骨髓增生异常综合征患者低甲基化药物耐药的机制及其对策

目前低甲基化药物(HMA)广泛用于骨髓增生异常综合征(MDS)的治疗,显著改善患者的临床治疗效果,但耐药现象几乎普遍存在。本文重点阐述HMA的免疫机制以及去甲基化治疗后免疫检查点受体表达上调是形成继发耐药的潜在机制。加深对ICP在HMA耐药机制中的认识,为在MDS中引入免疫检查点阻滞治疗(CBT)提供理论基础。免疫检查点通路(ICP)在HMA耐药中的作用有待进一步研究。CBT已是多种实体肿瘤的既定治疗方案,在部分血液肿瘤中也具有辅助治疗作用。CBT在MDS中的适宜性和有效性有待正在进行的临床试验结果予以证实。

MassARRAY定量分析法与普通亚硫酸盐测序法检测心肌梗死大鼠模型低甲基化基因序列的效果比较

目的通过比较MassARRAY定量分析法与普通亚硫酸盐测序法(BSP)检测心肌梗死大鼠乙醛脱氢酶(ALDH2)基因启动子甲基化的效果,为确定适用于低甲基化基因序列检测的最佳方法提供依据。方法取10只平均体重为(200±10)g的雄性Sprague-Dawley大鼠,将其随机分入对照组和实验组,每组5只。实验组行心脏冠状动脉左前降支结扎术,制备心肌梗死模型。常规饲养7d后,取实验组大鼠心脏梗死边缘区心肌组织,同时在对照组的相同区域取材。提取边缘区心肌组织DNA,分别采用MassARRAY定量分析法和普通BSP检测两组大鼠ALDH2基因核心启动子上游同一段DNA序列甲基化情况。结果 BSP可检测显示目标区域12个CpG位点,但检测结果示对照组和实验组均无DNA甲基化发生;MassARRAY定量分析法可检测显示目标区域10个CpG位点(2号至11号位点),实验组和对照组10个CpG位点均有低度DNA甲基化(<30%),且两组间5号、6号和7号CpG位点甲基化水平的差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论对于低甲基化基因序列,MassARRAY定量分析法较BSP拥有更好的DNA甲基化检测精度和检测效率。

DNA低甲基化及其与肿瘤关系的研究进展

DNA甲基化是DNA的一种表观遗传学修饰方式,是基因表达调控的一种重要机制,现已用于研究非遗传毒物的致癌机制。在人类肿瘤中存在的DNA甲基化异常既包括局部的DNA甲基化水平降低或升高,也包括全基因组的DNA甲基化水平降低,而基因组DNA甲基化水平降低是较早被发现的DNA甲基化改变形式之一。本文简要综述DNA低甲基化及其与肿瘤关系的研究进展。

慢性粒细胞白血病患者HAGE基因启动子的低甲基化

目的:探讨中国人群慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者螺旋酶抗原(helicase antigen,HAGE)基因启动子的甲基化状况和临床相关性。方法:应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术对50例不同临床分期的CML患者骨髓标本HAGE基因启动子的甲基化状态进行检测。结果:13例(26%)CML患者存在HAGE基因启动子的低甲基化改变,而24例对照均无HAGE基因低甲基化,两组比较差异有统计学意义(P=0.007)。HAGE基因启动子低甲基化改变与CML患者的年龄、性别、白细胞计数、血红蛋白含量、血小板计数、临床分期及染色体异常均无相关性(P>0.05)。慢性期、加速期和急变期患者中HAGE基因启动子低甲基化频率分别为25%(9/36)、25%(1/4)和30%(3/10)(P>0.05)。结论:HAGE基因启动子低甲基化是CML中的常见分子事件。

