慢性低氧低糖培养影响新生大鼠海马神经元α-分泌酶的实验研究

目的探讨慢性低氧低糖培养对新生大鼠海马神经元α-分泌酶活性及表达的影响。方法取新生24h的Wistar大鼠海马原代培养神经元并予以鉴定,培养第七天予以12h、24h、36h低氧低糖培养干预,MTT法检测海马神经元的活力,荧光法检测α、β-分泌酶活性,Western blot检测α-分泌酶蛋白表达水平。结果低氧低糖培养12小时组海马神经元α-分泌酶活性升高(P<0.01),低氧低糖培养24h、36h组α-分泌酶(TACE)活性无明显变化(P>0.05),低氧低糖培养12h、24h、36h组海马神经元β-分泌酶(BACE1)活性升高(P<0.05);低氧低糖培养12h、24h、36h组海马神经元α-分泌酶蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论慢性低氧低糖培养降低新生大鼠海马神经元α-分泌酶的表达。

丹参素对低氧低糖损伤神经细胞的影响

目的评价丹参素对低氧低糖诱导人拟神经元细胞SH-SY5Y损伤的影响。方法采用细胞培养于人工无糖培养基、1.5%O2和5%CO2环境建立低氧低糖损伤SH-SY5Y细胞模型。以SRB方法测定存活细胞数,相差和荧光显微镜观察细胞凋亡,采用细胞培养上清乳酸脱氢酶(LDH)活性反映细胞受损伤程度,并测定了细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性以反映细胞氧化胁迫状态。结果低氧低糖损伤24 h,存活细胞数量明显减少,SH-SY5Y细胞皱缩、吖啶橙和溴化乙啶双染可见明显核皱缩、碎裂及凋亡小体出现,细胞培养上清LDH水平明显升高,细胞内MDA含量明显升高,SOD水平降低,表明细胞受到严重的氧化胁迫损伤。丹参素可抑制细胞内SOD活性的降低,对上述各损伤指标均有明显的干预作用,且具有浓度依赖性。结论丹参素对低氧低糖所致SH-SY5Y神经瘤细胞损伤有明显保护作用,有望成为有临床应用价值的神经保护剂。

低氧低糖及血清剥夺联合处理抑制Nrf2信号通路诱发大鼠骨髓间充质干细胞氧化应激和凋亡

目的探讨低氧低糖血清剥夺(GSDH)处理对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)氧化应激及凋亡的影响。方法在体外对提取纯化后的原代BMSCs利用低氧(1%O_(2))、低糖(1.0 g/L)及血清剥夺联合处理建立BMSCs细胞损伤模型。采用集落形成实验、细胞周期测定以及CCK-8实验检测细胞增殖能力;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;通过细胞凋亡试剂(AnnexinV-FITC/PI)、线粒体膜电位检测试剂(JC-1)染色和线粒体荧光探针(Mito-Trancker)检测细胞凋亡;细胞活性氧簇(ROS)和钙离子(Fluo-4AM)检测细胞氧化应激水平;Western blotting检测抗氧化应激相关分子谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)等以及核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)信号通路中关键分子的蛋白表达水平。结果大鼠原代BMSCs表面标志物高表达CD29、CD71,低表达CD45、CD34;GSDH处理抑制BMSCs细胞增殖(P<0.05)和迁移(P<0.05),增加ROS和钙离子水平(P<0.05),且抑制抗氧化应激相关分子GPX4等蛋白表达(P<0.01);与空白对照组相比,GSDH处理后BMSCs凋亡显著升高(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.01),网络化减少(P<0.01)。Nrf2信号通路中Nrf2蛋白及下游关键分子的蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论GSDH处理诱发的BMSCs氧化应激及进一步导致的凋亡损伤与Nrf2信号通路被抑制有关。

丁苯酞可提高低氧低糖后前脑神经元线粒体轴浆运输及末梢乙酰胆碱释放的实验研究

目的观察丁苯酞(N-butylphthalide,NBP)对低氧低糖刺激的前脑神经元线粒体轴浆运输的作用以及对轴突末梢乙酰胆碱释放的影响。方法体外培养前脑神经元,分为对照组、低氧低糖组和低氧低糖+NBP组,利用活细胞工作站测定不同组神经元轴突内线粒体轴浆运输,高效液相色谱检测乙酰胆碱水平;Western blot检测线粒体转运相关调控蛋白Milton及Miro表达。结果与对照组相比,低氧低糖组神经元轴浆正、反向线粒体运输比例下降(P<0.05),乙酰胆碱递质释放和线粒体转运相关调控蛋白Milton及Miro表达水平亦下降(P<0.05),低氧低糖+NBP组有效改善了低氧低糖组上述指标的下降(P<0.05)。结论丁苯酞可改善低氧低糖状况下神经元的线粒体轴浆运输及轴突末梢乙酰胆碱能释放,这一作用可能是通过增加线粒体转运相关调控蛋白Milton及Miro表达实现的。

