RT-PCR的方法测定HUVECs中LOX-1mRNA的表达。结果用不同浓度的ALD(10、100、1 000 nmol/L)与HUVECs培养24 h后,同A组相比LOX-1mRNA表达呈浓度依赖性增加(P<0.05);而在用螺内酯(1μmol/L)与1 000 nmol/L的ALD共培养24 h或Poly I(250 mg/L)与HUVECs预先作用2 h后再加入1 000 nmol/L的ALD共培养24 h,同D组相比E,F组LOX-1mRNA的表达明显减少(P<0.05)。结论ALD可以促进培养的HUVECs LOX-1基因的表达,而其拮抗剂螺内酯可以抑制LOX-1mRNA的表达,因此ALD的致动脉粥样硬化(AS)作用可能与LOX-1有关,而螺内酯则可能通过此途径发挥抗AS作用。

白细胞介素1β对人肾小球系膜细胞LOX-1和ABCA1表达的影响

目的研究白细胞介素1β（IL－1β）对人肾小球系膜细胞株（HMCL）植物血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX－1）以及腺苷三磷酸结合盒转运体A1（ABCA1）表达的影响，及其与细胞胆同醇稳态的关系。方法实时定量PCR和Western印迹法检测IL－1β对人肾小球系膜细胞LOX－1、ABCA1表达的影响。结果人肾小球系膜细胞表达LOX－1mRNA和蛋白。IL－1β促进人肾小球系膜细胞LOX－1mRNA和蛋向表达，5μg／LIL－1β刺激细胞0～24h，LOX—1 mRNA表达于6h达高峰，为对照的6．87倍；LOX－1蛋－24h达高峰，为对照的1．88倍。IL－1β降低脂质负荷的人肾小球系膜细胞ABCA1 mRNA和蛋闩表达。5μg／LIL－1β刺激细胞0～48h，48h时ABCA1 mRNA和蛋向下降最明显，分别为对照的19．0％和50．62％。结论IL－1β促进人肾小球系膜细胞LOX－1表达，抑制ABCAI的表达，导致细胞内胆同醇的失衡，促使其变成泡沫细胞，可能加重肾小球硬化和肾病的进展。