低氧反应元件调控下h-VEGF_(165)基因表达及其蛋白产物的延迟消失

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)转基因可促进心肌缺血区血管生成,改善心脏功能,然而长期高水平表达又会引起诸多副作用。为调控VEGF表达,在启动子区加入低氧反应元件(hypoxic response element．HRE)作为调控开关,研究氧环境对VEGF基因mRNA及蛋白产物表达的影响。重组腺相关病毒(recombinant adeno-associ- ated virus,rAAV)作为载体(rAAV-HRE-h-VEGF_(165)),转染离体培养大鼠心肌细胞,在常氧/缺氧(氧浓度1%)/缺氧复氧条件下进行培养,用酶联免疫特异性测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测培养液h-VEGF_(165)蛋白浓度,细胞免疫荧光染色观测细胞内h-VEGF_(165)蛋白表达,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT- PCR)方法检测细胞h-VEGF_(165)mRNA表达。结果显示：未转染组、常氧培养组均无h-VEGF_(165)mRNA及其蛋白表达：缺氧培养组h-VEGF_(165)mRNA及蛋白均表达；缺氧复氧4h组的h-VEGF(165)mRNA消失,培养液中h-VEGF_(165)蛋白减少,细胞内h-VEGF_(165)蛋白存在：缺氧复氧8h及12h组的h-VEGF_(165)mRNA消失,培养液和细胞内h-VEGF_(165)蛋白均消失。研究表明,在HRE调控下,缺氧可促使h-VEGF_(165)基因表达,复氧后,h-VEGF_(165)mRNA表达停止,蛋白产物延迟消失。

低氧反应元件介导的Bcl-2-shRNA对缺氧诱导抗凋亡肺血管内皮细胞的调控作用

目的探讨低氧反应元件(HRE)介导的Bcl-2基因沉默对缺氧诱导抗凋亡肺微血管内皮细胞的影响。方法设计针对Bcl-2的siRNA序列,构建含Bcl-2-shRNA和HRE的表达载体并进行慢病毒包装,重组病毒感染肺微血管内皮细胞,分别在常氧(21%)或低氧(5%)条件下培养;96 h后通过荧光标记物确认感染效率,Western blotting检测转染后细胞内Bcl-2蛋白表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 Bcl-2基因沉默明显下调细胞内Bcl-2 mRNA和蛋白的表达;HRE启动子仅在低氧环境中活性显著增强;重组慢病毒感染肺微血管内皮细胞后96 h时的转染效率约为90%,细胞内Bcl-2蛋白表达下调,细胞凋亡增加;在低氧环境中,受HRE的调控,Lv-HRE-Bcl-2-shRNA组细胞凋亡率显著增高。结论低氧条件下,HRE作为氧敏感调控开关,可进一步增强Bcl-2-shRNA的作用,诱导肺血管内皮细胞凋亡,这将为肺动脉高压的血管重塑提供潜在的治疗靶标。

低氧反应元件调控的腺病毒-胸苷激酶对肝癌细胞HepG2的体外杀伤作用

目的:构建携带受低氧反应元件(HRE)调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因的重组腺病毒载体,探讨该重组腺病毒对体外培养的肝癌细胞HepG2的特异性杀伤活性。方法:采用Ad Easysystem构建携带受HRE调控TK基因表达的腺病毒Ad-HRE-TK,体外感染肝癌细胞系HepG2后分别在正常和低氧条件下培养。分别采用反转录-聚合酶链式扩增(RT-PCR)及蛋白质印迹(Western blotting)技术检5测TKmRNA及蛋白表达情况,并用不同浓度的丙氧鸟苷(GCV)处理后以MTT法检测细胞的增殖情况。结果:RT-PCR及Western blotting结果显示,仅转染重组腺病毒Ad-HRE-TK并在低氧条件下培养的HepG2细胞特异性表达TK基因及蛋白。HepG2细胞感染Ad-HRE-TK后,在低氧培养条件下对GCV的敏感性明显增加,在感染复数(MOI)为100并用50mg/LGCV处理时,则有95%以上HepG2细胞被杀死。而正常氧浓度下培养组,未能观察到GCV的杀伤作用。结论:低氧条件下,HRE可特异性地促进HSV-TK基因的表达,从而诱导GCV的毒性作用。

