nalC、mexZ调控基因及oprD基因突变导致头孢菌素敏感型铜绿假单胞菌对碳青霉烯类中低度耐药

目的探讨本地区出现的头孢菌素敏感型铜绿假单胞菌对碳青霉烯类药物中低度耐药的原因。方法收集对头孢他啶和头孢吡肟敏感、对碳青霉烯类药物中低度耐药的铜绿假单胞菌临床分离株,十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)观察铜绿假单胞菌相对分子量(Mr)为46 000的外膜蛋白Opr D的改变。实时荧光定量RT-PCR分析细菌外排系统基因mex A、mex C、mex E和mex X表达情况。PCR扩增opr D基因和外排系统表达调控基因(mex Z、mexR、nal C、nal D和nfx B)并进行测序分析。结果 30株分离菌有26株细菌外膜蛋白在Mr 46 000处有缺失或者减少;根据外膜蛋白表型选择30株细菌中的10株进行基因测序,发现碱基缺失和插入导致移码突变以及碱基的置换导致蛋白质合成的改变。外排系统基因以mex A和mex X过度表达为主,同时伴有少量mex C基因的过度表达。mex A的调控基因主要发生nal C Tyr23→His(TAC→CAC)和mexR Val 26→Glu(GTG→GAG),mex X的调控基因mex Z发生Pro136→Ala(CCA→GCA)的突变。结论该表型铜绿假单胞菌存在由opr D基因置换、缺失以及插入导致的外膜蛋白减少或缺失,nal C、mex Z调控基因突变引起外排系统mex AB-Opr M和mex XYOpr M表达增加,可能是共同引起头孢菌素敏感型铜绿假单胞菌对碳青酶烯类药物中低度耐药的重要原因。

高浓度异烟肼 利福平治疗低度耐多药肺结核的临床研究

目的：探讨涂阳、培阳复治肺结核对异烟肼（H）、利福平（R）低浓度耐药,耐药界（H：1μg/ml,R：50μg/ml）的患者,观察采用含静脉及局部灌注高浓度H、R联合方案的疗效。方法：将61例低度耐多药肺结核（L MDR-PTB）患者随机分成两组：实验组（A组）和对照组（B组）,均采用：2SHRZE/9HRE。A组：强化2个月,静脉输高浓度H：0.5-0.7、R：0.5-0.75,局部灌注（纤支镜病灶或空洞内介入）H：0.3-0.4、R：0.3-0.45,以期提高局部药物浓度,达到杀菌目的,巩固期继续口服高浓度H、R;B组：采用常规治疗剂量。观察痰菌阴转,病灶、空洞改变及肝功情况,统计学处理,提出治疗低度耐H、R耐多药肺结核MDR-PTB的治疗方案。结果：A组的痰涂片和培养阴转速度（逐月阴转率）治疗前和疗程结束均明显高于B组（P〈0.05）,A组大部分患者病灶趋于显著吸收和吸收,而B组患者大部分病灶改变不明显（P〈0.01）;A组空洞关闭速度及直径缩小率均较B组高（P〈0.01）。A组与B组肝损害发生率无明显变化（P〉0.05）。结论：采用含静脉及局部灌注高浓度H、R的联合方案,提高了局部药物浓度,达到杀菌目的,疗效显著优于常规剂量化疗,且未见严重的肝损害和其他副反应,收到良好效果,值得临床推广应用。

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的价值

目的分析南京市结核分枝杆菌(MTB)感染患者的耐药情况,评价荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性的临床价值,探究RFP和INH耐药相关基因突变的特征。方法对鉴定为MTB的780株菌株同时进行绝对浓度法药物敏感性试验和荧光PCR熔解曲线法检测对RFP和INH的耐药性。以绝对浓度法药物敏感性试验结果为标准,分析熔解曲线法检测RFP和INH的灵敏度、特异度、符合率和一致性(Kappa检验)。结果780株MTB中,22株(2.82%)为RFP单耐药,62株(7.95%)为INH单耐药,143株(18.33%)为耐多药。以绝对浓度法药敏试验结果为标准,荧光PCR熔解曲线法检测MTB对RFP和INH耐药性的灵敏度分别为98.18%和85.85%,特异度分别为95.28%和97.39%,符合率分别为95.90%和94.36%,Kappa值分别为0.88和0.85。RFP分子耐药菌株中全部检测出rpoB基因位点突变,其中以rpoB 529~533位点为最常见的突变(63.87%,122/191),突变位点为rpoB 507~512的20株菌株中只有7株表型耐药,rpoB基因双位点突变的18株菌株全部表型耐药;INH分子耐药菌株中最常见的突变为katG 315位点(66.49%,127/191),其次是inhA启动子区(17.80%,34/191),90%以上的INH分子耐药菌株为表型耐药。结论南京市结核耐药情况严重,以耐多药结核病为主。荧光PCR熔解曲线法与药敏试验结果高度一致,且弥补了药敏试验对于低度耐药突变株菌检测的局限性。耐药相关基因突变位点的检测有利于结核病的及时诊断和个体化治疗的实施。

荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药情况的研究

分析结核分枝杆菌(MTB)感染患者的耐药情况,评价荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平(RFP)和异烟胖(INH)耐药性的临床价值,探究RFP和INH耐药相关基因突变的特征。方法 对鉴定为 MTB的780株菌株同时进行绝对浓度法药物敏感性试验和荧光PCR熔解曲线法检测对RFP和INH的耐药性。结果 780株MTB中,22株(2.82%)为RFP单耐药,62株(7.95%)为INH单耐药,143株(18.33%)为耐多药。以绝对浓度法药敏试验结果为标准,荧光PCR熔解曲线法检测MTB对RFP和INH耐药性的灵敏度和特异度符合率分别为(95.90%)和(94.36%),Kappa值分别为(0.88和0.85)。RFP分子耐药菌株中全部检测出rpoB基因位点突变,其中以rpoB 529~533位点为最常见的突变(63.87%,122/191),突变位点为rpoB 507~512的20株菌株中只有 7株表型耐药,rpoB基因双位点突变的18株菌株全部表型耐药;INH分子耐药菌株中最常见的突变为katG315位点(66.49%,127/191),其次是inhA启动子区(17.80%,34/191),90%以上的INH分子耐药菌株为表型耐药。结论 结核耐药情况严重,以耐多药结核病为主。荧光PCR熔解曲线法与药敏试验结果高度一致,且弥补了药敏试验对于低度耐药突变株菌检测的局限性。耐药相关基因突变位点的检测有利于结核病的及时诊断和个体化治疗的实施。