血小板低渗休克反应检测方法的建立及应用

目的通过建立合适的低渗休克反应（HSR）检测方法，监测单采血小板在保存期内的HSR变化，以监控和评估单采血小板在保存期内的功能和质量状况。方法利用血液凝集仪，分别检测血小板与等渗磷酸盐缓冲液混合后的透光率变化值和血小板与去离子水混合后的透光率变化值，从而计算出HSR值。检测20份新鲜采集的单采血小板及10份在保存期的第1，3，5和7d的血小板HSR变化。结果新鲜采集的单采血小板HSR正常参考值范围为58％～93％（80．35％±10．39％，n=20）；单采血小板在保存期的第1，3，5和7d的HSR分别为：75．85％±11．10％，74．00％±9．04％，71．39％±6．16％和68．85％±7．89％；各天之间比较均无显著性差异（P〉0．1）。结论利用血液凝集仪检测HSR是一种合适的方法，具有简便、准确和重复性好的特点；单采血小板保存至7d仍具有较好的抗低渗休克的能力。

2种血小板低渗休克反应测定方法的比较研究

目的建立生化分析仪测定血小板低渗休克反应(HSR)的方法,并与血小板聚集仪法进行比较。方法分析参数设置:试验模式为实时吸光度监测,测定温度37℃,测定波长610nm,样品与试剂比例2∶1,延迟时间5s,监测时间15min。制备含不同比例球形血小板的富含血小板血浆(PRP),对分析方法进行敏感性、准确性、重复性评价。结果生化分析仪法和血小板聚集仪法检测HSR的敏感度均为20%;对含高、中、低比例球形血小板样品重复5次的变异系数(CV)分别为9.4%、4.6%、3.8%和11.0%、4.8%、4.2%;HSR测定值与球形血小板的含量密切相关,其相关系数(r)分别为0.9668和0.9504。结论应用生化分析仪测定HSR,其检测敏感性与血小板聚集仪法相同,重复性、准确性均可达到方法学要求,可用于HSR的自动化检测。

酶标仪与分光光度计测定血小板抗低渗休克反应的对比分析

血小板抗低渗休克反应（hypotonic shock response，HSR）是检测血小板在低渗环境中发生肿胀后又可恢复其原有形状的能力。HSR是反映血小板功能的重要指标，据报道HSR与血小板在体内的恢复率密切相关。国内尚未有标准化的检测血小板HSR的方法，报道较多的是用分光光度计测定HSR。

酶标仪与血小板聚集仪测定血小板抗低渗休克反应的比较分析

目的通过与血小板聚集仪法进行比较,建立用酶标仪测定血小板低渗休克反应(HSR)的方法。方法分别用酶标仪和血小板聚集仪对含不同比例新鲜血小板的富血小板血浆进行HSR检测,并对这两种方法的灵敏度、准确度和重复性进行比较分析。结果酶标仪法和血小板聚集仪法测得HSR分别为(65±24)%和(69±20)%,灵敏度均为20%;采用酶标仪法和血小板聚集仪法对分别含75%、50%、25%球形血小板样品重复测定10次,变异系数(CV)分别为10.3%、5.2%、3.5%和11.0%、6.2%、4.1%;HSR测定值准确度与球形血小板百分比相关,其相关系数r分别为0.959 8和0.968 4。结论酶标仪法与血小板聚集仪法对HSR的测定无明显差异,酶标仪可用于HSR的标准化检测。

