血红素氧合酶1基因表达与慢性低氧高二氧化碳性肺动脉高压的关系

目的 :研究一氧化碳体系对低氧高二氧化碳性肺动脉高压的调控作用。方法 :将SD大鼠分为正常对照组 (A组 ) ,4周低O2 高CO2 组 (B组 ) ,4周低O2 高CO2 +血晶素组 (C组 )。采用透射电镜、图像分析、免疫组化、组织原位杂交技术等方法 ,观察各组大鼠肺动脉平均压 (mPAP)、颈动脉平均压 (mCAP)、右心室 / (左心室 +室间隔 )重量比 [RV/ (LV +S) ]、肺细小动脉显微和超微结构、血CO浓度及肺细小动脉HO - 1及其基因表达的变化。结果 :①B组mPAP、RV/ (LV +S)显著高于A组 (P <0 0 1) ,C组mPAP、RV/ (LV +S)明显低于B组 (P <0 0 1) ,3组间mCAP比较差异无显著性 (P >0 0 5 )。②全血CO浓度B组明显高于A组 (P <0 0 1) ,C组明显高于B组 (P <0 0 1)。③光镜下肺细小动脉管壁面积 /管总面积 (WT/TA)、肺细小动脉中膜平滑肌细胞核密度 (SMC)、肺细小动脉中膜厚度(PAMT)B组显著高于A组 (P <0 0 1) ,C组明显低于B组 (P <0 0 1)。④电镜下B组肺细小动脉中膜平滑肌细胞增生 ,面积增大 ,染色质增多 ,外膜胶原纤维密集 ,C组大鼠肺细小动脉中膜平滑肌细胞和外膜胶原纤维增生明显轻于B组。⑤免疫组化、原位杂交发现B组I级 (直径 >2 0 0 μm)、Ⅱ级 (直径 5 0 - 2 0 0 μm)、Ⅲ级 (直径 <5 0 μm)肺细小动脉HO - 1及HO -

内质网应激在大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉高压中的作用

目的:观察低氧高二氧化碳性肺动脉高压大鼠的肺血管重塑并探讨内质网应激(ERS)在肺动脉高压中的作用。方法:将40只SD大鼠随机分为四组:常氧对照组(N)、低氧高二氧化碳组(HH)、ERS通路抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid)组(4-PBA)、ERS通路激动剂衣霉素(tunicamycin)组(TM),n=10。测量各组大鼠的肺动脉平均压(m PAP)、颈动脉平均压以及右心室肥大指数,免疫荧光α-SMA标记法鉴定各组肺中小动脉平滑肌细胞,电镜观察肺组织及肺中小动脉形态学变化,原位末端标记法(TUNEL)检测各组肺动脉平滑肌细胞的凋亡指数,采用RT-PCR和Western blot分别检测各组大鼠葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12) m RNA及蛋白质表达。结果:(1)与N组相比,HH组、4-PBA组、TM组m PAP、右心室游离壁重量/左心室加心室间隔重量[RV/(LV+S)]、肺动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)比值增加(P<0.01),肺动脉管腔面积/管总面积(LA/TA)比值减小(P<0.01),细胞凋亡指数降低(P<0.05或P<0.01)。ERS相关蛋白质及m RNA的表达量升高,各差异均有统计学意义。(2)与HH组相比,4-PBA组m PAP和[RV/(LV+S)]、WA/TA值减小(P<0.01),LA/TA值和细胞凋亡指数上升(P<0.05或P<0.01),ERS相关蛋白质和m RNA的表达量均下调(P<0.05或P<0.01);(3)与HH组相比,TM组m PAP、[RV/(LV+S)]、WA/TA值升高(P<0.05或P<0.01);肺动脉中膜层增厚,LA/TA值和细胞凋亡指数降低(P<0.01)。ERS相关蛋白质及m RNA的表达量均升高,除GRP78蛋白质表达量无明显变化外,其余各差异均有统计学意义。结论:低氧高二氧化碳诱导的肺动脉高压大鼠肺血管重塑可能与肺动脉平滑肌细胞增殖过度及凋亡过少有关; ERS相关因子(JNK、caspase-12和CHOP)参与低氧高二氧化碳性肺动脉高压的调控。

