水通道蛋白4在瑞芬太尼后处理对成人心肌低氧复氧损伤保护中的作用

目的通过构建成人心肌低氧复氧(H/R)损伤模型,观测瑞芬太尼后处理对成人心肌H/R损伤的保护效应,并探讨水通道蛋白4(AQP-4)在此效应中的作用。方法成人右心耳肌小梁低氧90 min/复氧120 min,低氧结束前10 min开始分别灌注瑞芬太尼0.01,0.1或1.0 nmol·L-1至复氧开始后10 min停止。实验期间,连续监测肌小梁的收缩张力。实验结束后,Western印迹法检测AQP-4蛋白表达。结果与正常对照组相比,H/R组低氧处理30 min后,肌小梁的收缩张力值明显降低(P<0.05),90 min时降至最低;瑞芬太尼0.1 nmol·L-1组150和180 min时张力值均高于H/R组(P<0.05);瑞芬太尼1.0 nmol·L-1组120,150,180和210 min时,张力值均高于H/R组(P<0.05)。与正常对照组相比,H/R组心肌AQP-4表达水平明显增高(P<0.05);与H/R组比较,瑞芬太尼0.1和1.0 nmol·L-1组心肌AQP-4的表达水平下调(P<0.05)。结论瑞芬太尼可减轻成人心肌H/R损伤,其作用机制可能与AQP-4表达降低有关。

内皮细胞低氧复氧损伤模型的建立

目的构建人血管内皮细胞低氧复氧损伤模型,作为心肌组织慢复流的体外研究模型。方法设定三气培养箱的混合气中5%O_(2)为低氧培养条件,二氧化碳培养箱(95%空气、5%CO_(2))中的培养条件为复氧条件。将对数生长期的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)随机分为5组,分别置于三气培养箱(90%N 2、5%CO_(2)、5%O_(2))中处理不同时间(0、4、8、16及32 h)。挑选出最佳低氧处理时间后,再将随机分组的细胞进行不同时间(0、1、2、3、4、5及6 h)的复氧处理。Western blot检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)的蛋白表达;显微镜下观察细胞形态学变化;CCK-8法检测细胞存活率;酶联免疫吸附法测定乳酸脱氢酶(LDH)活性以反映细胞损伤情况。结果与对照组相比,实验组HUVEC的HIF-1α蛋白表达随低氧处理时间的延长而增高(P<0.01);细胞密度在低氧处理的短时间内会适应性增加,从16 h开始降低;细胞存活率的变化趋势与细胞密度一致(P<0.01);LDH活性则在低氧4 h时升高,低氧8 h时回落,低氧16 h时又重新回升(P<0.01)。复氧后,细胞密度与细胞存活率的变化随时间呈现先降低后升高的趋势(P<0.05);LDH活性则随时间呈现先升高后降低的趋势,峰值出现于复氧3 h(P<0.01)。实验结果表明,低氧16 h为最佳低氧处理时间,复氧3 h为最佳复氧处理时间。结论本研究建立了稳定可靠的HUVEC低氧复氧损伤模型,为心肌组织缺血再灌注后慢复流的体外实验研究奠定了基础。

白藜芦醇通过调控自噬减轻乳大鼠心肌细胞低氧复氧损伤

目的探讨白藜芦醇(Res)对低氧复氧(H/R)损伤心肌细胞的保护作用。方法采用三气培养箱法制备乳大鼠心肌细胞H/R损伤模型(H12 h/R12 h)。乳大鼠心肌细胞分为5组:细胞对照组、H/R模型组、模型+Res 5和20μmol·L^-1组(Res预处理细胞12 h,然后H12 h/R12 h)和模型+Res 20μmol·L^-1+氯喹(CQ)10μmol·L^-1组(Res预处理细胞12 h,然后含CQ的培养基H12 h/R12 h);CCK-8法检测心肌细胞存活率,比色法测定心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡,免疫荧光法检测心肌细胞内微管相关蛋白1轻链3(LC3)阳性细胞率,Western印迹法检测心肌细胞Beclin 1,LC3Ⅱ和P62蛋白表达水平。结果与细胞对照组比较,H/R组心肌细胞存活率下降(P<0.01),细胞凋亡率和LDH漏出率上升(P<0.01),LC3阳性细胞率和Beclin 1表达水平无明显变化,LC3Ⅱ和P62表达水平下降(P<0.05)。与H/R组比较,Res 5和20μmol·L^-1可升高心肌细胞存活率(P<0.05),降低凋亡率和LDH漏出率(P<0.01),LC3阳性细胞率增高(P<0.05),Beclin 1,LC3Ⅱ和P62蛋白表达水平增加(P<0.05)。与模型+Res 20μmol·L^-1组比较,加用CQ组心肌细胞存活率下降(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05),LDH漏出率增高(P<0.01),Beclin 1,LC3Ⅱ和P62蛋白水平和LC3阳性细胞率无明显变化。结论Res对H/R损伤心肌细胞具有保护作用,其机制可能与活化自噬有关。