抗氧化干预对低氧低糖诱导血管平滑肌细胞自噬和铁死亡的影响

目的观察抗氧化干预对低氧低糖处理后血管平滑肌细胞(VSMC)自噬和铁死亡发生的影响及其与血管功能的关系。方法采用低氧低糖培养的VSMC和创伤失血休克大鼠模型,观察抗氧化剂依达拉奉(EDA)对低氧低糖处理后VSMC中自噬标志物、铁死亡标志物及细胞反应性的影响,并观察EDA对休克大鼠血管反应性的影响。结果低氧低糖处理后VSMC中自噬标志物LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高、p62蛋白表达水平降低,提示自噬水平升高。低氧低糖也导致了VSMC铁死亡的发生,铁死亡标志物谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)和溶质载体家族7成员11(SLC7A11)的表达水平降低。抗氧化剂EDA处理可抑制细胞自噬水平的升高,使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低、p62蛋白表达水平升高;但EDA对GPx4和SLC7A11表达的影响无统计学意义。同时,低氧低糖处理后细胞收缩反应性明显降低,EDA处理可恢复低氧低糖细胞的收缩反应性。在创伤失血休克大鼠中,血管收缩反应性明显降低,抗氧化剂EDA处理可提高休克大鼠的血管收缩反应性。结论抗氧化干预可抑制低氧低糖诱导的VSMC自噬,改善低氧细胞和休克血管的收缩功能。

慢性低氧低糖培养对大鼠海马神经元α-和β-分泌酶活性的影响

目的探讨慢性低氧低糖培养对大鼠海马神经元α-和β-分泌酶活性的影响。方法取新生24h的wistar大鼠海马神经元培养,用慢性低氧低糖进行干预,MTT法检测神经元细胞活力,直接荧光法检测α、β-分泌酶活性。结果低氧低糖组较对照组细胞活力降低,具有显著性差异(P<0.05),低氧低糖培养海马神经元12h的α-分泌酶活性升高(P<0.0001),低氧低糖培养海马神经元12、24、36h的β-分泌酶活性升高(P=0.0032、0.0018、<0.0001)。结论慢性低氧低糖培养对海马神经元具有毒性,可能与其升高β-分泌酶活性使具有神经营养作用的sAPPα降低和具有神经毒性作用的Aβ升高有关。

IL-32β提高宫颈癌C33A细胞对低氧低糖环境耐受的实验研究

目的 探讨IL-32β提高宫颈癌C33A细胞对低氧低糖环境耐受的作用机制.方法 分别在正常条件和低氧低糖条件培养宫颈癌C33A细胞20 h后,使用实时定量PCR（RT-PCR）和Westernblotting检测IL-32β的mRNA和蛋白水平.台酚蓝染色检测低氧低糖条件下培养的C33A细胞（对照组）以及添加10、100、500 ng,/ml IL-32β C33A细胞的生存率.用腹腔注射法构建裸鼠移植瘤,在分别注射0、1.0 mg/kg IL-32β处理后测定移植瘤体积.使用siRNA构建IL-32β沉默的细胞模型,检测VEGF的表达水平.结果 低氧低糖条件下C33A细胞中的IL-32β mRNA和蛋白水平分别是正常条件下的（6.12 ±0.03）倍和（2.23±0.04）倍（F =43.16,P＜0.05;F=22.32,P＜0.05）.低氧低糖条件下C33A细胞生存率为（51.92±3.41）％,而10、100、500 ng/ml IL-32β组生存率分别为（55.23±3.92）％、（62.52±4.14）％、（69.14±2.45）％,与对照组比较差异均有统计学意义（F=14.25,P＜0.05;F=35.53,P＜0.01;F =56.28,P＜0.01）.移植瘤培养28 d时,0 mg/kg IL-32β组小鼠移植瘤体积为（578±64） mm3,而1.0 mg/kg组达（1 402±142） mm3（F=27.84,P＜0.01）.此外,相对于正常C33A细胞,IL-32β基因敲除的C33A细胞中VEGF的表达显著降低（F =36.85,P＜0.05）.结论 IL-32β可提高C33A细胞对低氧低糖环境的耐受,其机制与增加VEGF表达水平相关.