采用HSR方法测定手工汇集浓缩血小板在不同保存温度下的保存效果

目的评估汇集白膜层方法制备的血小板保养液悬浮血小板在不同保存温度、不同保存期间的抗低渗休克(HSR)能力。方法用汇集白膜层(BC)方法制备的、用血小板保养液(第3代改良型血小板添加液,PAS-ⅢM)和部分血浆悬浮的汇集血小板(PAS-ⅢM汇集BC-PC),分别在22℃和4℃条件下延时保存21d(试验组),同一样本分别用蒸馏水和血浆按1∶1.5比例稀释,采用分光光度法测定不同贮存条件、不同贮存时段的PAS-ⅢM汇集BC-PC透光率。通过公式(TMAX-T10)/(TMAX-TP)×100%计算HSR恢复率。测定结果与血浆悬浮单采血小板(对照组)的HSR恢复率相比对。结果试验组和对照组第1天的测定结果没有统计学差异;试验组两种贮存条件的PAS-ⅢM汇集BC-PC每天的HSR之间没有统计学差异,但均低于对照组对应的3—7d、高于对照组对应的10—21d的测定结果;随着贮存时间的延长,试验组和对照组的HSR逐渐减弱,在1—10d内试验组和对照组的HSR恢复率在40%—70%。结论利用分光光度计测定HSR是一种简便准确的方法,PAS-ⅢM汇集BC-PC在两种贮存条件下保存10d仍具有较好的抗低渗能力。

TEG技术在血小板保存过程中功能评价的应用研究

本研究旨在通过血栓弹力图(thrombelastography,TEG)技术探讨血小板保存过程中功能的变化。随机选择各项指标均符合国家标准的单供者机采血小板12个单位并在(22±2)℃条件下振荡保存。分别在保存1、2、3、4、5天检测血栓弹力图参数,包括反应时间(R)、凝血时间(K)、α角(ANG)和最大振幅(MA),同时检测血小板计数、平均血小板体积、低渗休克反应(HSR)水平、CD62p阳性率及凝血酶激活CD62p再表达率的变化,综合评价血小板保存过程中体外功能的变化情况。结果显示:平均血小板体积随保存时间延长而轻度增大,但无统计学差异(p>0.05);血小板膜表面CD62p表达率随保存时间延长而显著升高(p<0.01);凝血酶激活后CD62p再表达率随保存时间的延长而显著下降(p<0.01);血小板低渗休克反应水平在1-5天无明显变化(p>0.05);R值随保存时间延长而明显延长(p<0.01),K值无明显变化(p>0.05),α角虽呈轻度下降趋势,但无显著差异(p>0.05);MA值在保存1-4天无显著变化,保存5天时仅有轻度下降(p<0.05)。结论:虽然血小板随保存时间延长激活率明显升高,但反映血小板综合凝血功能的最大振幅(MA值)和HSR水平在整个保存期内并无显著变化,说明保存期末的血小板仍然具有良好的止血功能;血栓弹力图参数MA值可以作为一项重要指标用于血小板保存过程中的功能评价。

白膜法手工富集血小板与单供者机采血小板质量对比研究

本研究旨在对比白膜法手工富集血小板与单供者机采血小板的质量差异。将15袋(2单位/袋,400ml全血制备)白膜法手工富集血小板和15单位单供者机采血小板在(22±2)℃条件下振荡保存。在制备后1小时检测血小板浓度、体积、白细胞残留量、红细胞残留量;分别在血小板保存的0、1、2、3、4、5天检测平均血小板体积、pH值、乳酸浓度、血小板膜表面CD62p表达率、凝血酶激活后CD62p再表达率、血小板低渗休克反应。结果显示:二组的血小板得率、红细胞残留量、白细胞残留量都分别达到相应的国家质量标准,但在达到相同血小板计数的情况下,白膜法手工富集血小板组的红细胞残留量、白细胞残留量明显高于单供者机采血小板组(p<0.01);二组的乳酸、血小板膜表面CD62p表达率均随保存时间延长而升高;二组间比较,白膜法手工富集血小板组CD62p表达率在保存0-5天均高于单供者机采血小板组(p<0.01)。二组的pH值、凝血酶激活后CD62p再表达率均随保存时间的延长而下降;二组间比较,2-5天白膜法组pH值明显低于单供者机采血小板组(p<0.01),0-5天白膜法组CD62p再表达率明显低于单供者机采血小板组(p<0.01)。单供者机采血小板组血小板低渗休克反应水平在0-5天无明显变化,而白膜法手工富集血小板组血小板低渗休克反应水平随保存时间的延长而下降,保存1-5天时均明显低于单供者机采血小板组(p<0.01)。结论:白膜法手工富集血小板质量低于单供者机采血小板质量,其制备工艺有待改进和优化,以降低红细胞、白细胞残留量和活化血小板水平,提高其血小板质量。