丹参对心肌低氧/复氧损伤的保护作用的研究

目的 :研究中药丹参 (SM )对心肌低氧 /复氧损伤的保护作用。方法 :运用31P NMR技术对离体灌流大鼠心脏的高能磷酸化合物含量及细胞内的 pH值 (pHi)进行动态跟踪。结果 :丹参注射液能明显减轻低氧期间心肌高能磷酸合物含量的下降 ,促使复氧期间PCr、ATP相对含量的恢复 ,减少低氧及复氧阶段心肌 pHi的下降。 结论 :丹参能改善低氧及复氧期间心肌能量代谢水平 ,减轻心肌低氧 /复氧损伤 。

粉防己碱对新生大鼠心肌细胞低氧/复氧损伤中细胞凋亡的影响

目的 :研究粉防己碱对培养心肌细胞模拟缺血 /再灌过程中心肌细胞凋亡的影响 .方法 :采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养 ,建立模拟心肌缺血 /再灌注模型 ,实验分 3组 :①正常对照组 ;②模拟缺血 /再灌注组 :细胞缺氧 12 0min ,复氧 2 4 0min ;③ 30 μmol·L-1粉防己碱 +缺血 /再灌注组 .计算台盼蓝摄取率 ,测定乳酸脱氢酶 (LDH)活性 ,以流式细胞仪 (FCM)和透射电镜观察细胞凋亡 .结果 :在正常对照组 ,FCM未发现凋亡峰 ,电镜未发现凋亡细胞 ,而缺血 12 0min/再灌注 2 4 0min组FCM的凋亡率为 15 1% ,电镜可见到典型的凋亡细胞 ,台盼蓝摄取率和LDH活性显著增加 (P <0 0 1) .粉防己碱组则细胞大部分存活 ,凋亡率明显降低 (平均 3 2 % ) .结论 :细胞凋亡参与了心肌缺血 /再灌注损伤 ,粉防己碱可减少缺血

柚皮苷抑制低氧/复氧致大鼠心肌细胞系H9c2损伤

目的研究柚皮苷(NAR)对H9c2低氧/复氧(H/R)损伤心肌细胞内质网应激的影响。方法将H9c2心肌细胞随机分为对照组(C组)、低氧/复氧组(H/R组)低氧4 h后复氧24 h、柚皮苷10、20和40μg/mL组。于低氧前6 h给予柚皮苷培养再行低氧4 h后复氧24 h。实验后TUNEL检测心肌细胞凋亡;Western blot检测GRP78、ATF6、Bax及Bcl-2蛋白表达。结果与对照组相比,H/R组细胞凋亡增加,GRP78、ATF6、Bax蛋白表达和Bax/Bcl-2比率显著上调,而Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.05);与H/R组比较,柚皮苷3个剂量组均可使细胞凋亡减少,GRP78、ATF6、Bax、Bax/Bcl-2比率下调,Bcl-2上调(P<0.05),尤其以柚皮苷20和40μg/mL组作用最显著。结论柚皮苷预处理可以降低细胞凋亡,其机制可能与抑制内质网应激有关。

