明永冰川三株黄杆菌低温噬菌体的生物学特性研究

对分离自明永冰川地区的3株黄杆菌低温噬菌体(MYSP03、MYSP08和MYTP08)的生物学特征开展了研究,采用氯化铯密度梯度离心法对3株低温噬菌体进行了纯化并系统比较了3株低温噬菌体的形态、宿主专一性、吸附速率、最佳感染复数及一步生长曲线等生物学特性。虽然3株低温噬菌体的宿主均为黄杆菌,但它们在形态及生物学特性上均表现不同。低温噬菌体MYSP03和08为头尾型噬菌体,呈复合结构,二者头部直径与尾管长度明显不同;噬菌体MYTP08与MYSP08形态差异较大,但它们都能感染同一宿主菌,MYTP08为复层噬菌体,衣壳直径为58 nm。噬菌体MYSP03、MYSP08和MYTP08分别在MOI为0.1、10和1时所产生的子代噬菌体数量最多,3株噬菌体的裂解量显著不同,其中MYTP08最大为137。

三株假单胞菌低温噬菌体生物学特性比较研究

对分离自东帕米尔高原喀拉库勒湖和云南明永冰川的3株假单胞菌(Pseudomonas)低温噬菌体Muztag BP1、Muztag BP2和MYBP2A-15的生物学特征开展研究。以双层平板法培养噬菌体,观察噬菌斑特征,采用透射电镜观察经磷钨酸负染的噬菌体颗粒形态,比较分析了3株噬菌体的增殖温度、热稳定性、p H稳定性、化学试剂敏感性及一步生长曲线等特性。结果表明,3株噬菌体宿主虽然同属假单胞菌,但形态及生物学特征明显不同。3株噬菌体均属头尾型结构,其中Muztag BP1、MYBP2A-15头部呈正多面体对称,直径约68 nm和74 nm,具收缩尾,长度分别约130 nm、160 nm,初步鉴定为肌尾噬菌体科(Myoviridae);Muztag BP2头部直径约82 nm,尾管细长,约640 nm,归属为长尾噬菌体科(Siphoviridae);3株噬菌体均具热不稳定性,对紫外有一定耐受性;Muztag BP1对氯仿、异丙醇和乙醚极其敏感,推断其核衣壳外含有脂膜包被,Muztag BP2和MYBP2A-15对氯仿、异丙醇和乙醚不敏感,其核衣壳外无脂质成分;一步生长曲线显示3株噬菌体的潜伏期、裂解期和裂解量各异。

喀拉库勒湖两株侵染同一宿主黄杆菌低温噬菌体的分离及生物学特性研究

低温噬菌体作为高原湖泊中的主要生物类群,在调控原核菌群结构及C,N等元素循环方面意义重大.从喀拉库勒湖中分离纯化低温噬菌体并对其生物学特性进行研究,采用双层平板法分离纯化低温噬菌体,利用透射电镜观察噬菌体粒子形态;结合16S rDNA序列比对及系统发育分析确定宿主菌分类地位;对噬菌体最佳感染复数、一步生长曲线和吸附速率等基本生物学特性进行比较,分析理化因素对噬菌体的影响;采用PEG沉淀法浓缩噬菌体颗粒;酚-氯仿法提取噬菌体基因组并进行酶切.结果表明:从喀拉库勒湖分离到两株能侵染同一宿主黄杆菌Flavobacterium sp.KHhb03的噬菌体KH-sph01和KH-sph02,其均能在4℃侵染宿主并增殖,从形态上分别归属为长尾噬菌体科(Siphoviridae)和肌尾噬菌体科(Myoviridae).KH-sph01和KH-sph02均对热敏感,在pH值为7~8范围内最稳定,对氯仿、表面活性剂等不敏感,对蛋白酶K敏感;最佳感染复数分别为10和0.1,吸附速率均较强,裂解量分别为3.16个和10.22个,基因组均为dsDNA,初步估算基因组大小分别为60~65 kb和40~45 kb.得出噬菌体KH-sph01和KH-sph02能侵染同一宿主菌Flavobacterium sp.KHhb03,但生物学特性各异.

明永冰川融水中一株裂解性低温噬菌体的分离及特征

【目的】高山冰川是一类独特的生态系统,本研究探索从明永冰川地区分离和培养低温菌噬菌体,并对其特征进行研究。【方法】利用已分离的低温菌为宿主,采用"双层平板法"从明永冰川融水中分离纯化低温菌噬菌体;对噬菌体及其宿主进行电镜形态观察,并进行噬菌体基因组限制性酶切片段长度多态性分析、衣壳蛋白组成分析及噬菌体生理特征研究。【结果】从明永冰川融水中分离获得一株裂解性低温噬菌体,命名为MYSP03(Mingyong Flavobacterium Siphoviridae Bacteriophage),其宿主菌MYB03鉴定为Flavobacterium菌株。噬菌体MYSP03为长尾型,无囊膜,头部具典型的正多面体立体对称结构,直径约72 nm;尾管长约240 nm,直径约10 nm;4℃时具侵染活性,在4℃-20℃范围内均可产生边缘清晰、透明的噬菌斑,最适感染温度约10℃,pH耐受范围较广,最适感染pH约9.4,对氯仿不敏感,基因组为双链DNA,大小约66 kb。