甲基化特异性PCR检测PRAME基因启动子低甲基化30例及其临床应用

目的建立实时定量甲基化特异性PCR（RQ-MSP）法检测急性髓系白血病（AML）患者黑色素瘤优先表达的抗原（PRAME）基因低甲基化水平,初步评价其临床意义。方法用亚硫酸氢盐修饰后的基因组DNA为模板,建立EvaGreen染料法RQ-MSP检测PRAME基因低甲基化水平方法 ,检测18例（对照组）和30例（AML组）患者的骨髓单个核细胞中PRAME基因启动子低甲基化水平。结果 RQ-MSP融解曲线呈单一峰,标准品5×10^7-5×10^2copy/μL重复性良好;AML患者PRAME基因低甲基化水平（0.96-4 508.96,中位772.42）明显高于对照组（0-100.00,中位25.29）,差异有统计学意义（P=0.002）。结论建立的PRAME基因低甲基化RQ-MSP法特异性、重复性和灵敏性良好,可用于AML初诊和病情监测。

卵巢癌HOXA10基因启动子区低甲基化改变与其临床病理特征的关系

目的:探讨HOXA10基因启动子区甲基化与卵巢上皮性癌(卵巢癌)的关系。方法:运用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测29例卵巢癌标本及对照组16例正常卵巢组织中HOXA10基因启动子甲基化状态,并分析HOXA10基因甲基化状态与不同临床病理特征的联系。结果:检测到17例(58.62%)卵巢癌组织HOXA10基因启动子区发生低甲基化改变,另外4例甚至为完全去甲基化改变;而仅有4例(25.00%)正常卵巢组织HOXA10基因启动子区发生低甲基化(P<0.05)。HOXA10低甲基化阳性率随淋巴转移而增高(P<0.05)。不同年龄、瘤体大小、WHO病理分级、FIGO临床分期和HOXA10基因低甲基化未见明显相关性(P>0.05)。结论:HOXA10基因启动子区低甲基化为频发事件,提示与卵巢癌患者的不良预后相关,可作为卵巢癌判断预后的生物学标志物。

T细胞DNA低甲基化在SLE的研究进展

系统性红斑狼疮是一种自身免疫性疾病,越来越多的研究认为DNA甲基化异常在其发病中起重要作用。为此,总结了系统性红斑狼疮的甲基化特征、T细胞发生DNA低甲基化的机制、DNA低甲基化引起SLE的相关基因变化、基因活性的变化引发系统性红斑狼疮的主要途径,其中重点综述了淋巴细胞功能相关抗原1、穿孔素、CD70分子过度表达而引发系统性红斑狼疮的3种途径的新进展。

DNA低甲基化不是化学致癌启动过程的必经途径

曾有一种观点认为化学致癌启动过程的外造传机制中DNA去甲基化是很重要的。根据有:一些化学致癌物可抑制DNA甲基化酶活性(体外),可引起细胞DNA甲基化水平降低:DNA低甲基化与基因表达改变有关。但证据尚不充分。 本文通过HPLC直接测量致癌物处理细胞DNA中的5-甲胞嘧啶含量及用限制性内切酶分析DNA中-CCGG-序列的甲基化状态观察DNA的甲基化水平。为了把研究对象严格局限于新合成DNA中,在后一方法中,被研究的细胞DNA在收获前24h用3~H-TdR标记,分析电泳谱中的放射活性分布。

甲状腺癌组织低甲基化片断的筛选与克隆

目的筛选甲状腺癌与甲状腺癌癌旁组织的低甲基化片段。方法采用MS—RDA方法，用甲基化敏感性内切酶消化甲状腺癌及癌旁组织基因组DNA，连上接头制备扩增子后，进行两轮消减杂交，筛选甲状腺癌低甲基化片段。结果经过两轮消减杂交后，筛选出3个低甲基化片段。筛选出的低甲基化片段C913位于。BC029276基因上，该基因编码一种rRNA结合蛋白，可能与肿瘤有关。另外两个低甲基化片段C915与C917尚未见相关结构和功能的报道。结论在甲状腺癌组织中存在低甲基化。

uPA基因启动子区低甲基化在鼻咽癌侵袭转移中的作用

目的探讨uPA基因启动子区低甲基化状态与鼻咽癌侵袭转移的关系。方法用甲基化特异性PCR及RT-PCR法检测分析鼻咽癌及鼻咽部慢性炎症组织中uPA基因甲基化状态及其基因表达情况,分析uPA基因低甲基化与鼻咽癌侵袭转移的关系。结果 58例鼻咽癌组织中有51例为uPA基因低甲基化,其余7例为高甲基化,而鼻咽部慢性炎症组织中uPA基因均为高甲基化;低甲基化的鼻咽癌组织中均见uPA mRNA强表达,而高甲基化的鼻咽癌和鼻咽部慢性炎症组织中仅见uPA mRNA弱表达或无表达。结论鼻咽癌中uPA基因的高表达与其基因启动子区低甲基化有关,uPA基因低甲基化可能与鼻咽癌的侵袭转移有关。