恩施硒茶对小鼠低氧/复氧损伤的保护作用及氯胺酮对这种保护作用的调节

目的 :探讨恩施硒茶对小鼠低氧 /复氧 (H /R)损伤的保护作用及氯胺酮对这种保护作用的调节。方法 :将小鼠用硒茶和氯胺酮处理后 ,建立小鼠H /R模型 ,观察血液中的活性氧 (ROS)、超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT )等的变化。结果 :硒茶组和氯胺酮组ROS均减少 ,且氯胺酮的作用明显强于硒茶 ;硒茶组SOD及CAT活性增强 (P <0 .0 1 ) ,氯胺酮组SOD活性明显减弱(P <0 .0 1 ) ,氯胺酮、硒茶联合组ROS、MDA明显减少 (P <0 .0 1 )。结论 :硒茶有很强的抗氧化作用 ,它能清除体内的ROS ,氯胺酮能清除ROS ,降低SOD的活力 ;二者联合能更有效地清除ROS。

富硒板党地上部分对小鼠益智和低氧/复氧损伤的保护作用研究

目的探讨富硒板党地上部分对小鼠益智和低氧/复氧损伤的保护作用。方法益智实验采用苯异丙腺苷(PIA)致小鼠学习记忆障碍等益智模型;抗氧化实验采用小鼠低氧/复氧损伤的模型,观察小鼠血液中ROS、SOD、MDA和CAT的变化。结果富硒板党地上部分水煎液可提高小鼠的学习记忆能力,明显延长小鼠游泳时间;降低ROS和MDA值,增加SOD活性,对CAT作用不明显。结论富硒板党地上部分对小鼠具有益智和低氧/复氧损伤的保护作用。

bFGF增强大鼠低氧/复氧损伤心脏成纤维细胞β-catenin表达

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对心脏成纤维细胞低氧/复氧损伤后β-catenin蛋白表达的影响。方法制作体外培养第3代大鼠心脏成纤维细胞低氧/复氧(Hy/R)损伤模型,分为6组:对照组、单纯低氧/复氧损伤(Hy/R)组、以及5、10、20、和40μg/L bFGF干预组,采用MTT法、TUNEL法、免疫荧光法及激光共聚焦显微镜分析检测心脏成纤维细胞增殖率、凋亡百分率和β-catenin蛋白表达。结果单纯Hy/R组较对照组细胞增殖率降低(P<0.05),β-catenin蛋白表达减少(P<0.05),凋亡细胞增多(P<0.05)。20和40μg/L bFGF干预组较单纯Hy/R组细胞增殖率升高(P<0.05),β-catenin蛋白增多(P<0.05),凋亡细胞减少(P<0.05)。20、40μg/LbFGF干预组较对照组细胞增殖率、β-catenin蛋白表达、凋亡百分率均有显著改变(P<0.05)。结论bFGF提高Wnt通路中β-catenin蛋白的表达,促进心脏成纤维细胞增殖并减少Hy/R损伤后心脏成纤维细胞凋亡。

缺血预处理诱导的外泌体对心肌细胞低氧/复氧损伤及Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨缺血预处理(IPC)诱导的外泌体(exosome)对心肌细胞低氧/复氧(H/R)损伤及凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达的影响。方法SD大鼠进行IPC或对照处理后,提取血清中的外泌体,标记为IPC-Exo、CON-Exo。采用BCA蛋白定量法测定外泌体浓度。H9c2心肌细胞随机分为Control组、H/R组、H/R+IPC-Exo组和H/R+CON-Exo组。除Control组细胞常规培养外,其余各组细胞均给予5 h低氧和1 h复氧处理,H/R+IPC-Exo组和H/R+CON-Exo组细胞在H/R损伤前分别与相应外泌体共孵育12 h。处理结束后,分别检测各组细胞活力、乳酸脱氢酶活性、细胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果 IPC明显增加血清外泌体释放。与H/R组比较,IPCExo与H9c2心肌细胞共孵育,可以增加细胞活力、减少乳酸脱氢酶释放、抑制心肌细胞凋亡,减轻心肌细胞H/R损伤;且能上调Bcl-2表达,下调Bax表达。而CON-Exo与心肌细胞共孵育后,对H/R损伤无明显影响。结论缺血预处理诱导的外泌体可以减轻H9c2心肌细胞H/R损伤,其机制可能是通过上调Bcl-2、下调Bax表达,从而发挥心肌保护作用。