三七皂苷在JNK介导的低氧高二氧化碳性肺动脉高压模型中的机制探讨

目的研究JNK信号通路在大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉高压(HHPH)发生发展中的动态变化,探讨三七皂苷(PNS)防治HHPH的机制。方法复制慢性HHPH的SD大鼠模型,分为正常组(N,n=10),低O_2高CO_2组(H4w,n=10)及PNS治疗组(Hp4w,n=10)。RT-qPCR及Western blot检测JNK mRNA及蛋白表达情况。原代培养SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),取2~5代对数生长期细胞,分为正常组(N)、低O_2高CO_2组(H)及PNS治疗组(R10、R50、R100),PNS治疗组分别用不同浓度(10、50、100 mg/L)的三七皂苷单体R1进行处理,24 h后收集细胞,RT-qPCR及Western Blot检测JNK mRNA及蛋白表达情况。然后用R1及JNK抑制剂SP600125分别及联合处理PASMCs 5 d,CCK8检测细胞增殖情况。结果 (1)与N组相比,H4w组和Hp4w组mPAP均明显增高(P<0.05),同时Hp4w组mPAP明显低于H4w组(P<0.05)。(2)肺组织JNK mRNA在H4w组中表达最高,N组最低,Hp4w组介于两组之间(均P<0.05);p-JNK蛋白在H4w组较N组高表达(P<0.05),Hp4w组较H4w组下降(P<0.05)。(3)PASMCs H组JNK mRNA及蛋白表达明显高于N组(P<0.05),与H组相比,R1(10、50、100 mg/L)不同程度抑制了JNK mRNA及蛋白表达(P<0.05)。(4)PNS及SP600125处理组PASMCs均出现了明显的增殖受抑(P<0.05)。结论JNK信号通路参与了大鼠HHPH的形成。PNS可减轻这一过程,其机制可能与PNS抑制JNK的表达与激活有关。

益气温阳活血化痰方对低氧高二氧化碳性肺动脉高压的作用及其机制

目的:探讨益气温阳活血化痰方(YWHHF)经BMP-7/Smads通路抑制内皮-间质转分化(Endo MT),从而缓解低氧高二氧化碳性大鼠肺动脉压力的机制。方法:雄性健康清洁级SD大鼠50只,体重(180～220) g,随机分为5组(n=10):常氧组(N)、低氧高二氧化碳组(HH)、YWHHF高剂量组(YH)、中剂量组(YM)、低剂量组(YL)。N组在常氧环境下饲养,其余四组在低氧高二氧化碳(9%～11%O2、5%～6%CO2)环境下饲养4周,8 h/日,每周6d。YH、YM、YL组大鼠灌胃不同浓度的益气温阳活血化痰方(3 ml/kg),浓度分别为0.6、0.3和0.15 g/kg,HH组灌胃等体积生理盐水。4周后检测大鼠肺动脉平均压,肺灌流后取右心室游离壁及左心室加心室间隔测定右心室肥大指数。电镜观察肺超微结构变化,免疫荧光观察肺动脉结构变化,RT-PCR检测α-SMA、CD31、BMP-7、Smad1/5/8的mRNA水平,Western blot检测α-SMA、CD31、BMP-7、p-Smad1/5/8和Smad1/5/8的蛋白质水平。结果:与N组比,其余四组平均肺动脉压、右心室肥大指数均增大,镜下观察见肺有明显损伤,α-SMA mRNA及蛋白质表达升高,CD31、BMP-7、Smad1/5/8的mRNA水平降低,CD31、BMP-7、p-Smad1/5/8的蛋白质水平亦降低(P <0.05);与HH组比,中药组以上变化均有所减轻(P<0.05)。结论:YWHHF通过抑制Endo MT从而缓解肺动脉高压,其机制可能与促进BMP-7/Smads通路的表达有关。