低氧反应元件调控缺血心肌转染hVEGF_(165)基因表达对新生血管的影响

目的探讨动物整体水平下低氧反应元件（HRE）调控缺血心肌转染hVEGF165基因表达对促生血管的影响。方法建立兔心肌缺血动物模型,实验分为转基因组、缺血对照组、载体对照组和假手术组。取缺血区心肌组织,检测心肌组织HIF-1α和hVEGF165表达,应用CD31及α-SMA免疫组化染色测定缺血心肌新生血管密度变化。结果心肌缺血早期,伴随内源性HIF-1α表达增加,hVEGF165mRNA及蛋白表达相继升高,缺血4～6周至高峰（P〈0.01）,缺血12周,hVEGF165表达下调至缺血前水平。缺血12周,转基因组CD31（＋）血管密度显著高于缺血对照组（P〈0.01）;但是,与缺血前相比,缺血12周,转基因组α-SMA（＋）血管密度显著低于缺血前水平（P〈0.01）。结论HIF-1α-HRE对缺血心肌转染hVEGF165表达发挥了有效的正相调控作用,有效地促进缺血心肌毛细血管生成。但hVEGF165作为促血管生成早期调节因子,其促生血管的结构尚不完整。

低氧反应元件对缺血心肌转导hVEGF_(165)基因表达的调控

目的探讨低氧反应元件(hypoxic response element,HRE)对缺血、复灌心肌转导人血管内皮生长因子165(human vascular endous growth factor 165,hVEGF165)基因表达的调控作用。方法在猪冠状动脉回旋支起始处以钛夹阻断回旋支血流,建立可复灌的心肌缺血模型。携带9拷贝HRE(9HRE)-hVEGF165的腺相关病毒转染模型心肌,转染后4天,复灌组二次开胸打开钛夹恢复缺血区血供。取各组心肌组织,RT-PCR法测定hVEGF165mRNA的表达情况;免疫组化及免疫印迹法测定hVEGF165蛋白的表达情况;Ⅷ因子免疫组化染色检测局部毛细血管情况。结果缺血心肌转导hVEGF165基因后,hVEGF165蛋白表达量明显增高,而复灌组表达明显减少(P<0.01)。结论9HRE作为调控缺血心肌组织内转导的hVEGF165基因的氧敏感开关灵敏、高效,使hVEGF165基因在缺血时高度表达,而复灌后表达水平下降。

低氧反应元件介导的低氧调控的神经营养因子-3表达上调减少低氧诱导的PC12细胞凋亡

目的在体外培养的PC12细胞中观察低氧反应元件(HRE)介导的神经营养因子-3(NT-3)对低氧反应性表达上调及其对低氧诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法用分子生物学方法将5拷贝HRE(5HRE)和NT-3克隆入反转录病毒载体中构建HRE介导的低氧调控表达载体,并转导入PC12细胞,ELISA法检测NT-3的表达和分泌,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和Caspase-3激活情况。结果成功构建重组反转录病毒载体,并将外源基因转导入PC12细胞中(PC12-NT3-EGFP、PC12-5HRE-NT3-EGFP和PC12-5HRE-EGFP)。在正常条件培养下,PC12-5HRE-NT3-EGFP细胞中NT-3表达水平较低,但在低氧处理后,NT-3表达明显升高(n=3,P<0.05)。在低氧处理后,与PC12细胞组相比,PC12-5HRE-NT3-EGFP组中细胞凋亡明显减少(n=3,P<0.05),且p38 MAPK和Caspase-3磷酸化也明显减少(n=3,P<0.05)。结论在PC12细胞中HRE介导的低氧反应性调控NT-3的表达上调可以对PC12细胞产生保护作用。