丁基苯酞对低糖低氧引起神经细胞内钙升高的作用

目的:探讨抗脑缺血新药丁基苯酞(NBP) 对脑缺血过程中细胞内游离钙升高的影响及其作用机制。方法:采用低糖低氧损伤胎鼠或新生鼠神经细胞以模拟脑缺血,用Fura2/AM 作荧光指示剂,观察手性丁基苯酞对神经细胞内游离钙升高的抑制作用,并用内钙释放剂thapsigargin,外源性谷氨酸,高K+ 及钙离子载体A23187 作工具药,对其作用环节进行分析。结果:d,l, dl丁基苯酞能完全抑制低糖低氧造成的神经细胞内钙升高。手性NBP能降低thapsigargin 引起的内质网钙库释放,dNBP 还对谷氨酸引起的内钙升高表现出抑制作用。

人参皂苷Rb3保护低糖低氧/复氧诱导乳鼠皮层神经元凋亡的离子通道机制

目的研究人参皂苷Rb3对低糖低氧/复氧大鼠神经元凋亡的保护作用,并探讨其发挥神经保护作用与线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATPC)开放的关系。方法建立原代培养的大鼠皮层神经元的低糖低氧/复氧(OGD/R)模型,分为5组:正常对照组,低糖低氧/复氧组(OGD/R)、60 mol/L人参皂苷Rb3组、100 mol/L 5-羟基葵酸盐(5-HD)组、60 mol/L人参皂苷Rb3+100 mol/L 5-HD组。利用Hoechst染色法检测细胞凋亡;Western印迹法检测多聚ADP核糖聚合酶(PARP)蛋白的表达并测定caspase-3的活性。结果经OGD/R损伤后细胞出现凋亡典型的形态学特征;凋亡蛋白caspase-3活性增强,PARP蛋白表达下降。与OGD/R组比较,60 mol/L人参皂苷Rb3降低OGD/R损伤后神经元的凋亡(P<0.01)。抑制caspase-3活性(P<0.01),保持PARP蛋白条带的完整性。5-羟基葵酸盐则削弱人参皂苷Rb3抑制神经元凋亡的作用,使caspase-3活性增强、PARP蛋白表达降低(P<0.05)。结论人参皂苷Rb3对OGD/R损伤神经元的凋亡具有抑制作用,mitoKATPC开放可能介导了人参皂苷Rb3的抗凋亡作用。

补阳还五汤对体外低糖低氧损伤海马神经干细胞增殖的影响

目的探讨体外低糖低氧损伤海马神经干细胞(neuralstemcells ,NSCS)后干细胞的反应及补阳还五汤对其的影响。方法从新生wistar大鼠海马分离、培养NSCS,低糖低氧体外模拟脑缺血损伤,随机分组,给予不同处理,运用MTT法、克隆计数观察损伤后NSCS 的增殖情况。结果低糖低氧损伤后部分NSCS死亡,NSCS克隆数为( 65 1 .6±3 5 .3 )个,含药血清加入后克隆增大,克隆数增多,其中治疗1组为( 693 .4±3 3 .3 )个,治疗2组为( 72 4.7±3 1 .4)个,与模型组比较差异有显著性(P <0 .0 5～0 .0 1 )。MTT检测OD值有相似结果,但只有治疗2组与模型组差异有显著性(P <0 .0 5 )。结论补阳还五汤可促进低糖低氧损伤NSCS

