蜜蜂生殖细胞的超低温冷冻方法

蜜蜂是重要的社会性昆虫,占授粉昆虫总数的80%,具有巨大的生态和经济价值,且是实现农业绿色发展的重要一环。我国拥有丰富的蜜蜂遗传资源,然而,在过去十年里全球范围内蜜蜂种群受到巨大威胁,包括来自自然环境、农药、寄生虫等因素[1],蜜蜂珍惜种质资源的保护和开发利用显得尤为重要。超低温冷冻蜜蜂生殖细胞技术不受地域、时间和蜂王寿命的限制,为蜜蜂种质资源的保护开辟了新途径。

深低温冷冻冻存自体造血干细胞复苏后输注在自体移植中相关护理的研究进展

自体造血干细胞移植(ASCT)指的是在患者体内,通过采用合适的手段将其身体内的造血干细胞进行采集,医生通过合适的方式对患者进行放化疗。在完成化疗之后,将采集的干细胞输入到患者身体。整个过程的目的在于使患者的免疫功能得到恢复,并且使其造血功能得到正常。当前在整个临床治疗过程中,使用的造血干细胞均为外周血干细胞,也是当前重要的治疗手段之一,除了能够应用到实体肿瘤治疗过程中,还能够应用到血液系统当中,以下出现的造血干细胞均指外周血干细胞,采集出来的自体外周造血干细胞通过深低温冷冻方式保存,深低温冷冻保存是指自身造血干细胞采集后冻存在-80℃或-196℃液氮中,通过深低温完全抑制生物细胞的能量代谢,使移植器官处于休眠状态而得以长期保存的方法。移植时需要快速复苏,复苏后细胞可恢复代谢活动,从而发挥其生物学功能,及时回输给患者,回输方式为静脉输血。移植的预处理阶段和耐受情况是我们护理人员无法干预的,而且对于移植病人的预处理药物的应用没有太多的可变性和选择性,但是干细胞的复苏和输入环节是可变的,需要干预的,而且是自体外周血干细胞移植很重要的一部分,对于移植病人来讲,干细胞就是生命的种子,所以如何保证种子的顺利植入成长,确保安全,就尤为重要。就自体造血干细胞的复苏和输注速度的相关技术综述如下。

长期超低温冷冻保存对鞍带石斑鱼精子超微结构及酶活性的影响

为探究长期超低温冷冻保存中鞍带石斑鱼精子质膜、活力、超微结构及酶活性的变化,阐明影响鞍带石斑鱼精子冷冻保存质量的相关机制。实验采集2022年鞍带石斑鱼鲜精及储存时间分别为23、49和61个月的冷冻保存精液,用伊红-苯胺黑染色方法检测精子质膜完整性;用计算机辅助精子分析仪(CASA)检测精子运动参数;测量精浆和精子中琥珀酸脱氢酶(SDH)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和肌酸激酶(CK)共6种酶活性的变化及三磷酸腺苷(ATP)浓度变化;用扫描电镜和透射电镜观察鲜精和冻精超微结构。结果显示,伊红-苯胺黑染色后,鲜精质膜完整性最高,为83.43%±2.73%,经过超低温冷冻后,精子质膜完整性显著降低,且随着冷冻保存时间的延长而逐渐降低。CASA结果显示,鲜精活力最高,为90.47%±3.34%,经过超低温冷冻后精子活力显著降低,但长期保存23~61个月的精子活力无显著差异,精子活力保持在(63.95%±3.66%)~(68.58%±2.73%),具有稳定的活力,且鲜精与冻精之间精子平均直线运动速度(VSL)、平均曲线运动速度(VCL)和平均路径速度(VAP)均没有显著差异。精子超微结构显示,鲜精形态结构正常、线粒体排列结构规则、形态大小正常。经过超低温冷冻保存后,精子形态结构损伤明显,表现为精子头部质膜破损、细胞质外漏、细胞核膜破损、尾部鞭毛断裂或脱落等。鞍带石斑鱼精浆和精子超低温冷冻前后6种酶活性的变化及ATP含量结果显示,经过超低温冷冻后,精子内SOD、GSH-Px和CAT及ATP含量均显著降低。精浆中酶活性升高,除GR和CAT外,其余酶活性均差异显著。研究表明,长期超低温冷冻对鞍带石斑鱼精浆和精子酶活性、精子活力及精子超微结构均具有较显著的影响。本研究结果为鱼类精子冷冻损伤机理研究积累了丰富的数据,为鱼类精子长期冷冻保存提供了技术参考和评价指标。