构建人工合成的微小低氧反应元件可调控的AAV载体

目的:人工合成微小HER,将其插入到AAV重组质粒的CMV启动子上游,采用磷酸钙沉淀法包装低氧反应元件调控的AAV重组病毒,为缺血性心脑血管病的基因治疗制备可以控制表达的AAV载体。方法:人工合成具有4次重复串联的低氧诱导因子结合位点(HIF-binding site,HBS)A/GCGTG(4×HBS)的36 bp核酸片段和插入到CMV启动子TATA Box上游的间隔区35 bp的核酸序列,并运用PCR方法扩增。测序正确后,通过常规分子生物学重组方法,将原AAV载体质粒中CMV启动子替换成为含有最小人工合成HRE的CMV启动子,重组构建了低氧反应元件调控的AAV载体。并在该载体CMV启动子下游的多克隆位点插入具有6×His标签的NT4-6His-PR39融合肽序列。磷酸钙沉淀法包装表达NT4-6His-PR39融合肽序列的重组AAV。重组病毒感染人宫颈癌细胞(HeLa),化学性低氧培养,使用免疫组织化学观察低氧条件的诱导表达作用。结果:基因测序结果和酶切结果表明,我们已经把人工合成的HRE,以正确的间隔插入到CMV启动子的上游,成功地构建了HRE调控的AAV重组载体。重组病毒感染的细胞在常氧和低氧诱导表达的结果表明,在启动子上游插入人工合成的微小HRE能够有效调控重组腺相关病毒的表达。结论:使用PCR方法可以将人工合成的HER插入缺乏内切酶识别点的CMV启动子上游,可以制备低氧调控的真核表达载体。人工合成的微小HRE能够有效的调控CMV启动子控制的下游基因表达。该载体的成功制备在缺血性心脑血管病的预防和治疗中具有重要的理论和使用价值。

构建由缺氧反应元件修饰的hTERT核心启动子引导FCY1基因表达的复制缺陷型腺病毒

目的 构建由缺氧反应元件串联重复体修饰的人端粒酶逆转录酶 (h TERT)核心启动子引导酵母胞嘧啶脱氨酶FCY1基因表达的复制缺陷型重组腺病毒 .方法 人工设计缺氧反应元件串联重复序列 ,克隆后插入 h TERT启动子上游并经测序证实 .将修饰后的 h TERT启动子和酵母胞嘧啶脱氨酶基因 FCY1插入穿梭质粒 ,与辅助质粒共转染 HEK2 93细胞 ,重组产生复制缺陷型腺病毒 .结果 获得了由 3倍和 6倍缺氧反应元件修饰的 h TERT核心启动子引导 FCY1基因表达的复制缺陷型重组腺病毒 .结论 基于 Cre重组酶 / lox P的腺病毒载体构建系统操作简便。

桑白皮多糖介导Nrf2/ARE通路减轻慢性低氧环境大鼠心肌损伤的作用

目的 探讨桑白皮多糖对慢性低氧环境所致的大鼠心肌损伤的影响,并观察其介导转录因子NF-E2相关因子(Nrf)2/抗氧化反应元件(ARE)通路的机制。方法 60只7~9周龄SD大鼠采用随机数字表分为对照组、模型组、阿托伐他汀组、桑白皮多糖低、中、高剂量组。除对照组外,其余各组均置于常压低氧舱内构建心肌损伤大鼠模型,对照组呼吸室内空气。自低氧第1天起,阿托伐他汀组给予20 mg/kg阿托伐他汀腹腔注射给药,桑白皮多糖低、中、高剂量组分别给予0.1、0.2、0.4μg/ml桑白皮多糖腹腔注射给药;对照组和模型组仅腹腔注射生理盐水。给药后24 h,苏木素-伊红(HE)染色观察各组心肌组织病变情况;原位末端标记法(TUNEL)检测各组心肌细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组血清血浆肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平;检测心肌组织Nrf2、血红素加氧酶(HO)-1、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA及蛋白、p-Nrf2表达。结果 模型组心肌严重损伤,阿托伐他汀组和桑白皮多糖各剂量组均减轻;与对照组比较,模型组细胞凋亡率、CK、LDH活性和MDA水平、Bax mRNA和蛋白表达和p-Nrf2均明显上升,SOD活性、Nrf2、HO-1、Bcl-2 mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05);与模型组比较,阿托伐他汀组和桑白皮多糖各剂量组细胞凋亡率、CK、LDH活性和MDA水平、Bax mRNA和蛋白表达明显下降,SOD活性、Nrf2、HO-1、Bcl-2 mRNA和蛋白、p-Nrf2表达明显升高(P<0.05);桑白皮多糖对上述指标的作用与剂量有关。结论 桑白皮多糖可减轻慢性低氧环境大鼠心肌损伤,可能与激活Nrf2/ARE通路相关。