血管紧张素Ⅱ可能通过线粒体途径抑制低糖低氧诱导的神经元凋亡

目的：血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）是体内重要的生物活性物质，它可以调节机体血压、体液平衡和神经内分泌功能。近年研究表明，AngⅡ在细胞分化及凋亡方面也发挥着极其重要的作用。AngⅡ的生物学效应可以分别被AT1和AT2受体的拮抗刺缬沙坦和PD123319抑制。本试验旨在通过体外培养新生大鼠皮层神经元，用化学损伤的方法建立低糖低氧“缺血再灌注”损伤模型，在细胞及分子水平上观察AngⅡ对神经元的作用并探讨作用机制。方法：无菌条件下进行大鼠皮层神经元原代培养，加入阿糖胞苷抑制非神经元的生长进行纯化。取培养10天的细胞，随机分组为：①正常对照组；②低糖低氧损伤组；③血管紧张素Ⅱ低、中、高浓度组；④缬沙坦组；⑤PD123319组。正常对照组常规换液培养；损伤组弃去原培养液，D—hank＇s液洗2次后，加入含1mmol／1的连二亚硫酸钠的无糖Earle＇s液，置培养箱中37℃、5％CO2、饱和湿度下培养1h后换以完全培养基，制造低糖低氧的损伤模型；药物处理组在损伤过程中和损伤后先后分别加入含不同浓度药物的无糖Earle＇s液及完全培养基。再灌注损伤24h后倒置相差显微镜进行一般形态学观察，MTT法检测各组细胞的存活率，流式细胞术检测细胞凋亡率，RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax基因表达情况。结果：低糖低氧再灌注损伤组皮层神经元损伤严重，细胞存活率显著下降，血管紧张素Ⅱ各浓度组可以明显改善损伤所致神经元形态的变化，且显著提高神经元的存活率，并呈浓度依赖性。缬沙坦组也可明显改善细胞状况，提高细胞存活率，而PD123319组改善不明显。流式细胞术检测结果显示，损伤组细胞凋亡率明显升高，

褪黑素对神经元和胶质细胞低糖低氧损伤不同时期的影响

目的 通过观察褪黑素对神经元和胶质细胞低糖低氧损伤不同时期的影响 ,进一步探讨分析褪黑素对神经细胞低糖低氧损伤保护作用的机制。方法 体外培养神经细胞和胶质细胞 ,建立低糖低氧急性损伤模型和低糖低氧再灌注后慢性损伤模型 ,通过MTT比色 ,测定培养液中LDH活性和NO、MDA的含量 ,观察褪黑素对神经细胞和胶质细胞的保护作用。结果 10 -6、10 -7、10 -8mol·L-1的褪黑素均能降低低糖低氧损伤所致的神经细胞培养液中MDA含量的升高 ,但 10 -6、10 -7mol·L-1的褪黑素却升高其NO水平。10 -6、10 -7、10 -8mol·L-1的褪黑素能够使在低糖低氧损伤急性期混合培养的神经细胞和胶质细胞LDH释放增多 ,MTT比色分析的A570 值下降增多 ;而在低糖低氧再灌注后慢性损伤期 ,褪黑素可抑制LDH的释放 ,提高MTT比色分析的A570 值。结论 ①褪黑素降低神经细胞培养液中的MDA含量 ,升高NO的含量 ,这可能是褪黑素保护神经元所受低糖低氧损伤众多机制之一。②在低糖低氧急性损伤期 ,褪黑素不利于神经元和胶质细胞的存活 ,而在低糖低氧再灌注后慢性损伤期 ,褪黑素可对神经元和胶质细胞产生明显保护作用。

纤维蛋白原通过激活EGFR信号通路抑制体外低糖低氧损伤神经元轴突再生

目的探讨纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)对体外低糖低氧(low glucose and oxygen,LGO)损伤神经元轴突再生的影响及机制。方法取出生后24 h内乳鼠皮层神经元进行原代培养,通过免疫荧光染色检测MAP-2鉴定神经元。将细胞分为3组,即LGO组、LGO+Fg组、LGO+Fg+PD168393组。3组均予以低糖低氧处理48 h后,LGO+Fg组加入Fg,LGO+Fg+PD168393组加入Fg、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)抑制剂(PD168393),均处理细胞24 h。采用免疫荧光染色检测β-tubulin III(Tuj-1)表达,评价轴突生长;Western blot检测EGFR、p-EGFR在细胞中的表达;实时荧光定量PCR检测EGFR下游调控蛋白(MAP-1B,CRMP-2)mRNA表达。结果与LGO组比较,LGO+Fg组轴突生长明显受到抑制,轴突长度较短、数量减少,p-EGFR蛋白表达显著增加,MAP-1B、CRMP-2 mRNA表达下调;与LGO+Fg组比较,LGO+Fg+PD168393组轴突长度增加、数量明显增多,p-EGFR蛋白表达显著减少,MAP-1B、CRMP-2 mRNA表达上调。结论Fg可抑制低糖低氧损伤神经元的轴突再生能力,其机制与激活EGFR信号通路有关。