川芎嗪对慢性低氧和高二氧化碳致大鼠肺动脉高压及TXA_2和PGI_2的影响

目的研究川芎嗪对慢性低O2 和高CO2 致大鼠肺动脉高压及TXA2 和PGI2 的影响。方法30只SD大鼠分为正常对照组 (A组 ) ,4wk低O2 高CO2 组 (B组 ) ,4wk低O2 高CO2+川芎嗪组(C组 ) ,观察川芎嗪对慢性低O2 高CO2 大鼠肺动脉平均压(mPAP)、颈动脉平均压(mCAP)、肺动脉显微和超微结构、血浆TXB2 及6_keto_PGF1α 浓度的影响。结果(1)B组mPAP明显高于A组(P<0.01) ,C组mPAP明显低于B组(P<0.01) ,三组间mCAP无明显差异(P>0.05) ;(2)光镜下 ,肺细小动脉管壁面积/管总面积比值(WA/TA)、肺细小动脉中膜平滑肌细胞核密度(SMC)B组较A组明显增高(P均<0.01) ,C组WA/TA、SMC较B组明显降低(P均<0.01) ,电镜下 ,B组肺细小动脉中膜平滑肌细胞增生 ,面积增大 ,染色质增多 ,外膜胶原纤维密集 ,C组大鼠肺细小动脉中膜平滑肌细胞和外膜胶原纤维增生较B组明显减轻 ;(3)B组TXB2 较A组明显增高(P<0.01) ,C组TXB2 较B组明显降低(P<0.01) ,6_keto_PGF1α 三组间无显著性差异(P>0.05) ,B组TXB2/6_keto_PGF1α 比值较A组明显增高(P<0.01) ,C组TXB2/6_keto_PGF1α 比值较B组明显降低(P<0.01)。结论川芎嗪抑制TXA2 合成可能为其抑制慢性低O2 和高CO2

羟胺对慢性低氧高二氧化碳大鼠肺动脉高压的影响

目的:探讨羟胺(HA)对慢性低氧(O2)高二氧化碳(CO2)大鼠肺动脉压的影响。方法:24只清洁级雄性SD大鼠随机分为3组(每组8只):正常对照组(NC)、低O2高CO2+生理盐水组(NS)和低O2高CO2+HA组(HA),NS组和HA组置于常压低O2高CO2舱内(舱内O2浓度维持在9%-11%,CO2浓度为5%-6%),每天8h,每周6d,共4周。入舱前,HA组腹腔注射HA溶液(12.5mg/kg)1mL,NS组腹腔注射1mL生理盐水。4周后,戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔注射麻醉,以右心导管测定大鼠肺动脉平均压(mPAP),分离右心室(RV)和左心室加室间隔(LV+S),计算右心室重量与左心室加室间隔重量的比值[RV/(LV+S)],以光学显微镜观测肺血管结构变化,用分光光度计测定血浆中硫化氢(H2S)的水平,用免疫组织化学方法及RT-PCR技术观察肺小动脉及支气管胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)的表达。结果:(1)与NC组相比:NS组和HA组的mPAP、RV/(LV+S)、肺细小动脉管壁面积/管总面积比值(WA/TA)和肺细小动脉中膜厚度(PAMT)明显升高(P<0.05);NS组的血浆中H2S水平、肺小动脉及支气管CSE的含量和CSEmRNA的表达显著降低(P<0.05)。(2)与NS组相比:HA组的mPAP、RV/(LV+S)、肺小动脉管壁面积/管总面积比值(WA/TA)和肺小动脉中膜厚度(PAMT)明显降低(P<0.05);血浆中H2S水平、肺小动脉及支气管CSE的含量和CSE mRNA的表达显著升高(P<0.05)。结论:羟胺通过提高血浆中H2S的水平、肺小动脉及支气管CSE的含量和CSE mRNA的表达和改善肺部血管重构,降低慢性低O2和高CO2所致的大鼠肺动脉高压。

