低渗液对AQP4蛋白在体外培养星形胶质细胞中的表达变化

目的 研究低渗培养液对星形胶质细胞AQP4蛋白的表达变化 ,并探讨其在脑水肿中的作用机制。方法 取出生后 2d的Wistar大鼠大脑皮层进行星形胶质细胞纯培养 ,分别予不同程度的低渗培养液作用于星形胶质细胞 ,建立星形胶质细胞对低渗压反应的实验模型。应用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法测定细胞活性 ,采用免疫细胞化学法检测AQP4蛋白的表达 ,通过光镜观察低渗液对星形胶质细胞形态学影响。结果 体外培养的星形胶质细胞在不同程度的低渗培养液作用 3、6、12、2 4h后 ,各时相点的AQP4蛋白表达水平均明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,而且与作用时间和低渗压的程度密切相关 ;在光镜下 ,星形胶质细胞出现典型的细胞水肿形态学改变 ,其活性明显下降。结论 低渗液可导致星形胶质细胞水肿 ,AQP4蛋白表达增强 ,而且AQP4表达上调与低渗压的程度和作用时间有关 ,抑制AQP4的表达可能为脑水肿的治疗提供新的理论依据。

低渗液对星形胶质细胞水通道蛋白-9表达的影响

目的探讨体外培养星形胶质细胞在低渗状态下水通道蛋白-9(aquaporin-9,AQP9)表达的变化特点及其所起的作用。方法取生后2d的Wistar大鼠大脑皮层进行星形胶质细胞纯培养,随机分为对照组和低渗组(又分268、254、240mmol/L三个组),每组分为3、6、12、24h共4个时间点,每个时间点细胞孔数为6。对照组予正常培养液常规培养,低渗组分别予不同渗透压的低渗液作用于细胞,建立星形胶质细胞对低渗液反应的实验模型。通过采用原位杂交检测AQP9mRNA的表达,乳酸脱氢酶活性的测定及图像分析等方法研究星形胶质细胞对低渗液的反应及AQP9的表达变化。结果对照组在正常渗透压培养液中培养3、6、12、24h后,AQP9表达差异无统计学意义(P>0.05)。在相同的作用时间条件下,各低渗组细胞AQP9mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。尤以作用12h后明显,而且与作用时间和低渗液的程度密切相关;同时细胞存活能力明显下降,其严重程度与低渗液的作用时间和渗透压有关。结论低渗液可导致细胞的生存能力下降、AQP9mRNA表达增强,提示星形胶质细胞AQP9的表达与渗透压可能直接相关,AQP9可能参与脑水肿的形成。

低渗状态下星形胶质细胞AQP4mRNA的表达和Ca^(2+)浓度的关系

目的探讨低渗培养液对星形胶质细胞AQP4mRNA的表达变化和Ca2+浓度的影响及其之间的关系。方法取生后2d的Wistar大鼠大脑皮层进行星形胶质细胞纯培养,分别予不同程度的低渗培养液作用于细胞,建立细胞对低渗液反应的实验模型。应用台盼蓝测定细胞存活率,采用原位杂交检测AQP4mRNA的表达,Fura-2/AM荧光法测定细胞内Ca2+浓度。结果体外培养的星形胶质细胞在低渗培养液分别作用3h、6h、12h、24h后,低渗组的细胞存活率较对照组明显减少,各时间点AQP4mRNA表达水平与细胞内Ca2+含量均明显高于对照组,与对照组相比差异有显著意义(P<0.05),而且与作用时间以及低渗液的严重程度密切相关;AQP4mRNA的表达强度与Ca2+浓度的变化呈明显正相关。结论低渗液可引起星形胶质细胞AQP4mRNA的表达上调,导致细胞内Ca2+超载,AQP4和Ca2+可能共同参与脑水肿的形成,提示AQP4可能是脑水肿的重要致病因素之一。