一株假单胞菌属低温噬菌体的分离及其特性研究

目的从纳帕海湿地土样中分离和培养低温菌及其噬菌体,并对其特性进行研究。方法分离纯化低温宿主菌,采用"双层平板法"分离获得噬菌体,通过16S rRNA基因分析对宿主菌进行初步鉴定,对噬菌体进行电镜形态观察,并进行噬菌体基因组酶切片段长度多态性分析及噬菌体生理特性研究。结果从纳帕海土样中分离获得一株裂解性低温噬菌体,命名为SV-12,其宿主菌S-12鉴定为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)。噬菌体SV-12有囊膜,头部为典型的正六边形,立体对称结构,直径约68.7 nm;尾管长约122.5 nm,直径约25 nm;在4℃时具有侵染活性,4～25℃均能产生边缘清晰、透明的噬菌斑。最适感染温度约为10℃,pH耐受范围较广,在pH=10时具有最多出斑数。结论 SV-12属于肌尾噬菌体科,为裂解性噬菌体,对氯仿极度敏感。基因组为dsDNA,大小约为74 kb。

一株裂解性低温假单胞菌噬菌体的分离及特性研究

从明永冰川低温土壤中分离、纯化获得一株低温假单胞菌噬菌体PFV1,并对其生物学特性（噬菌体基因组限制性酶切片段长度多态性、衣壳蛋白组分分析及生理特征）进行了初步研究。基于16S rRNA基因测序分析结果,将宿主菌初步鉴定为荧光假单胞菌菌株。噬菌体PFV1为球形,直径约50 nm。PFV1在4℃时具有侵染活性,4~25℃范围内均可形成噬菌。对氯仿具有一定的敏感性,具有热不稳定性,基因组为双链DNA,大小约38 kb。

一株黄杆菌低温噬菌体的生物学特征研究

目的对分离自明永冰川地区的1株黄杆菌噬菌体（SWP-8）生物学特性进行研究。方法利用透射电子显微镜（TEM）技术及氯化铯密度梯度离心法对SWP-8进行形态观察、基因组酶切片段长度多态性分析及噬菌体生理特性研究。结果噬菌体SWP-8为肌尾型,在电镜下呈头尾复合型结构,头部呈正多面体立体对称,直径约150nm;尾管长约150nm,直径约20nm,具有收缩性的鞘,头部与尾管结合处具有颈环结构。在4℃时具有感染性,4～25℃均能产生边缘清晰、透明的噬菌斑。pH值耐受范围较广,最适pH值为7.0。最佳感染复数为10.000,潜伏期60min,裂解期90min,裂解效率较高。结论 SWP-8属肌尾噬菌体科（Myoviridae）,是裂解性噬菌体,对氯仿和蛋白酶K较为敏感。基因组为dsDNA,大小约为75kb。

水环境低温噬菌体多样性研究进展

低温环境分布最广,生物圈约80%以上的部分为常年低于5℃的低温地区,而在水环境(包括深海、极地海洋、海冰和高纬度湖泊等)中病毒的分布和含量是非常丰富的。在这些低温环境中,噬菌体在生态系统调控、全球生物地球化学循环(尤其是碳循环)、深海代谢和生物基因多样性保存等方面扮演着重要角色。该文主要对海洋和淡水湖泊中低温噬菌体的多样性进行简要综述。

极地和深海环境中低温噬菌体研究进展

极地和深海是地球上较为独特的生态系统,生活在其中的生物由于长期处于低温、寡营养和黑暗封闭的环境中,大多缺乏基本的光合作用,而被认为是研究生命进化和地球环境演化等问题的"活化石"。在这样的极端环境中,低温噬菌体的丰度却很高,越来越多的证据表明它们在维持这类环境的生态平衡和调控生物地球化学循环等方面扮演着非常重要的角色。对极地与深海中低温噬菌体的研究进行简要综述。

一株蜡样芽孢杆菌低温噬菌体的分离及生物学特征

目的探索从冰川地区分离和培养低温菌噬菌体,并对其特征进行研究。方法利用"双层平板法"从明永冰川地区分离得到一株蜡样芽孢杆菌烈性低温噬菌体(命名为MYPB41-22),并对其生物学特征进行研究。结果宿主菌MYB41-22鉴定为Bacillus cereus菌株。噬菌体MYPB41-22在电镜下呈长六棱柱状,具一短直尾和一"衣领"状结构,无鞘。"衣领"状结构由对称的2～4个短棒状结构组成,头部具多面体立体对称结构,长55 nm,宽40 nm;尾管长约40 nm;4℃时具侵染活性,在4～37℃均可产生边缘清晰透明的噬菌斑,最佳感染温度为15℃,最适感染pH为8,最适感染复数0.1,对氯仿不敏感,基因组为双链DNA,大小约20kb。结论衣壳蛋白分析表明MYPB41-22在52 kDa处主条带含量较高,推测可能为其重要的结构蛋白。

一株希瓦氏菌低温噬菌体的分离及特征研究

采用双层平板法从新疆东帕米尔高原喀拉库勒湖中分离纯化低温噬菌体,并对其特征进行研究。结果分离得到1株烈性低温噬菌体,命名为KLP17,其宿主菌KLB17经16SrRNA基因序列分析鉴定为Shewanella菌株。KLP17裂解性好,可在双层平板上感染宿主菌KLB17形成直径2-4mm的圆形、透明噬菌斑。电镜下其颗粒形态呈头尾型,头部为正多面体对称,直径约88nm,收缩性尾长约160nm,属肌尾噬菌体科(Myoviridae)。噬菌体KLP17对高温敏感,耐碱不耐酸,对氯仿和异丙醇均不敏感,但对SDS和蛋白酶K十分敏感,推测其衣壳组分为蛋白质而无脂质包被。KLP17最佳感染复数为0.01,感染宿主菌KLB17的潜伏期、裂解期分别为55min和30min,裂解量为27。酶切结果显示其基因组为dsDNA,大小约67~69kb,研究结果不仅为进一步探究微生物适冷机制积累重要素材,而且为深入解析低温噬菌体与宿主菌及环境的互作关系提供数据参考。