腺苷对慢性低氧高二氧化碳大鼠肺动脉高压的影响

目的 观察腺苷对慢性低氧高二氧化碳大鼠血流动力学的影响及氨茶碱的拮抗作用。方法 从大鼠肺动脉内注入腺苷溶液。氨茶碱组大鼠预先注入氨茶碱进行处理。结果 2 5 μg·kg-1·min-1组 (T组 ) ,5 0 μg·kg-1·min-1组 (F组) ,10 0 μg·kg-1·min-1组 (H组 )用药后平均肺动脉压(mPAP)分别降低 18 5 %± 9 9% ,2 7 1%± 4 5 % ,37 2 %± 7 2 % ,明显低于用药前 (P均 <0 0 1) ,而NO水平则明显升高 (P <0 0 5 ,P <0 0 1,P <0 0 1)。T组 ,F组用药后mPAP/mSAP(平均体循环压 )明显低于用药前 (P <0 0 1,P<0 0 5 ) ,H组差异无显著性 (P >0 0 5 )。氨茶碱组用药后mPAP与F组比较差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 腺苷剂量依赖性降低慢性低氧高二氧化碳大鼠的肺动脉高压 ,其机制可能部分依赖于内皮细胞NO的释放。小剂量腺苷对肺循环具有良好选择性。氨茶碱能拮抗腺苷舒张肺血管的作用。

高二氧化碳对大鼠慢性常压低氧性肺动脉高压模型的影响

为研究高二氧化碳对大鼠慢性常压低氧性肺动脉高压模型的影响,建立大鼠缺氧性肺动脉高压模型及缺氧高二氧化碳肺动脉高压模型,测定大鼠肺动脉压及右心室压力和心脏重量,分析肺血管肌化程度:结果提示缺氧引起大鼠肺动脉压及右心室压力升高,右心室肥厚、肺血管肌化增强、红细胞压积增高。缺氧合并高二氧化碳引起肺血管肌化及右心室肥厚更明显,并出现左心室肥厚,但肺动脉压与缺氧组相似,而红细胞压积与正常对照无差异。研究说明,高二氧化碳加重大鼠缺氧引起的心脏肥厚和肺血管肌化程度。在肺动脉高压及肺心病发生发展中起重要作用。

氧化应激在大鼠慢性低氧高二氧化碳肺动脉高压形成中的作用

目的：观察低氧高二氧化碳对肺组织超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力及丙二醛(MDA)含量的影响,探讨氧化应激于低氧高二氧化碳肺动脉高压形成发展中的作用。方法：复制低氧高二氧化碳肺动脉高压大鼠模型。测定平均肺动脉压(mPAP)、右心室／(左心室+室间隔)[RV／(LV+S)]比。比色法测定肺组织SOD、CAT活力及MDA含量。电镜观察肺血管组织细胞超微结构。结果：与对照组相比,各低氧高二氧化碳组mPAP、RV／(LV+S)比明显升高(均P＜0.01),肺组织SOD、CAT活力均显著降低,而MDA含量明显升高(分别P＜0.05,P＜0.01)。电镜下,低氧高二氧化碳肺动脉高压大鼠肺中小肌型动脉内皮细胞及平滑肌细胞增殖、肥厚、肿胀,胶原纤维亦增生插入平滑肌细胞。结论：低氧高二氧化碳时大鼠肺组织氧化应激参与肺动脉高压的形成与发展。

