大鼠坐骨神经-20℃川芎嗪玻璃化液保存对异体移植后神经再生的影响

目的:探讨不同时间段-20℃川芎嗪玻璃化液保存大鼠异体坐骨神经对异体移植后神经再生的影响.方法:-20℃川芎嗪玻璃化液(200mg/L川芎嗪)(A组)保存成年SD雄性大鼠坐骨神经,时间分别为1,2wk,然后选择成年Wistar雄性大鼠坐骨神经缺损模型作为受体,神经段复温后移植给受体,术后进行大体观察以及移植神经的大体、电生理、荧光逆行示踪、运动终板等检查;并分别与-20℃玻璃化液(不含川芎嗪)(B组)和-196℃川芎嗪玻璃化液(200mg/L川芎嗪)(C组)保存的坐骨神经进行比较.结果:保存1wk时-20℃川芎嗪玻璃化液组与-196℃川芎嗪玻璃化液组再生效果无差异,与-20℃玻璃化液组的差异有显著性(P<0.01);保存2wk以后3组中以-196℃川芎嗪玻璃化液组再生效果最好,-20℃川芎嗪玻璃化液组其次,-20℃玻璃化液组最差.结论:玻璃化保存液中加入川芎嗪可提高大鼠同种异体神经的保存温度值,-20℃时可保存大鼠周围神经1wk.

冻融胚胎移植98周期结果分析

目的分析冻融胚胎移植后结局,探索提高冻融胚胎移植妊娠率的方法。方法采用慢速冷冻-快速融冻方法行胚胎移植,子宫内膜的准备分自然排卵周期及激素替代周期,移植前融胚过程分为辅助孵化组和未辅助孵化组,对移植融胚的妊娠结局进行分析。结果冻融胚胎移植98周期,妊娠率24.5%。自然周期与激素替代周期比较妊娠率无统计学意义,流产率亦无统计学意义。辅助孵化组与对照组相比妊娠率有差异,流产率相比无显著差异。结论自然周期与激素替代周期作为冻融胚胎移植前子宫内膜的准备可获得相近的妊娠率。应用激光辅助孵化技术可提高冻融胚胎移植妊娠率。

不同冷冻载体对小鼠MⅡ期卵母细胞玻璃化冻、融技术影响

目的比较不同冷冻方法对小鼠成熟卵母细胞的冻存率和冻后发育潜能的影响,试图建立玻璃化冷冻技术平台,为人类卵母细胞玻璃化冷冻提供理论与技术参考。方法以昆明品系小鼠为实验材料、以玻璃化冷冻技术为基本方法冻存小鼠成熟卵母细胞。实验分为新鲜周期对照组和玻璃化冷冻组,玻璃化冷冻组又再分为开放式拉长麦管(OPS)组、自制麦管组和冷冻叶片(cryoleaf)组,比较其存活率、受精率、卵裂率和囊胚形成率。结果新鲜周期对照组和玻璃化冷冻组之间受精率差异无显著性,卵裂率差异亦无显著性(P>0.05),但是囊胚形成率之间差异有显著性(P<0.05);OPS组与自制麦管组之间存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率之间差异均无显著性(P>0.05);OPS组与cryoleaf组比较存活率之间差异有显著性(P<0.05),受精率、卵裂率、囊胚形成率之间差异均无显著性(P>0.05);自制麦管组与cryoleaf组之间存活率之间差异有显著性(P<0.05),而受精率、卵裂率、囊胚形成率之间差异无显著性(P>0.05)。结论OPS法和cryoleaf法均可以用于冷冻昆明小鼠卵母细胞,但cryoleaf法更安全可靠。

组织工程皮肤构建中胎儿皮肤标本玻璃化冻存的实验

目的:建立一种用于细胞培养的皮肤标本新的保存方法。方法:实验于2004-05-01/2-31在第四军医大学西京医院烧伤外科实验室进行。①分别取流产胎儿头部及躯干部全层皮片(家属知情同意),按照标本保存方法不同分为常规组(4℃保存2h)、冻存1组(-196℃液氮保存1周组)、冻存2组(-196℃液氮保存1个月组)和冻存3组(-196℃液氮保存6个月组)。采用抗冻液4℃下预处理20min后直接快速置于-196℃液氮中的玻璃化冻存方法进行冻存。②分别进行胎儿角质形成细胞、成纤维细胞和毛乳头细胞的原代培养,进行细胞形态学观察,并采用锥虫蓝染色法、四唑盐比色法和克隆形成实验观察培养的第2代角质形成细胞、成纤维细胞和毛乳头细胞的活力。结果:①与常规组同种细胞相比,冻存1组、冻存2组和冻存3组的胎儿角质形成细胞、成纤维细胞和毛乳头细胞的形态学特点基本相同。②与常规组相比,冻存1组、冻存2组和冻存3组角质形成细胞、成纤维细胞和毛乳头细胞活细胞率、细胞存活率及克隆形成率差异均无显著性意义(P>0.05)。结论:利用液氮玻璃化保存用于细胞培养的皮肤标本不会影响细胞活力,是保持组织活性的一种有价值的组织标本保存方法,对组织工程皮肤的建立,乃至构建组织细胞库有着重要意义。

人胚胎视网膜短、中、长期保存的实验研究

目的观察全层人胚胎视网膜的短期、中期及长期保存后的活性和结构。方法12-24周全层人胚胎视网膜22例分为88片，明胶包被后分别行Ames液、中期保存液（DX角膜保存液）、-80℃、程序深低温4种方法保存不同时间后，锥虫蓝染色观察视网膜神经上皮层活细胞百分率，光学显微镜和透射电子显微镜观察视网膜组织结构。结果人胚胎视网膜在新鲜取材时活细胞占（94．79±2．85）％；短期保存在Ames液4h内活细胞百分率大于80必，中期保存在DX液1～2d时活细胞百分率大于77％，均与新鲜取材时活细胞百分率无显著差异。-80℃保存7d时活细胞百分率为（65．83±5．06）％，1个月时降至（57．54±16．18）％；深低温长期保存1个月时活细胞百分率为（69．46±9．31）％。全层人胚胎视网膜保存在Ames液2h时光学显微镜和电子显微镜检查均未见明显异常；在DX液中2d、-80℃7d和深低温1个月时光学显微镜检查见其层次清楚，但细胞间隙加大，组织排列疏松。结论全层人胚胎视网膜在Ames液和DX角膜保存液中可于一定时间内保持较好的活性和组织结构。

玻璃化冷冻对卵裂期胚胎发育潜能的影响

目的探讨玻璃化冷冻对卵裂期胚胎发育潜能的影响。方法对40例经徐州市妇幼保健院生殖中心实施玻璃化冷冻卵裂期胚胎(玻璃化冷冻组)和41例程序冷冻卵裂期胚胎(对照组)行复苏移植术作为对照,比较两组的复苏胚胎存活率、种植率、临床妊娠率。结果在玻璃化冷冻组的40例中,共复苏胚胎81个,存活胚胎77个,复苏率95.1%,共移植79个胚胎,种植率为30.4%,临床妊娠率为50%;对照组共41例,解冻135个胚胎,复苏后存活87个胚胎,存活率64.4%,种植率为17.9%,临床妊娠率为26.8%。玻璃化冷冻组的胚胎存活率、种植率、妊娠率均显著高于对照组(P<0.05)。结论玻璃化冷冻和程序冷冻均适于人卵裂期胚胎的冷冻,但玻璃化冷冻法更好的保存了胚胎的发育潜能,能够获得更好的冷冻效率。