左旋丁基苯酞对低糖氧造成神经元损伤的保护作用

目的探讨新药左旋丁基苯酞（1-NBP）对低糖低氧造成的神经细胞坏死和凋亡的保护作用，并从线粒体和细胞内钙角度对其可能的作用机制进行研究。方法：以低糖低氧造成原代培养神经细胞的损伤模型，采用Hoeehest 33824（Hoe）、Ppropidium iodide（PI）、Fluo-3／AM和Rhodamine-123（Rhod）对细胞进行荧光染色，分别测定不同损伤条件下神经细胞的坏死、凋亡、细胞内游离钙和线粒体膜电位的变化，并对1-NBP的保护作用进行观测。结果原代培养神经元的的坏死和凋亡的发生率在低糖氧处理3h后即出现明显升高，

低分子肝素超氧化物歧化酶结合物抗氧化损伤及对神经细胞的保护作用

目的研究低分子肝素超氧化物歧化酶结合物(LWMHSOD)对低糖低氧损伤的神经细胞的保护作用。方法采用体外培养的大鼠大脑皮层神经元,造成低糖低氧损伤模型,观察LMWHSOD抗氧化损伤及对神经细胞的保护作用。结果LMWHSOD能够减少低糖低氧造成的细胞死亡,降低损伤后细胞外液LDH、MDA、NO的含量,改善细胞膜的流动性。结论LMWHSOD对神经细胞具有保护作用。

两种H9C2心肌细胞氧化损伤模型的比较

目的:探讨低氧、低糖及血清剥夺(glucose and serum deprivation under hypoxia(1%O_(2)),GSDH)处理与H_(2)O_(2)处理在构建H9C2心肌细胞氧化损伤模型中的应用价值。方法:培养H9C2心肌细胞,当细胞生长状态良好时,用低氧(1%O_(2))、低糖(1.0 g/L)及血清剥夺联合处理或200μmol/L的H_(2)O_(2)作用于心肌细胞24 h。采用CCK8实验检测细胞增殖能力;通过细胞凋亡试剂(annexinV-FITC/PI)、Hoechst染色检测细胞凋亡;细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测细胞氧化应激水平;BODIPY检测细胞脂质过氧化水平;过碘酸雪夫(periodic acid-schiff stain,PAS)染色检测细胞糖原合成能力;线粒体膜电位检测试剂(mitochondrial membrane potential assay kit with JC-1,JC-1)染色检测线粒体膜电位水平;Western blot检测能量代谢相关分子AMP依赖的蛋白激酶(Adenosine 5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK)及氧化应激相关分子NAD(P)H醌脱氢酶1(NAD(P)H quinone dehydrogenase 1,NQO-1)、血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,GSDH处理组与H_(2)O_(2)处理组的心肌细胞存活率均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白组相比,GSDH处理与H_(2)O_(2)处理都增加了心肌细胞的凋亡水平、ROS和脂滴堆积水平增高、糖原消耗量增加且线粒体膜电位降低。但相比于H_(2)O_(2)处理组,GSDH处理组的细胞糖原消耗增多更明显,脂滴堆积也更明显,并且AMPK磷酸化水平显著降低。结论:低氧、低糖及GSDH处理与H_(2)O_(2)处理均能造成H9C2心肌细胞氧化损伤,但相比于H_(2)O_(2)处理组,GSDH处理组的效果更符合体内心肌损伤时的能量代谢转变,有望作为一种更简单便捷的心肌氧化损伤模型应用于科研。

益肾活血方含药血清对低糖低氧损伤大鼠海马神经干细胞增殖的影响

目的:探讨益肾活血方含药血清对低糖低氧脑损伤大鼠海马神经干细胞增殖的影响。方法:从新生Wistar大鼠海马分离、培养神经干细胞(NSCs),将培养出的NSCs在95%N2,5%CO2,37℃培养6 h,低糖低氧体外模拟脑缺血损伤过程。随机分为3组,给药组给予益肾活血方15%含药血清;模型组给予正常大鼠未给药血清,体积分数为15%。正常组采用常规NSCs培养方法。各组细胞在37℃,5%CO2培养1 d后,运用MTT法、克隆计数观察损伤后NSCs的增殖情况。结果:低糖低氧脑损伤(低糖低氧损伤)后部分NSCs死亡,NSCs克隆数为(689.2±27.8)个,益肾活血方含药血清加入后克隆增大,克隆数增多,其中给药组为(738.6±26.6)个,2组比较差异有显著性(P<0.05)。MTT检测吸光度(A)模型组为0.617±0.21,给药组为0.895±0.37,2组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:益肾活血方含药血清可促进低糖低氧脑损伤NSCs的增殖。