益气温阳活血化痰方对大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉高压的干预作用

目的研究益气温阳活血化痰方(Yiqi Wenyang Huoxue Huatan Formula,YWHHF)对大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉高压的干预作用及机制研究。方法将50只SD大鼠随机分为5组:常氧对照(N)组、低氧高二氧化碳(HH)组、YWHHF高剂量(YH)组、YWHHF中剂量(YM)组、YWHHF低剂量(YL)组,每组10只。除N组置于仓外,其余各组均置于常压低氧高二氧化碳氧仓中,每天8h,每周6天,持续4周。YH、YM及YL组在进仓前0.5h分别予益气温阳活血化痰方0.6、0.3、0.15g/kg灌胃,其余各组大鼠分别用等量生理盐水灌胃,每天1次,连续灌胃4周。采用右心导管法测量大鼠的肺动脉平均压(mPAP)、颈动脉平均压(mCAP)及右心室肥大指数(RVHI);光镜、电镜观察大鼠肺动脉形态学变化,测定肺动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)和管腔面积/管总面积(LA/TA)的比值;采用RT-PCR、Western blot分别检测大鼠内质网应激相关蛋白及mRNA(GRP78、CHOP、JNK、Caspase-12)的表达;原位末端标记法(TUNEL)检测各组肺动脉平滑肌细胞的凋亡指数(AI)。结果与N组比较,HH组mPAP、RVHI和WA/TA值增大,LA/TA减小(均P<0.01),ERS相关蛋白及mRNA(GRP78、JNK、Caspase-12、CHOP)表达量均升高(P<0.01),肺动脉平滑肌细胞AI减少(P<0.01);与HH组比较,YH、YM、YL组mPAP、RVHI及WA/TA值减小,LA/TA增大(P<0.05,P<0.01),ERS相关蛋白及mRNA表达量降低(P<0.05,P<0.01),YH组及YM组肺动脉平滑肌细胞AI增加(P<0.05,P<0.01)RVHI;与YL组比较,YH、YM组上述各项指标均有明显改善(P<0.05,P<0.01)。结论YWHHF可通过抑制JNK、Caspase-12、CHOP降低大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉高压,综合考虑以中剂量(0.3g/kg)效果最适宜。

TGF-β1/Smads通路参与内皮–间质转分化在低氧高二氧化碳性肺动脉高压中的调控作用

该文主要探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads通路与低氧高二氧化碳性肺动脉高压及内皮–间质转分化(endothelial-mesenchymal transition,EndoMT)的关系。采用CD31和α-SMA免疫荧光双标法鉴定大鼠肺动脉内皮细胞;CCK-8法测细胞活力;Transwell小室法检测细胞迁移;逆转录-PCR和Western blot分别检测细胞CD31、α-SMA、TGF-β1、Smad2/3 mRNA和蛋白质的表达情况。结果显示,低氧高二氧化碳环境下,细胞α-SMA、TGF-β1和Smad2/3的m RNA水平上调,α-SMA、TGF-β1和p-Smad2/3蛋白质表达水平上调,而CD31 mRNA和蛋白质表达水平下调,细胞活力降低而迁移增多;使用rhTGF-β1可促进低氧高二氧化碳环境下的上述作用;而使用SB-431542则逆转低氧高二氧化碳环境下rhTGF-β1的作用。结果提示,低氧高二氧化碳能促进RPAECs发生EndoMT;抑制TGF-β1/Smads通路能抑制EndoMT,缓解低氧高二氧化碳性肺动脉高压。

