低聚龙胆糖的酶法生产技术

本文介绍了一种以酶葡萄糖为原料生产低聚龙胆糖的技术。该技术采用了一种新型酶 ,这种新型酶的最适pH为 5 .0 ,最适温度为 70℃ ,若要保持 10 0 %酶活性 ,温度应控制在 5 5℃以下。该酶的等电点为 5 .30 ,分子量约为 85 0 0 0左右。

带苦味的低聚龙胆糖玉米糖浆

低聚龙胆糖是以葡萄糖液为原料，经过专用酶的葡基转移作用和缩和作用生产出来的。由于低聚龙胆糖比蔗糖和麦芽糖浆（ｍａｌｔ ｓｙｒｕｐ）有较高的吸湿性（ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｔｙ），因此可以保持各种食品中有合适的水分，从而防止淀粉质食品的老化。

β-葡萄糖苷酶高产菌株的选育及酶法转化葡萄糖生产龙胆低聚糖

以高产β-葡萄糖苷酶米曲霉为出发菌株,经紫外-60Co复合诱变处理,用不同葡萄糖浓度梯度的β-葡萄糖苷酶鉴定平板筛选,在含4%葡萄糖的鉴定平板上获得1株抗葡萄糖阻遏的突变株ASPE0485,β-葡萄糖苷酶水解酶活提高1.78倍,达到17.65U/mL。ASPE0485所产β-葡萄糖苷酶与高浓度葡萄糖反应,薄板层析和高效液相色谱检测反应产物有龙胆低聚糖,表明ASPE0485所产β-葡萄糖苷酶具有转苷活性;对酶转化葡萄糖生产龙胆低聚糖的反应条件进行了优化:当底物葡萄糖浓度为60%,pH3.0,反应温度为50℃,转化周期为72h,龙胆低聚糖累计达到最大,为44.16g/L。

功能性食品添加剂-龙胆低聚糖

介绍龙胆低聚糖的生产方法及其结构、特征和生理功能。

功能食品配料──新型低聚糖

功能食品配料──新型低聚糖尤新（中国食品添加剂生产应用工业协会北京，１０００２７）近年来，功能性健康食品，在日本十分流行，在这些功能性食品配料中，比较重要的有食物纤维（可溶性纤维）、低聚糖、糖醇钙、钙吸收剂、铁、β－胡萝卜素、ＤＨＡ等。用这些配料生产...

功能性低聚糖

介绍了功能性低聚糖的生理活性，日本市场供应的品种和市场概况，特别报导了低聚异麦芽糖，低聚龙胆糖，低聚果糖的特性，组成和用途。

重组β-葡萄糖苷酶生产龙胆低聚糖的工艺条件优化

【目的】β-葡萄糖苷酶可用于酶法生产龙胆低聚糖。为了给龙胆低聚糖的生产提供大量的酶来源,构建基因工程菌表达黑曲霉(CMI CC324626)β-葡萄糖苷酶基因(bgl)并研究重组酶生产龙胆低聚糖的工艺条件。【方法】将bgl克隆到表达载体pPIC9K,转化毕赤酵母(Pichia pastoris)KM71。表达产物通过HPLC和LC-MS鉴定了其可用于生产龙胆低聚糖的转苷活性,并对酶转化葡萄糖生产龙胆低聚糖的反应条件进行了优化。【结果】实现了β-葡萄糖苷酶的过量表达。当底物葡萄糖浓度为80%,反应pH4.5,温度为60℃,加酶量为每克葡萄糖60U,添加1mmol/L的K+,转化周期为48h,龙胆低聚糖累计达到最大为50g/L。【结论】本研究是国内外首次利用重组酶酶法生产龙胆低聚糖的报道。

重组毕赤酵母生产β-葡萄糖苷酶发酵条件优化及固定化研究

为了实现绿色木霉菌Trichoderma viride来源的β-葡萄糖苷酶在重组毕赤酵母中的高效表达,对重组菌P.pastorisKM71/pPIC9K-bgl1/pPICZA-pdi进行3.6L罐发酵培养条件优化。结果表明,当诱导温度28℃,初始诱导菌体浓度50g/L,诱导阶段甲醇体积分数1.0%时,酶活力最高,能达到1452U/mL。同时以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂,采用吸附交联法对β-葡萄糖苷酶进行固定化。结果表明,当壳聚糖质量浓度0.03g/mL,戊二醛质量浓度0.008g/mL,游离酶添加量400U/g(1g壳聚糖微球加酶量为400U),固定化吸附时间20h时,固定化酶酶活回收率最高,达到65.4%。以800g/L葡萄糖为底物,优化的转化条件下连续转化6次,低聚龙胆糖产率仍达到15.2%,显示出该固定化酶具有较好的持续利用性及较高的低聚龙胆糖生产能力。