低氧细胞应激的HIF-1信号通路

低氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)由HIF-1α和HIF-1β两个亚基组成,在低氧下其能激活多种靶基因的转录,在细胞、组织生长发育和生理应激,以及某些病理过程中具有重要的作用。近10年来,有关HIF-1在细胞低氧应激时的信号转导通路,特别是HIF-1α介导的基因转录调控的研究取得了巨大进展。

慢性间歇低氧对幼鼠认知及相关脑区CREB的影响

目的:观察慢性间歇低氧(CIH)对幼鼠认知的影响并探讨其潜在的机制。方法:取八臂迷宫训练成功的SPF级健康雄性SD幼鼠40只,随机分为:间歇低氧2周(2IH)、4周组(4IH),对照2周(2C)、4周组(4C),建立IH幼鼠模型,低氧结束后进行八臂迷宫测试,观察海马和前额叶皮层超微结构变化及cAMP反应元件结合蛋白(CREB)mRNA和磷酸化CREB蛋白的表达。结果:4组幼鼠的记忆错误次数比较均有显著差别(均P<0.05);IH各组海马及前额叶皮层神经元均出现早期凋亡和变性,尤以4IH组最为明显,对照组则基本正常;与相应对照组相比,2IH、4IH组幼鼠海马和前额叶皮层CREB mRNA和p-CREB蛋白的表达水平显著降低(均P<0.05),且以4IH组最低(均P<0.01),差异显著,两对照组之间无显著差异(P>0.05)。结论:慢性间歇低氧诱导海马和前额叶皮层神经元超微结构改变,还下调CREB的基因转录和抑制CREB蛋白磷酸化,抑制记忆相关蛋白的合成,这可能是引起学习记忆能力下降的重要机制之一。

pGL3-EPO-HRE报告基因质粒的构建及功能鉴定

目的构建串联低氧反应元件(HRE)报告质粒pGL3-EPO-HRE并进行功能验证。方法按照人促红细胞生成素(EPO)基因3′末端HRE增强子序列,人工设计合成首尾2段3′末端部分互补的单链DNA,然后通过退火及延伸合成两端带有M luⅠ和BglⅡ酶切位点的包含3个串联排布的HRE的双链DNA,克隆到T载体测序正确后,将其插入到pGL3-promoter报告载体。构建好的pGL3-EPO-HRE分别与pcDNA3-H IF-1α和pcDNA3共转染MCF-7细胞,经氯化钴(CoC l2)作用24h后测定报告基因的活性。结果质粒测序及酶切结果正确,瞬时转染实验显示,在常氧条件下,CoC l2及pcDNA3-H IF-1α可以使pGL3-EPO-HRE报告基因的活性增高约10倍(P<0.01),而且两者共同作用可以使报告基因的活性进一步增高约30倍(P<0.01)。结论pGL3-EPO-HRE可以与低氧诱导因子-1(H IF-1)结合并被激活,可以用来鉴定和检测细胞中H IF-1的表达及蛋白活性。

低氧诱导人VEGF基因表达载体的构建及其蛋白表达检测

目的以人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因的低氧反应元件(HRE)作为增强子,构建含HRE的真核表达载体,探讨含HRE不同拷贝数的载体对低氧的反应状态。方法将人工合成的HRE串联后与CMV启动子连接,替换pcDNA3.1的启动子部分,构建成低氧诱导真核表达载体;将hVEGF基因重组到此载体中,转染BHK细胞。用免疫组化染色法检测VEGF的表达,用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测低氧前后细胞hVEGF表达的变化。结果成功构建了含HRE的低氧诱导真核表达载体4HRE-pcDNA-VEGF和6HRE-pcDNA-VEGF。转染细胞后进行低氧培养,VEGF的表达均增高,含6HRE的低氧诱导作用高于4HRE。结论在含HRE的真核表达载体中,低氧时可诱导基因的表达,其拷贝数可影响诱导作用的强度。