机采血小板常温保存过程中代谢及体外功能变化的研究

目的研究机采血小板常温保存过程中代谢及体外功能的变化规律。方法通过对15U保存0～9d机采血小板的血气指标、葡萄糖、乳酸、乳酸脱氢酶、血小板膜表面CD62p表达率、凝血酶激活后CD62p再表达水平、血小板低渗休克反应进行系统监测,分析机采血小板体外保存过程中代谢指标与体外功能的关系。结果血小板在体外保存9d的过程中,乳酸与H+逐渐堆积,pH值随之下降;血小板低渗休克反应在7d时开始明显下降;CD62p表达率随保存天数增加而逐渐增高,凝血酶激活后CD62p再表达率逐步下降;血气、葡萄糖、乳酸等代谢指标与血小板低渗休克反应、CD62p的表达率及再表达率具有显著相关性。结论对代谢指标的监测可以间接反映血小板体外功能的变化,从而对血小板保存质量作出系统评价。

机采血小板常温保存过程中代谢及体外功能变化的研究

目的:研究机采血小板常温保存过程中代谢及体外功能的变化规律。方法:通过对15U保存0～9d机采血小板的血气指标、葡萄糖、乳酸、乳酸脱氢酶、血小板膜表面CD62p表达率、凝血酶激活后CD62p再表达水平、血小板低渗休克反应进行系统监测,分析机采血小板体外保存过程中代谢指标与体外功能的关系。结果:血小板在体外保存9d的过程中,乳酸与H+逐渐堆积,pH值随之下降;血小板低渗休克反应在6d时开始明显下降;CD62p表达率随保存天数增加而逐渐增高,凝血酶激活后CD62p再表达率逐步下降,血气、葡萄糖、乳酸等代谢指标与血小板低渗休克反应、CD62p的表达率及再表达率具有显著相关性。结论:对代谢指标的监测可以间接反映血小板体外功能的变化,从而对血小板保存质量作出系统评价。

单采血小板存储时间及温度对血小板体外功能及炎性细胞因子的影响

目的分析不同温度以及不同存储时间单采血小板对体外功能及炎性因子的影响。方法选择2018年7月-2019年7月山东省血液中心自愿捐献血小板的献血员100人,采集制备100袋单采血小板,分别在储存1、3、5、7 d时检测聚集功能及活化功能P-选择素(CD62p)、低渗休克反应(HSR)指标水平,以及白细胞介素-8(IL-8)、γ干扰素(IFN-γ)、调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子(RANTES)、血管内皮生长因子(VEGF)水平,统计并比较各项指标变化。结果与4℃储存条件比较,22℃下储存相同时间时(1、3、5、7 d)聚集强度、HSR水平明显降低(P<0.05),CD62p阳性表达率明显升高(P<0.05)。同一储存温度下,与第1天比较,第3、5、7天血小板计数、聚集强度、HSR水平明显降低(P<0.05),且随时间的延长逐渐降低;CD62p阳性表达率明显升高(P<0.05),且随时间的延长逐渐升高。与4℃储存条件比较,22℃下储存相同时间时IL-8、IFN-γ、RANTES、VEGF水平明显升高(P<0.05)。同一储存温度下,与第1天比较,第3、5、7天IL-8、IFN-γ、RANTES、VEGF水平明显升高(P<0.05),且随时间的延长逐渐升高。结论4℃保存单采血小板代谢功能更慢,且能一定程度减少细胞因子释放速度,进一步降低输注风险。