川芎嗪对慢性低氧高二氧化碳大鼠肺动脉压力及管壁胶原的影响

目的：探讨川芎嗪对慢性低Ｏ２高ＣＯ２大鼠肺动脉压力及肺动脉管壁胶原的影响。方法：将ＳＤ大鼠３０只分为：对照组（Ａ），低Ｏ２高ＣＯ２组（Ｂ），低Ｏ２高ＣＯ２＋川等嗪组（Ｃ），低Ｏ２高ＣＯ２时间为４周。结果：（１）Ｂ组肺动脉平均压（ｍＰＡＰ）显著高于Ａ组（Ｐ＜０．０１），Ｃ组ｍＰＡＰ显著低于Ｂ组（Ｐ＜０．０１），３组间平均颈动脉压无显著差异（Ｐ＞０．０５）；（２）电镜显示Ｂ组肺动脉胶原纤维较Ａ组明显为多，Ｃ组较Ｂ组明显为少。免疫组化显示Ｂ组肺动脉Ⅰ型胶原含量（平均吸光度值ＬＤ）较Ａ组明显为高（Ｐ＜０．０１），Ｃ组较Ｂ组明显为低（Ｐ＜０．０１），Ⅲ型胶原ＬＤ各组间无明显差异（Ｐ＞０．０５）；（３）Ｂ组血浆内皮素浓度高于Ａ组，血清ＮＯ－２／ＮＯ－３低于Ａ组，Ｃ组血浆内皮素浓度低于Ｂ组，ＮＯ２－／ＮＯ３－高于Ｂ组，Ｐ均＜０．０１。结论：川芎嗪可预防慢性低Ｏ２高ＣＯ２性肺动脉高压的形成和肺动脉管壁胶原的沉积。

川芎嗪对慢性缺氧高二氧化碳大鼠肺动脉高压的影响

研究川芎嗪对大鼠慢性缺氧、慢性缺氧伴高二氧化碳所致肺动脉高压的作用及对心肌力学指标和动脉血氧分压的影响。结果表明，川芎嗪（ＴＭＰＺ）８０ｍｇ·ｋｇ－１能显著抑制由慢性缺氧、慢性缺氧伴高二氧化碳所致肺动脉升压反应及右心室收缩压，而对右心室ＲＶ±ｄＰ／ｄｔｍａｘ、动脉血氧分压都无明显影响。提示川芎嗪能降低慢性缺氧高二氧化碳大鼠的肺动脉压力，而不降低动脉血氧分压，且对右心功能具有保护作用，是一种降低慢性阻塞性肺部疾病肺动脉高压的理想药物。

慢性低氧高二氧化碳诱导肺动脉高压小鼠肺组织白细胞介素6的表达

目的:通过观察慢性低氧(O2)高二氧化碳(CO2)小鼠肺组织白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)的表达水平变化,探讨其在慢性低O2高CO2肺动脉高压形成过程中的作用。方法:16只SPF级雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法随机分为正常对照组和低氧高CO2组,每组8只。低氧高CO2组置于常压低O2高CO2舱内,O2浓度9%～10%,CO2浓度5%～6%,每天8 h,每周6 d,共4周。4周后,分离右心室和左心室加室间隔,计算右心肥大指数,肺组织行苏木精-伊红(HE)染色,光学显微镜观测肺血管结构变化,Image-Pro Plus 6.0图像分析系统测量管壁厚度占血管外径的百分比(WT%)和管壁面积占血管总面积的百分比(WA%)。免疫组织化学方法观测肺动脉中IL-6蛋白的表达,ELISA测定肺组织匀浆中IL-6蛋白浓度;RT-PCR检测肺组织中IL-6 mRNA表达。结果:低氧高CO2组与对照组相比:(1)右心肥大指数、WT%和WA%显著提高(P<0.01);(2)肺组织中IL-6的蛋白表达水平显著提高(P<0.01);(3)肺组织中IL-6 mRNA表达水平明显提高(P<0.05)。结论:在慢性低氧高二氧化碳环境中,小鼠的肺组织IL-6水平升高伴随肺血管壁肌层增厚和管腔狭窄,这可能与小鼠的肺动脉高压发生、发展有关。