抗氧化剂和低氧诱导醌氧化还原酶1基因的表达及其机制

目的 探讨低氧和抗氧化剂诱导醌氧化还原酶1(NQO1 )基因表达及其与细胞增殖的关系和诱导表达的调节机制。方法 人肝癌细胞SMMC 772 1经抗氧化剂[酪醇(p Ty) ,丁基羟茴香醚(BHA) ,β萘黄酮(βNF) ]、低氧或两者共同处理2 4h ,分别采用微孔板测定法、RT PCR、结晶紫显色法、电泳迁移率变动试验(EMSA)测定MQO1 活力,NQO1 mRNA表达,细胞增殖和细胞核蛋白与抗氧化反应元件(ARE)的结合情况。结果 常氧下BHA ,βNF和p Ty均能诱导NQO1 比活力增加,酪醇诱导NQO1 mRNA表达呈剂量依赖性增加,且与酶比活力存在明显的相关性;酪醇在一定范围内,其抑制细胞增殖的能力呈剂量依赖性,且细胞增殖与酶比活力存在负相关。低氧与抗氧化剂共同处理比常氧下抗氧化剂诱导NQO1 比活力有增加(r=-0 41,P <0 0 1)。EMSA试验表明,ARE能与低氧、抗氧化剂或低氧+抗氧化剂诱导的核蛋白特异结合。结论 抗氧化剂在常氧下可诱导人肝癌细胞NQO1 活力增加,低氧加强其诱导能力。其中酪醇诱导NQO1 活力与NQO1 mRNA表达量增加相关,同时酪醇能抑制细胞的增殖,这种增殖抑制与酶活力诱导增加有关。ARE参与介导抗氧化剂和低氧诱导NQO1 基因表达的调节。

胸交感神经阻滞降低大鼠低氧性肺动脉高压的机制

目的研究胸交感神经阻滞(TSB)降低大鼠低氧性肺动脉高压(HPH)的机制。方法选择健康雄性Wistar大鼠48只,随机分为常氧组、低氧组、低氧/罗哌卡因组、低氧/生理盐水组各12只。常氧组在常氧常压下饲养3周,其余3组大鼠在自制常压低氧(10±0.5)%舱内饲养3周,同时低氧/罗哌卡因组和低氧/生理盐水组给与胸段硬膜外腔置管分别注入0.2%罗哌卡因和0.9%生理盐水各50μl行胸段(胸1-5)交感神经阻滞术(TSB)。用放射免疫分析法测定大鼠血清环磷酸鸟苷(cGMP)和血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量; RT-PCR和蛋白印迹法测定大鼠肺组织c AMP反应元件结合蛋白(CREB)的基因表达和蛋白质表达。结果①低氧/罗哌卡因组大鼠血浆cGMP水平增加和血清TNF-α水平降低,与低氧组、低氧/生理盐水组比较差异显著。②低氧/罗哌卡因组大鼠肺小动脉血管CREB的基因表达和蛋白质表达均降低,而低氧组、低氧/生理盐水组表达增加。结论 TSB可降低HPH大鼠血清TNF-α水平,升高血浆cGMP水平。同时能逆转肺小动脉CREB的基因和蛋白质过表达现象,这可能是TSB降低HPH和改善血管重构重要的分子学机制之一。

氧相关HRE启动子控制下表达hVEGF_(165)基因重组2型腺相关病毒的获得及鉴定

目的包装及鉴定低氧反应元件(HRE)启动子控制下缺氧诱导目的基因hVEGF165基因表达的2型重组腺相关病毒。方法磷酸钙三质粒共转染方法将pAAV-HRE9-VEGF165、pAAV-Rep/cap、pHelper质粒转染HEK293T细胞,制备2型重组腺病毒相关病毒(rAAV2)。分离培养S-D大鼠心肌细胞,转染rAAV,细胞固定后做免疫细胞荧光染色,检测细胞内血管内皮细胞生长因子(VEGF165)蛋白的表达。结果pAAV-HRE9-VEGF165质粒经测序鉴定,结果与NCBI GenBank公布的人VEGF165cDNA核苷酸序列(AB021221)完全一致,含HRE启动子及目的基因hVEGF165的2型重组非复制型腺相关病毒包装成功,可感染原代培养的大鼠心肌细胞,缺氧可诱导VEGF165蛋白表达。结论成功包装并鉴定了rAAV-HRE9-hVEGF165载体,可有效转染心肌细胞,VEGF165基因的适时表达,为缺血性心肌疾病的“分子搭桥”治疗提供了更可能的安全性。

