氯化钴诱导建立口腔鳞状细胞癌低氧模型及其生物学行为初探

目的 利用氯化钴（CoCl2）化学试剂模拟口腔鳞状细胞癌细胞低氧模型,探讨低氧环境对癌细胞生物学行为的影响.方法 用50、100、150、200 μmol/L的CoCl2化学试剂处理口腔鳞状细胞癌细胞株HSC-3及SCC-4,同时分为对照组（不含CoCl2的DMEM培养液培养细胞）和实验组（SCC-4、HSC-3细胞经不同浓度CoCl2处理）.通过荧光定量PCR方法,首先在mRNA水平检测乏氧诱导因子1 α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）及下游靶基因血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、B淋巴细胞瘤2（B-cell lymphoma-2,BCL-2）的表达,并用蛋白质印迹法进一步验证;通过细胞增殖及流式细胞术检测低氧对口腔鳞状细胞癌生长、凋亡及细胞周期的影响.采用细胞划痕及Transwell等检测细胞迁移能力的改变.结果 与对照组相比,150 μmol/L CoCl2培养24 h后,实验组SCC-4细胞内HIF-1α、VEGF及BCL-2的mRNA表达水平分别增加6.00±0.20、5.40±0.40和5.40±0.30;HSC-3细胞分别增加5.60±0.30、5.20±0.60、5.80±0.40.150 μmol/L的CoCl2培养2～3d后,HSC-3、SCC-4实验组与对照组相比,细胞生长速度降低,结果经t检验,P值均小于0.05;流式细胞术检测发现,150 μ.mol/L CoCl2培养后的细胞凋亡增加,对照组HSC-3细胞早期凋亡＋晚期凋亡的比例为2.25％,实验组为5.82％;对照组SCC-4细胞早期凋亡＋晚期凋亡的比例是2.58％,而实验组为10.27％.Transwell实验中对照组HSC-3和SCC-4细胞24 h迁移的面积占比分别为（31.5±2.3）％、（29.1±1.5）％,实验组该比率分别为（18.3±1.9）％、（13.2±0.8）％,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 利用化学诱导剂CoCl2可在常氧条件下诱导出口腔鳞状细胞癌的低氧模型,肿瘤细胞内低氧标志物表达均明显提高,同时细胞生物学行为也发生改变,细胞增殖速度降低,凋亡增加,迁移速度降低.