激肽原酶对低氧高二氧化碳模型大鼠肺动脉高压的影响

目的观察激肽原酶对低氧(O2)高二氧化碳(CO2)模型大鼠肺动脉高压的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组),低O2高CO24周+0.9%氯化钠溶液(HH组),低O2高CO24周+激肽原酶组(HC组),每组10只。HH组与HC组饲养于氧舱中,舱内O2浓度为9%～11%,CO2为5%～6%,q8h,每周6d,共4周,其余时间饲养条件与NC组相同。自第4周开始,进氧舱前:HC组经尾静脉注射激肽原酶,每次剂量为1.6×10-2PNA·kg-1;HH组注射0.9%氯化钠溶液1mL;共6d。第4周末,经颈外静脉插管测量3组肺动脉压;免疫组化、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织eNOS和eNOSmRNA的表达。结果与NC组比较:HH和HC组的mPAP升高(P<0.01);HH组的右心室与左心室+室间隔质量之比[RV/(LV+S)]升高(P<0.01);HH和HC组的肺小动脉管壁面积/管腔总面积比值(WA/TA)、肺小动脉中膜厚度(PAMT)增高(P<0.01);肺小动脉及支气管eNOS表达降低;肺组织eNOSmRNA表达降低(P<0.01)。与HH组比较:HC组mPAP降低(P<0.01);RV/(LV+S)降低(P<0.01);WA/TA和PAMT降低(P<0.01);肺小动脉及支气管eNOS表达增高;肺组织eNOSmRNA表达增高(P<0.01)。结论激肽原酶上调肺组织eNOSmRNA表达,改善肺血管的重构,降低慢性低O2高CO2模型的大鼠肺动脉高压。

低氧诱导因子-1在低氧性肺动脉高压中的研究进展

低氧性肺动脉高压(HPH)是由缺氧引起的肺动脉压力进行性升高的肺血管疾病。低氧诱导因子-1(HIF-1)是维持细胞氧稳态的核心转录因子,可促进细胞糖代谢模式的转变、调节细胞膜表面离子通道活性、调节肺血管收缩及舒张因子活性等,在HPH的发生和发展中具有重要作用。现对HIF-1及其下游信号分子在HPH发生和发展中的作用机制进行综述,有助于为HPH的治疗提供新的理论依据和治疗靶点。

三七皂苷单体R1抑制低氧高二氧化碳诱导的肺动脉平滑肌细胞p38 MAPK信号通路的活化

目的:探讨三七皂苷单体R1(R1)减轻低氧高二氧化碳(CO2)性肺动脉收缩的作用及其与p38MAPK信号通路的关系。方法:原代培养雄性SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),取第2至5代对数生长期细胞至低氧高CO2(1%O2,6%CO2)条件下继续培养,并分别用8、40、100 mg/L R1孵育24 h后收集细胞,采用免疫印迹法测定p38 MAPK磷酸化蛋白表达,半定量RT-PCR检测p38 MAPK mRNA的表达。结果:Western blotting和RT-PCR结果显示,低氧高CO2组p-p38 MAPK蛋白和p38 MAPK mRNA表达明显高于对照组(N)组(P<0.01)。与低氧高CO2组相比,R1(8、40、100 mg/L)不同程度抑制了p-p38 MAPK蛋白和p38 MAPK mRNA的表达(P<0.01),并呈剂量依赖关系。结论:低氧高CO2诱导PASMCs p38 MAPK活化,三七皂苷单体R1可能通过抑制p38 MAPK通路减轻低氧高CO2性肺动脉收缩。

三七皂苷单体Rb_1在低氧高二氧化碳肺动脉收缩中的保护作用及机制

目的探讨三七皂苷单体Rb1在低氧高二氧化碳性肺动脉收缩(hypoxia hypercapnia-induced pulmonary vasoconstriction,HHPV)中的保护作用及机制。方法原代培养健康雄性SD大鼠肺动脉平滑肌细胞,取第2～5代细胞至低氧高二氧化碳(1%O2,6%CO2)条件下继续培养,并分别用8、40、100mg/LRb1孵育24h后收集细胞,分别采用Westernblot测定磷酸化细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白表达,半定量RT-PCR检测ERK1和ERK2mRNA表达。结果常氧组p-ERK蛋白及ERK1、ERK2mRNA表达均呈弱阳性,低氧高二氧化碳组p-ERK蛋白及ERK1、ERK2mRNA表达均明显增加(P<0.01);经不同浓度Rb1干预后,p-ERK蛋白及ERK1、ERK2mRNA表达均明显降低(P<0.05,P<0.01),并呈剂量依赖关系,以100mg/L效果最好。Rb1各浓度组p-ERK蛋白表达与ERK1和ERK2mRNA表达均呈显著正相关(r分别为0.500、0.977,P<0.01)。结论 ERK1/2信号通路可能介导大鼠HHPV;三七皂苷单体Rb1可能通过抑制ERK1/2通路减轻HHPV。