‘温185’脱青皮鲜核桃低温冷冻保鲜效果研究

旨在为鲜核桃保鲜贮藏提供理论依据,以‘温185’为测试品种,经脱青皮后在-10℃下低温冷冻贮藏180 d,分析其在贮藏期间的品质变化。结果表明:在贮藏期内,‘温185’脱青皮鲜核桃坚果霉变率为0,种皮颜色由暗黄色变为接近暗褐色,种皮较易分离,种仁为白色,香气由浓郁清香变为淡青香;种仁和种皮色差值逐渐增大;含水率和含油率整体呈下降趋势;种仁风味物质的变化分为3个阶段,即0~60 d、90 d、120~180 d;核桃油脂肪酸组成无明显变化,但其相对含量发生不同程度的变化,酸值和过氧化值逐渐增大,但均未超出国标要求。在冷冻贮藏期(0~180 d),‘温185’坚果品质变化较小,低温冷冻贮藏效果良好。

等离子臭氧法与低温冷冻臭氧法档案消毒效能比较研究

档案霉变不仅严重影响档案寿命和利用价值,还危害档案管理人员的身体健康,档案消毒环节臭氧泄露量和残余量也不可忽视。文章通过实验法对等离子臭氧法和低温冷冻臭氧法两类当前主流的档案复合消毒技术的特点进行比较分析,结果发现两类消毒法的臭氧泄露量和残余量均在标准限值范围内,对人体健康无害;在除霉效果方面,等离子臭氧法表现出霉菌消杀彻底、过程耗时短、参数控制简便等较多优势,适用于大批量的纸质档案消毒灭菌任务,而低温冷冻臭氧法基本无效。

猪精子超低温冷冻损伤机制及保护策略

猪精液的冷冻保存不仅可实现优秀种公猪精液的跨时间、空间的调配,而且在优秀地方遗传资源的保护、遗传数据的收集等方面具有重要意义。然而,由于猪精子膜低胆固醇-磷脂比和高不饱和脂肪酸含量等特性,使其极易受到冷冻损伤,且冷冻过程中的影响因素和原理尚不完全明确,导致目前猪冷冻精液技术仍不成熟,在实际生产中的应用效果不理想。在精子的冷冻过程中,冷冻程序、冷冻保护液与解冻液的组成等都对猪冷冻精液的质量有重要影响。

超低温冷冻引发卵母细胞氧化应激及抗氧化剂的应用

卵母细胞超低温冷冻保存在人工辅助生殖和畜牧业上已有广泛应用。然而,超低温冷冻保存造成卵母细胞活性氧大量累积,引发一系列氧化应激,最终导致卵母细胞体内外发育潜力下降。卵母细胞内源的抗氧化酶无法彻底对抗氧化应激,因此在冷冻过程中常添加外源抗氧化剂来减少氧化损伤。文章着重分析了冷冻诱导卵母细胞产生的各种氧化应激、抗氧化剂对抗氧化损伤的效果及其作用机制,为提高卵母细胞冷冻保存效率提供参考。

低温和超低温冷冻对糯米淀粉凝胶老化特性的影响

本文研究了糯米淀粉凝胶经过低温(-20、-40℃)和超低温(-195℃)冷冻后在4℃下冷藏过程中对糯米淀粉凝胶老化特性的影响。结果表明,低温和超低温冷冻的糯米淀粉凝胶在冷藏过程中都形成了海绵结构,且超低温冷冻的糯米淀粉凝胶的孔洞小且均匀,形成致密结构;随着冷藏时间的延长,糯米淀粉凝胶的结晶度增大,经过-20、-40、-195℃冷冻后冷藏21 d的淀粉凝胶结晶度分别为6.05%、5.37%和3.83%;糯米淀粉凝胶的老化焓值和硬度值均随着冷藏时间的延长而增大,但随着冷冻温度的降低,糯米淀粉凝胶的老化焓值和硬度值显著降低。由此显示糯米淀粉凝胶经过低温和超低温冷冻处理后,在4℃下冷藏过程中能够有效地抑制淀粉凝胶的老化,并且超低温冷冻处理能显著(p<0.05)的抑制糯米淀粉凝胶的老化。

某化工企业低温冷冻站节能改造研究

针对某化工企业低温冷冻站,分析现有运行数据,结果表明其运行能效偏低,存在较大节能潜力。通过采用以系统运行能效最优为控制目标的节能改造方案,其包括新增匹配生产工艺冷量及供水温度需求的冷水机组、冷冻水泵、冷却水泵和节能控制系统,并对冷水机组进行用户工况的性能测试确保其技术性能符合用户要求。依据改造后系统节能评估结果和实际运行数据,夏季系统运行能效可提升40%以上,冬季可提升1倍,为同类低温冷冻站的节能改造提供参考。