T细胞DNA低甲基化在系统性红斑狼疮发病中的作用

当各种原因使患者出现T细胞DNA低甲基化时 ,可能导致白细胞功能相关抗原 1、白介素 6、Ha ras等因子的过度表达 ,从而激活T细胞使之成为自身反应性细胞。通过这种自身反应性细胞与B细胞的相互作用 ,引起多克隆B细胞的活化 ,最终导致病理性自身抗体的产生及系统性红斑狼疮的发生。

启动子低甲基化上调CD147基因表达并且提示肝癌患者预后不良

新型癌生物标志物CDl47对肝癌等恶性肿瘤诊断、预防及治疗都有着极其重要的意义，其高表达常常和肿瘤的预后不良有关，但是其在肿瘤表达上调的分子机制还不清楚。DNA甲基化在基因表达调控中发挥重要作用，DNA甲基化的检测可用于肿瘤诊断和预后评估，是癌症研究的热点之一。

DUSP9调控雌性小鼠多能干细胞的DNA低甲基化

囊胚来源的胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESCs）和性腺来源的胚胎生殖细胞（embryonic germ cells,EGCs）代表了多能干细胞系的两个经典类型,但它们的分子等价性仍未被完全了解。Choi等对遗传背景相同的ESCs和EGCs细胞系之间的全基因组甲基化模式进行比较,从而确定它们表观遗传的相似性和差异性。令人惊讶的是,他们发现真正驱动ESCs和EGCs甲基化模式的是性别而非细胞类型。细胞融合实验进一步表明,X染色体与常染色体的比值决定了甲基化水平,

卵巢透明细胞癌低甲基化在特异性基因网络中发挥作用

卵巢透明细胞癌（CCC）常发生ARID1A基因突变和HNF1B基因过表达，但其表观基因学特征并不确定。美国杜克大学医学中心亚马古基（Yamaguchi）等曾报道过一些由启动子甲基化调控的卵巢CCC特异性基因（如HNF1B）。在本届SGO年会上，他们的研究进一步证实，与卵巢其他组织学亚型相比，CCC有显著的甲基化谱，且低甲基化在HINFI网络异常中起重要作用。

乙型肝炎病毒X蛋白通过诱导P3启动子低甲基化促进胰岛素样生长因子-II基因表达

目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）对胰岛素样生长因子-II（IGF—II）基因P3启动子驱动的mRNA表达的影响及其表观遗传机制。方法分别采用定量RT-PCR和亚硫酸氢盐测序法检测HBV感染阳性和阴性肝癌组织中P3mRNA、HBxmRNA表达水平及P3启动子甲基化状态；进一步分析稳定表达HBx蛋白的肝癌细胞株HepG2-HBx及其对照细胞株HepG2-control中P3mRNA表达水平及P3启动子甲基化状态；最后，将体外甲基化的IGF—II基因P3启动子驱动的荧光素酶报告载体pGL3-P3及携带HBx基因的pCMV-tag2B—X质粒共转染HepG2细胞，采用亚硫酸氢盐测序法及双萤光素酶试验检测HBx蛋白对P3启动子转录活性和甲基化状态的影响。计数资料采用x^2或Fisher精确检验，计量资料采用独立样本f检验或Mann-WhitneyU检验，线性相关分析采用Pearson相关系数评价。结果（1）HBV感染阳性的肝癌组织中P3mRNA表达水平（△cT为-9．59±3．22）明显高于HBV阴性的肝癌组织（△cT为-12．97±3．08），P=0．006；而P3启动子17个cpG位点的平均甲基化水平（36．9％土15．5％）明显低于HBV阴性的肝癌组织（52．1％±19．1％），P：0．025；P3mRNA丰度与HBxmRNA表达水平呈正相关，而与P3启动子甲基化水平呈负相关。（2）在HepG2-HBx及其对照细胞中，也显示了类似的P3mRNA表达水平及P3启动子甲基化水平变化。（3）体外转染的HBx蛋白显著降低了P3启动子甲基化水平，提高了其转录活性。结论HBx蛋白可能通过降低P3启动子甲基化水平促进肝细胞癌IGF—II基因表达，本结果为充分理解HBx蛋白介导的肝细胞癌发病机制提供了新的信息。