酶法合成龙胆低聚糖得率测定方法学研究

为定量测定酶法合成龙胆低聚糖得率,采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD),通过测定转化后残留底物葡萄糖含量,间接测定龙胆低聚糖得率。对该法测定酶法合成龙胆低聚糖体系中残留底物葡萄糖含量的干扰因素、方法的稳定性、重复性、精密度进行研究。结果:该法在2h内测定体系葡萄糖含量结果稳定(RSD=0.81%),重复性好(RSD=0.97%),精密度高(RSD=1.55%),干扰小(加样回收率=101.681%)。结论:GOD-POD法用于测定酶法合成龙胆低聚糖体系中残留底物葡萄糖含量结果稳定可靠,体系中产物龙胆低聚糖及其他物质对GOD-POD法测定葡萄糖含量无显著影响。用该法间接测定酶法合成龙胆低聚糖得率可行。

Thermotoga sp.KOL6来源GH1β-葡萄糖苷酶在枯草芽孢杆菌中的表达及发酵优化

葡萄糖苷酶是利用葡萄糖制备低聚龙胆糖的关键用酶,而高转糖苷活性和高耐热性是适合于低聚龙胆糖酶法制备用β-葡萄糖苷酶的理想特性。研究表明,GH1家族的β-葡萄糖苷酶具备高转糖苷活性的优势。因此,本研究认为噬热菌来源的GH1耐热β-葡萄糖苷酶是非常好的研究生产低聚龙胆糖的候选酶。为了满足β-葡萄糖苷酶的安全生产需要,本研究合成了热袍菌Thermotoga sp.KOL6来源的GH1家族的β-葡萄糖苷酶基因tsbgl,将其在Bacillus subtilis WS11中重组表达,并在摇瓶水平和3-L发酵罐水平上进行优化。结果表明,重组菌在TB培养基的基础上摇瓶发酵后的酶活可达到10.41 U/m L,之后在摇瓶水平上进行发酵优化,发现以15 g/L工业蛋白胨和5 g/L安琪玉米浆为组合氮源、5 g/L甘油为碳源、添加终浓度为1 mmol/L的Ba2+离子时,摇瓶发酵24 h,酶活力最高可以达到16.32 U/m L,是TB培养基摇瓶发酵酶活的1.56倍。依据摇瓶结果进行3-L发酵罐中的补料培养基的优化,确定葡萄糖为最优补料培养基,扩大培养后的酶活可以达到520 U/mL,是未优化前的49倍。本研究重组表达了耐热β-葡萄糖苷酶Tsbgl,并通过发酵优化有效提升了其在枯草芽孢杆菌中的发酵水平,为其食品级工业化生产及应用奠定了基础。

Talaromyces piceae来源β-葡萄糖苷酶在毕赤酵母中的重组表达及发酵优化

葡萄糖苷酶在利用高浓度葡萄糖生产低聚龙胆糖的工业应用中有很大潜力,但巨额的加酶量和菌株的蛋白表达能力一直是其工业化的瓶颈。实验室前期研究发现,蓝状菌Talaromyces piceae来源的β-葡萄糖苷酶TpBgl3A能以较低加酶量高转化率制备低聚龙胆糖,但由于其在毕赤酵母中发酵水平尚不理想,使得加酶成本仍不能满足工业化生产的要求,发酵水平也有待进一步提高。本研究从初始诱导菌体浓度、温度及甲醇浓度3个方面开展了β-葡萄糖苷酶TpBgl3A在毕赤酵母重组工程菌Pichia pastoris KM71/p PIC9K-TpBgl3A的高密度发酵条件优化。实验结果显示,TpBgl3A重组菌的摇瓶表达酶活为240 U/mL,蛋白含量为0.51 g/L;在初始发酵条件下进行3.6 L罐高密度发酵,其酶活力最高为1058 U/m L,蛋白含量为2.75 g/L。条件优化结果表明,诱导温度25℃、初始诱导菌体OD600=150、甲醇浓度1.0%为该毕赤酵母重组菌最适发酵条件,最高发酵酶活高达2324 U/mL,蛋白含量达6.19 g/L,相比摇瓶表达分别提升了8.68倍和11.14倍,相比发酵优化前分别提高了1.20倍和1.25倍。可见,经条件优化,β-葡萄糖苷酶TpBgl3A高密度发酵水平显著提高,从而降低产酶成本,对于低聚龙胆糖酶法制备的工业化生产具有重要的潜在经济价值。