深低温冷冻家兔皮质骨生物力学及骨形态计量改变的实验研究

目的探讨深低温冷冻法对家兔皮质骨的生物力学变化及骨形态计量的影响。方法将150只家兔随机分为新鲜标本组(对照组)30只,深低温冷冻4周、8周、12周、16周各30只,取左股骨皮质骨测定极限弯曲强度(BS)、极限压缩强度(CS)。取右胫骨进行骨形态计量分析。结果深低温冷冻后家兔皮质骨的生物力学(极限弯曲强度和极限压缩强度)及骨形态计量分析(骨小梁体积、宽度以及平均骨小梁间距)均无明显改变。结论深低温冷冻骨的生物力学稳定,骨形态计量无明显改变,且随冷冻时间延长亦无改变,为深低温冷冻骨库的建立提供了有力的实验依据。

基于GIS的低温冷冻灾害风险区划研究——以安徽省为例

以安徽省为例,基于自然灾害风险形成原理,利用气象、基础地理信息、农业和社会经济等方面数据,从致灾因子危险性、孕灾环境敏感性、承灾体易损性以及抗灾能力等4个方面来综合评估安徽省低温冷冻灾害风险程度的地区差异,最终建立综合的灾害风险指数,并将该指数应用于安徽省低温冷冻灾害进行风险区划及结果验证。结果表明,安徽省低温灾害风险评估模型比较客观,较全面地反映出安徽省的低温冷冻灾害风险水平。

超低温冷冻对长鳍篮子鱼精子中几种酶活性的影响

研究超低温冷冻保存(-196℃)对长鳍篮子鱼(Siganus canaliculatus)精子内总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)等酶活性的影响。运用试剂盒分别测定了冷冻前后长鳍篮子鱼精子内几种酶活性的变化。结果表明,经过超低温冷冻保存后,精子内GR活性显著升高(P<0.05),酶活性从冻前的163.54U/L±17.14U/L上升到239.33U/L±22.24U/L;其余7种酶的活性均显著下降(P<0.05),超低温冷冻对长鳍篮子鱼精子内不同酶活性和精子活力均有较大影响。

泥鳅胚胎玻璃化液超低温冷冻保存研究

泥鳅胚胎 (胚孔封闭期 )用 10 #玻璃化液作为低温保护剂 ,经低温 (- 196℃ )冷冻保存 17h后 ,38℃水浴解冻 ,解冻后的胚胎获得了成活。在稀释液B1、B2、B3中分别有 2 6 .7% ,15 .0 % ,3.0 %成活的胚胎。解冻后的胚孔封闭期胚胎经过 5 0h的培养 ,胚胎从胚孔封闭期发育至尾鳍出现期。

深低温冷冻异体肌腱移植的组织学和生物力学研究

[目的]探讨深低温冷冻同种异体肌腱替代自体肌腱进行移植治疗肌腱缺损的可行性及移植后异体肌腱的形态学和生物力学性能的动态变化。[方法]采用兔跟腱缺损修复模型,经深低温冷冻的同种异体跟腱为实验组,自体跟腱移植为对照组,分别在术前及术后2、4、8周时对实验组同种异体跟腱及对照组自体跟腱进行大体观察、组织学检查和生物力学测试。[结果]同种异体跟腱与自体跟腱在移植前和移植后2、4、8周时其大体观察、组织学检查和生物力学测试等各项指标均无明显差异,显示同种异体跟腱和自体跟腱有相类似的结构及愈合过程。另外,同种异体跟腱在移植后其力学性能(除衰竭应变外)均比移植前明显降低。随时间推进有上升的趋势,但8周时仍明显低于移植前水平。[结论]深低温冷冻同种异体肌腱可替代自体肌腱应用于移植修复肌腱缺损。同时,由于移植后肌腱力学性能明显下降,需给予适当保护,防止过度牵拉而导致衰竭。

超低温冷冻对日本鳗鲡精子酶活性的影响

研究超低温冷冻保存(-196℃)对日本鳗鲡精子内总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性的影响。运用试剂盒分别测定了冷冻前后日本鳗鲡精子内酶活性的变化。结果表明,经过超低温冷冻保存后,日本鳗鲡精子的活力下降,精子内GR活性显著升高(P<0.05),酶活性从冻前的358.52±45.65 U/L上升到646.30±70.30 U/L;其它几种酶的活性均显著下降(P<0.05),总ATP酶、CK和SDH的活性分别从冻前的3.14±0.61 U/ml、17.10±3.51 U/ml和32±5.94 U/ml下降到1.83±0.43 U/ml、7.33±1.74 U/ml和21±1.41 U/ml,LDH、SOD和CAT活性分别从冻前的2 266.67±313.25 U/L、220.47±32.94 U/ml和48.51±5.94U/ml下降到1 195.91±198.51 U/L、84.16±22.11 U/ml和21.8±4.14 U/ml。超低温冷冻对日本鳗鲡精子酶活性和精子活力均有较大影响。