丁基苯酞对大鼠皮层神经元损伤后谷氨酸和5-羟色胺释放的影响

目的 :观察丁基苯酞 ( 3 n butylphthalide ,NBP)对低糖低氧刺激后培养的胎鼠皮层神经细胞谷氨酸和 5 HT释放的影响。方法 :胎鼠皮层神经元以低糖低氧培养基培养造成低糖低氧模型 ;谷氨酸和 5 HT以荧光分光光度法进行测定。结果 :低糖低氧 1 0h可使神经细胞谷氨酸的释放量增加 ,dl NBP( 1和 1 0 μmol·L-1)和l NBP( 1 0 μmol·L-1)可降低细胞培养基中谷氨酸的浓度 ,而同剂量的d NBP对谷氨酸的释放无明显影响。dl NBP和l NBP亦可抑制由花生四烯酸 ( 1 0 0 μmol·L-1)引起的神经细胞谷氨酸的释放。本实验结果还显示 ,dl NBP( 1和 1 0 μmol·L-1)及l NBP( 1 0 μmol·L-1)可降低低糖低氧后神经细胞培养基中 5 HT的浓度。结论 :dl NBP和l NBP可抑制谷氨酸和 5 HT的释放 ,这可能是其抗脑缺血作用的机理之一。

左旋肉碱对大鼠缺血性脑损伤的神经保护作用

目的观察左旋肉碱(L-carnitine,LC)对大鼠早期缺血性脑损伤和低氧低糖诱导神经细胞损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型。TTC染色法观察脑梗死面积的改变。采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)合并低糖培养基培养PC12细胞,建立体外细胞低氧低糖模型;MTT法检测细胞活力的改变;SYTOX、PI、TUNEL染色观察细胞的坏死与凋亡;检测各组细胞SOD、ATP酶活性和MDA含量。结果LC预处理组大鼠脑梗死灶面积较模型组无明显减小(P>0.05)。LC预处理可使低氧低糖诱导的细胞活力增加,坏死与凋亡减少,细胞内SOD、ATP酶活性增高,MDA含量降低(P<0.05)。结论短期急性注射LC对大鼠缺血性脑损伤保护作用不明显,对体外低氧低糖诱导的PC12细胞损伤具有明显保护作用,其机制可能与增强细胞抗氧化能力、抑制脂质过氧化反应、减少细胞凋亡与坏死有关。

清脑益元汤对大鼠胚胎神经干细胞增殖分化和相关因子表达的影响

目的:研究清脑益元汤对大鼠胚胎神经干细胞(NSCs)增殖分化和血管内皮生长因子(VEGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响。方法:SD大鼠30只,雄性20只,雌性10只,取10只雄性大鼠随机分为两组:正常血清组和清脑益元汤血清组,每组5只,分别灌胃蒸馏水和清脑益元汤,第28天采血,分别制备正常血清与清脑益元汤血清;将剩余雄性大鼠与雌性大鼠交配,至孕12d取胎鼠,分离制备大鼠胚胎NSCs;对NSCs进行培养克隆传代,增殖成功后,将NSCs分为空白组、缺氧模型组、正常血清组、清脑益元汤血清组,并予低糖低氧损伤干预。电镜下观察NSCs克隆增殖分化情况,免疫组化观察各组中VEGF、BDNF阳性细胞表达数目,Western blot检测各组bFGF蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,缺氧模型组BDNF阳性细胞数显著降低(P<0.05),bFGF蛋白表达水平显著下调(P<0.05);与缺氧模型组比较,正常血清组和清脑益元汤血清组VEGF、BDNF阳性细胞数显著升高,bFGF蛋白表达水平显著上调(P<0.05);与正常血清组比较,清脑益元汤血清组VEGF、BDNF阳性细胞数显著升高(P<0.05),bFGF蛋白表达水平显著上调(P<0.05)。结论:清脑益元汤对低糖低氧环境下的大鼠胚胎NSCs的增殖分化具有促进作用,其机制可能与清脑益元汤对促进NSCs生长的相关因子表达升高有关。