健脾补土法组方含药血清对体外嗅鞘细胞低氧/复氧损伤模型P65、P50及磷酸化IκBα表达的影响

目的探讨健脾补土法组方含药血清对体外嗅鞘细胞低氧/复氧损伤模型核因子KB(nuclear factor-kappa B,NFKB)的亚单位P65、P50及NF-KB抑制蛋白(P-IκBα)表达的影响。方法将原代培养的嗅鞘细胞分为5组:正常血清对照组、正常血清+低氧组、低氧+依达拉奉含药血清组、低氧+健脾补土法组方含药血清组、正常血清+低氧+NF-KB抑制剂/抗氧化剂(PDTC,50μmol/L)组,采用微需氧袋低氧/复氧的方法诱导嗅鞘细胞形成脑缺血再灌注损伤样模型,用Western blot法检测嗅鞘细胞胞浆P65、P50、P-IκBα和胞核P65、P50的含量。结果与正常血清对照组比较,正常血清+低氧组胞浆和胞核P65、P50,胞浆P-IκBα表达均显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);与正常血清+低氧组比较,低氧+依达拉奉组、低氧+健脾补土组、正常血清+低氧+PDTC组、低氧+健脾补土+PDTC组胞浆和胞核P65、P50,胞浆P-IκBα表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论健脾补土法组方能通过抑制嗅鞘细胞缺氧/复氧损伤后P65、P50、P-IκBα的过度表达,对NF-κB通路的活化具有抑制作用。

细胞自噬在大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞低氧/复氧损伤中的作用

目的探讨细胞自噬在大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)低氧/复氧(H/R)中的作用。方法将大鼠AECⅡ分为对照组(C)、低氧/复氧组(H/R)、DMSO溶剂组(HD)、自噬激动剂组(Rap)和自噬抑制剂组(3-MA)。CCK-8法检测细胞活力;反转录RT-PCR检测自噬相关蛋白mRNA表达水平;Western blot检测自噬相关蛋白水平;透射电镜检测细胞超微结构。结果与对照组相比,H/R组细胞活力均有下降,自噬相关蛋白及mRNA表达水平均上调(P<0.05),细胞超微结构损伤较严重;与H/R组相比,3-MA组的细胞活力较高,自噬相关蛋白及mRNA表达水平均下调(P<0.05)。结论低氧/复氧可激活细胞自噬引发大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤。

人端粒酶反转录酶过表达抑制低氧/复氧大鼠心肌细胞的凋亡

目的探讨人端粒酶反转录酶(TERT)在大鼠心肌低氧/复氧(Hypo/Ro)损伤中的保护作用。方法利用腺病毒将端粒酶催化亚基转染至大鼠心肌细胞;利用慢病毒介导小干扰核糖核酸(siRNA)沉默心肌细胞TERT基因;研究TERT过表达和沉默后对大鼠心肌细胞Hypo/Ro诱导的细胞凋亡的影响。结果 Hypo/Ro组细胞凋亡率显著高于对照组;TERT过表达组可显著降低Hypo/Ro心肌细胞的凋亡率;过表达的TERT可降低心肌细胞CytC的表达并增强P21的表达(P<0.05)。结论过表达的TERT可抑制Hypo/Ro诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与调控p21及CytC基因表达有关。

蝎毒纤溶活性肽对低糖低氧/复氧损伤大鼠皮层神经元的保护作用

目的:研究蝎毒纤溶活性肽(SVFAPs)对大鼠神经元低糖低氧/复氧损伤的影响,探讨药物发挥神经保护作用的可能机制。方法:建立原代培养的大鼠皮层神经元的低糖低氧/复氧(OGD/R)模型,采用四唑蓝(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞活力;检测细胞上清液中丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;Hoechst染色和DNA片段法检测细胞凋亡;W estern b lot法检测PARP蛋白的表达。结果:经OGD/R损伤后细胞活力明显下降,细胞上清液中MDA、NO升高,SOD降低;出现凋亡典型的形态学特征,PARP蛋白表达下降;蝎毒纤溶活性肽(2～8mg/L)可不同程度提高低糖低氧/复氧后神经元的活力,降低细胞上清液MDA和NO含量,提高SOD活性。改善凋亡相关的细胞核形态学改变,并且减少凋亡特征性DNA片段化的发生,降低细胞凋亡率,保持PARP的完整性。结论:蝎毒纤溶活性肽对低糖低氧/复氧损伤的神经元具有保护作用,其机制可能与抗氧化和减轻细胞凋亡有关。