软鳍新光唇鱼精子的超低温冷冻保存

2011年,对软鳍新光唇鱼(Neolissochilus benasi)进行了精子超低温冷冻保存研究。以解冻后的精子活力为指标,采用稀释液D-15,设计不同的抗冻剂种类和浓度,以及不同的实验条件(包括冷冻体积、4℃平衡时间和解冻温度等)探索软鳍新光唇鱼精子的超低温冷冻保存方法。筛选出了适合软鳍新光唇鱼精子超低温冷冻保存的两种抗冻保护剂及其浓度分别为10%MeOH和15%EG,确定了精液与稀释液的最适稀释比例为1:7、4℃平衡时间区间为10～60min、冷冻体积为60μL,以及复苏方法为37℃水浴快速解冻30s。当鲜精活力为(62.33±2.05)%,综合以上最佳实验条件进行保存,解冻后精子的最高活力为(29.67±0.47)%,但效果不理想,不能达到广泛生产运用水平;产生这一结果,可能与异地保育物种的饲养管理有关。因此,在亲鱼培育管理中要最大限度地降低捕获诱发的压力,尽量提供适合的养殖条件。在珍稀鱼类异地保育时,繁殖用雄鱼的培育与雌鱼同等重要,是获得大量高质量仔鱼的关键。

糖在猕猴精子低温冷冻保存过程中的作用

TTE或TEST防冻液在冻存猕猴精子时产生不同结果 ,其主要不同在于防冻液中糖成分的不同。本实验利用透射电镜技术检测这 2种防冻液冻存的猕猴精子冷冻前后超微结构的变化 ,以说明糖在低温冻存过程中的作用。结果表明 ,冷冻复苏过程对精子结构产生了影响 ,TTE法低温保存的猕猴精子的头部的质膜出现少许皱褶或泡化现象 ,但精子的顶体、核或是精子尾部的结构与鲜精的结构基本相似。猕猴精子经TEST法低温保存后 ,大部分精子结构则发生了明显的变化 ,精子膜、顶体和精子核明显泡化、损伤或破裂 ,精子尾部不能分辨出正常的超微结构。这提示 ,可能由于TTE防冻液中复杂的糖成分在降温 /复苏过程对精子起到了较好的协同冷冻保护作用 ;而TEST防冻液中单一的糖成分不能完全保护精子避免低温损伤 ,低温保存过程破坏了精子的结构 ,并影响了复苏后精子体外存活能力与受精能力。

低温冷冻条件对大豆分离蛋白分散液表面疏水性及二硫键的影响

通过大豆分离蛋白(soybean protein isolate,SPI)冷冻前后结构的变化,研究了低温冷冻条件(SPI添加量、冷冻温度、冷冻时间)对SPI结构(巯基、二硫键及表面疏水性)的影响。实验发现在冷冻条件下随着SPI添加量的降低,游离巯基和二硫键逐渐减少、暴露巯基与表面疏水性先增加后减小;随着冷冻温度降低和冷冻时间延长,SPI的游离巯基、二硫键含量及表面疏水性逐渐减少。经过冷冻处理的SPI会有一定程度的变性,在不太低的冷冻温度下游离巯基含量明显大于未冷冻SPI,且在冷冻过程中SPI大部分的分子内二硫键转化为分子间二硫键。

超低温冷冻对俄罗斯鲟精子抗氧化酶活性的影响

为了探讨超低温(-196℃)对精子的损伤机理,采用试剂盒测定了冷冻前后俄罗斯鲟精浆和精子中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性。结果表明,经过超低温冷冻保存后,俄罗斯鲟精子活力下降,添加抗冻保护液冷冻后的精浆中SOD、CAT、GSH-PX活性较鲜精组显著升高(P<0.05),较未添加保护液组显著降低(P<0.05),GR的活性则显著低于鲜精组(P<0.05),但显著高于未添加保护液组(P<0.05);添加抗冻保护液冷冻后的精子中SOD、CAT、GSH-PX活性较鲜精组显著降低(P<0.05),较未添加保护液组显著升高(P<0.05),GR活性则显著高于鲜精组(P<0.05),但显著低于未添加保护液组(P<0.05)。这说明超低温冷冻对俄罗斯鲟精子的抗氧化系统产生了较大影响,成为影响精子活力的一个重要原因。