三七皂苷单体R_1对低氧高二氧化碳肺动脉平滑肌细胞ERK1/2表达的影响

目的:探讨三七皂苷单体R1减轻低氧高二氧化碳性肺动脉收缩(hypoxia hypercapnia-in-duced pulmonary vasoconstriction,HHPV)的作用及其与细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路的关系。方法:原代培养雄性SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),随机分为6组:常氧组(N组),低氧高二氧化碳组(H组),DMSO对照组(HD组),R1干预组(R8、R40、R100组)。采用免疫印迹法测定ERK1/2磷酸化蛋白表达,半定量逆转录-聚合酶链反应技术检测ERK1、ERK2基因表达水平。结果:p-ERK蛋白在N组表达弱,与H、HD组比较,R8、R40、R100组均不同程度下调,以R8组为著,差异有统计学意义(P<0.01);ERK1mRNA、ERK2mRNA在N组弱表达,与H、HD组比较,R8、R40、R100组表达均不同程度降低(P<0.01和P<0.05),以R8组为著。结论:ERK1/2信号通路可能介导大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉收缩;三七皂苷单体R1可能通过抑制ERK1/2通路减轻低氧高二氧化碳性肺动脉收缩。

MuRF1在低氧性肺动脉高压中的作用及机制

目的 探讨肌肉环指蛋白1(MuRF1)在低氧性肺动脉高压(HPH)中的作用及可能机制。方法 将MuRF1转基因敲除小鼠(MuRF1 KO)及其同窝野生型(WT)小鼠随机分到对照(nWT)组、对照+HPH(hWT)组、MuRF1 KO(nMuRF1-KO)组、MuRF1 KO+HPH(hMuRF1-KO)组。其中,hWT组和hMuRF1-KO组置于低压低氧人工实验舱内,nWT组和nMuRF1-KO组置于常压常氧SPF环境中,维持28 d。检测小鼠右心功能及右心室重塑水平、远端肺小动脉血管重塑水平、肺泡灌洗液炎症因子表达、MuRF1和大电导钙激活钾通道β1亚基(BK-β1)蛋白表达。结果 与nWT组相比,hWT组右室内径(RVID)显著降低(P<0.01),右室前壁厚度(RVAW)、右心室收缩压(RVSP)、右心室肥厚指数(RVHI)、胶原容积分数(CVF)显著增加(P<0.01),远端肺动脉壁厚度比(WT%)、肺动脉壁面积比(WA%)、肺动脉肌化水平、相对肺重量显著增加(P<0.01),肺泡灌洗液中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α显著增加(P<0.01),MuRF1表达显著增加(P<0.05),BK-β1表达降低(P<0.05)。与hWT组相比,hMuRF1-KO组RVID显著增加(P<0.05),RVAW、RVSP、RVHI、CVF显著降低(P<0.05),WT%、WA%、肺动脉肌化水平、相对肺重量显著降低(P<0.05,P<0.01),肺泡灌洗液中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α也显著减少(P<0.05,P<0.01),BK-β1表达显著增加(P<0.05)。结论 敲除MuRF1可改善HPH小鼠右心功能障碍和右室重塑,减轻肺血管重塑和肺血管炎性环境,其机制可能与敲除MuRF1抑制BK-β1降解有关。