低氧无血清诱导乳鼠心肌细胞胰岛素样生长因子2受体表达上调

目的研究胰岛素样生长因子2受体(IGF-2R)在体外模拟心肌缺血低氧环境时表达的变化。方法分离培养SD乳鼠心肌细胞,以低氧和无血清处理不同时间点后收获细胞,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和实时定量RT-PCR测定IGF-2RmRNA的表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定IGF-2R蛋白水平。结果与对照组相比,低氧无血清处理12和24 h乳鼠心肌细胞IGF-2RmRNA表达显著增高(P<0.01),处理24 h后IGF-2R蛋白表达也升高(P<0.05)。结论低氧无血清可诱导乳鼠心肌细胞IGF-2R的表达,IGF-2R可能在缺血低氧引起心肌损害过程中发挥重要的作用。

低氧无血清对乳鼠心肌细胞皮肤桥蛋白表达的影响

目的在体外用低氧无血清条件模拟缺血心肌微环境,探讨心肌细胞皮肤桥蛋白(DPT)表达的变化。方法以低氧无血清处理乳鼠心肌细胞0、6、12和24 h,用实时反转录聚合酶链式反应检测DPT mRNA的表达变化,用Western blot检测DPT的蛋白表达变化。用酶联免疫吸附实验(ELISA)证实低氧无血清处理乳鼠心肌细胞24 hDPT蛋白的表达变化。结果与0 h组相比,低氧无血清处理心肌细胞6、12、24 h DPT的mRNA和蛋白水平均显著升高(P<0.05)。用ELISA法也检测到低氧无血清处理心肌细胞24 h DPT的表达水平高于正常对照组(P<0.05)。结论低氧无血清可促进乳鼠心肌细胞DPT的表达,DPT可能在缺血缺氧引起的心室重构中发挥一定的作用。

内源性硫化氢在低氧/无血清诱导骨髓间充质干细胞凋亡中的作用

目的探讨内源性硫化氢(H_2S)在低氧/无血清(H/SD)诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡中的作用。方法体外分离培养大鼠MSCs,用H/SD处理MSCs建立H/SD诱导MSCs凋亡的实验模型,构建CSE重组慢病毒载体并转染MSCs,PI染色流式细胞术检测MSCs凋亡率,Western blot法检测MSCs中CSE蛋白的表达,亚甲基蓝分光光度计法检测MSCs内源性H_2S的含量。结果 MSCs存在内源性H_2S及其合成酶CSE蛋白的表达,H/SD可呈时间依赖性诱导MSCs凋亡,显著抑制MSCs内源H_2S生成和CSE蛋白的表达;而CSE过表达则明显抑制H/SD诱导的MSCs凋亡,促进MSCs内源H_2S生成。结论 CSE/H_2S代谢途径功能障碍促进H/SD诱导MSCs凋亡,内源性H_2S参与了H/SD诱导MSCs凋亡。