膀胱癌HPSE基因启动子区低甲基化与临床病理特征相关性的研究

目的:探讨乙酰肝素酶(HPSE)基因启动子区甲基化与膀胱癌临床病理特征的相关性。方法:运用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测27例膀胱癌标本及15例正常膀胱组织中HPSE基因启动子甲基化状态,并分析HPSE基因甲基化状态与不同临床病理特征的关系。结果:59.26%(16/27)膀胱癌组织HPSE基因启动子区发生低甲基化改变,另外2例甚至为完全去甲基化改变;而仅有3例(20.00%)正常膀胱组织HPSE基因启动子区发生低甲基化,χ2=5.999,P=0.014。在17例伴淋巴结转移的患者中,发生HPSE基因低甲基化改变15例(88.23%),而在10例无淋巴结转移的患者中,发生HPSE基因低甲基化改变1例(10.00%)。HPSE低甲基化阳性率随淋巴转移而增高,χ2=12.887,P=0.004。不同性别、年龄、瘤体大小、病理分级和临床分期与HPSE基因低甲基化无明显相关性,P>0.05。结论:HPSE基因启动子区低甲基化为频发事件,提示与膀胱癌患者的不良预后相关,可作为膀胱癌判断预后的生物学标志。

高分辨率溶解技术定量检测系统性红斑狼疮患者血细胞中CD70启动子低甲基化水平

目的:建立高分辨率溶解技术定量检测系统性红斑狼疮患者血细胞中CD70启动子甲基化的方法,探讨CD70甲基化程度与系统性红斑狼疮发病的相关性。方法:319例系统性红斑狼疮患者及323例健康体检者外周血标本,抽提DNA后进行甲基化修饰。以CpGenome Universal Methylated DNA作为100%甲基化的样本,以100%非甲基化的健康体检者外周血DNA作为稀释剂,分别制成100%,80%,50%,30%,10%,0系列浓度的标准曲线;采用高分辨率溶解技术定量检测CD70甲基化水平。结果:100%,80%,50%,30%,10%,0甲基化标准品的高分辨率溶解曲线从右向左依次排列,待测样本在标准曲线上的位置即代表了其甲基化程度。高分辨率溶解技术重复性好,可检测低至10%甲基化水平。CD70甲基化水平与系统性红斑狼疮发病显著相关(P=0.00047)。结论:建立高分辨率溶解技术定量检测CD70甲基化程度的方法,CD70启动子低甲基化有望成为评估系统性红斑狼疮患病的分子指标。

大肠癌组织中癌相关基因的表达及其启动子低甲基化的实验研究

大肠癌是最常见的消化系恶性肿瘤之一，近年来其发病率有逐年上升趋势。大肠癌的治疗关键在于早期诊断，而目前惟一的根治方法是早期切除肿瘤。癌相关基因（CAGE）是2002年发现的与癌症有关的基因，其在多种癌组织及肿瘤细胞系中呈高表达，在除睾丸组织外的正常组织中均无表达。现回顾性分析大肠癌、大肠腺瘤及正常黏膜组织中CAGE的表达及其启动子低甲基化情况。

DNA低甲基化在系统性红斑狼疮中的研究进展

系统性红斑狼疮（svstemic lupus ervthematosus，SLE）是因免疫失凋产生一系列自身抗体所导致的自身免疫性疾病，它以淋巴细胞的多种生化异常和自身抗体的产生为特征，其发病由是遗传、免疫、环境、行为生活方式及社会心理因素等多种因素综合作用所致，是一种多基因遗传病。