低氧调控p53RFP基因启动子活性的初步研究

目的观察低氧对p53RFP基因表达及启动子活性的影响,探索低氧反应元件(HRE)是否参与了低氧对p53RFP基因启动子活性的调控。方法将HEK293细胞置于低氧条件下培养,实时定量PCR及Western blot检测p53RFP mRNA及蛋白表达水平;通过定点突变技术构建HRE突变型p53RFP启动子双荧光素酶报告基因载体并转染HEK293细胞,分别置于常氧和低氧条件下培养,双荧光素酶报告基因检测系统检测启动子活性。结果低氧处理不同时间点p53RFP mRNA表达水平均显著增加,差异有统计学意义(F=96.493,P<0.001);低氧组p53RFP及HIF-1α蛋白表达量均呈时间依赖性递增。成功构建了HRE突变型p53RFP启动子双荧光素酶报告基因载体,双荧光素酶报告基因检测显示,与常氧组相比,低氧条件下野生型p53RFP基因启动子活性增加(t=-19.504,P<0.001),HRE单突变或双突变后启动子活性均较野生型降低(F=160.891,P<0.001)。结论低氧可诱导p53RFP基因表达上调;成功构建了HRE突变型p53RFP双荧光素酶报告基因载体,HRE位点可能在低氧调控p53RFP基因启动子活性中发挥关键作用。

MSK-1和CREB参与低氧预适应降低小鼠缺血性脑损伤

目的探讨丝裂原和应激激活蛋白激酶1(MSK-1)及cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在低氧预适应(HPC)保护小鼠缺血脑组织中的作用。方法将健康成年雄性BALB/c小鼠随机分为4组:常氧假手术组(NS)、HPC假手术组(HS)、常氧缺血组(NI)和HPC缺血组(HI)。利用已建整体HPC和大脑中动脉阻塞(MCAO)小鼠模型,并结合神经行为学评价、氯化三苯基四氮唑(TTC)染色和蛋白印迹(Western blot)等技术,观察HPC对小鼠脑缺血损伤的影响,检测小鼠脑皮层不同缺血区域内MSK-1和CREB磷酸化水平和蛋白表达量的变化。结果 HPC可明显改善小鼠脑缺血后神经行为学表现,减小MCAO致脑缺血皮层梗死体积和水肿率;MCAO致小鼠脑局部皮层缺血后,其缺血核心区内MSK-1和CREB磷酸化水平明显下降(P<0.05);HPC可明显增加缺血半影区内MSK-1和CREB磷酸化水平(P<0.05),而MSK-1和CREB总蛋白表达量在缺血核心区和半影区内均无明显改变。结论 HPC可能通过提高缺血半影区内MSK-1及其底物CREB的磷酸化水平来降低小鼠缺血性脑损伤。

慢病毒介导5HRE-CEAp调控RASSF1A表达对胃癌细胞SGC7901抑制的研究

目的:探讨5拷贝低氧反应元件(5HRE)联合癌胚抗原启动子(CEAp)调控抑癌基因RAS相关域家族1A(RASSF1A)的慢病毒载体(LV-5HRE-CEAp-RASSF1A)对胃癌细胞SGC7901的体外抑制作用。方法:采用qRT-PCR方法检测空白对照组细胞SGC7901、阴性对照组细胞SGC7901/NC及慢病毒载体感染的实验组细胞SGC7901/5HRE-CEAp-RASSF1A中RASSF1A mRNA表达水平;通过CCK-8实验检测各组细胞的生长曲线;通过流式细胞技术检测各细胞的凋亡及细胞周期。结果:qRT-PCR结果显示,与其他组比较,实验组细胞的RASSF1A mRNA水平在低氧条件下明显升高(P<0.01);CCK-8实验结果显示从第3天开始,低氧条件下实验组细胞的OD值开始低于其它各组细胞(P<0.05);流式细胞检测结果显示与其它各组细胞比较,低氧条件下实验组细胞凋亡比例明显增加(P<0.01),并且其细胞周期G1期的细胞百分比明显增加(P<0.05)。结论:慢病毒载体LV-5HRE-CEAp-RASSF1A具有在低氧诱导下显著抑制胃癌细胞株SGC7901增殖的作用。