lncRNA NEAT1通过Klotho/mTOR轴调控慢性脑低灌注大鼠的认知障碍

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA)核富集丰度转录物1 (NEAT1)对慢性脑低灌注(CCH)大鼠认知障碍的调控作用和潜在机制。方法双侧颈总动脉闭塞术(BCCAO)诱导CCH模型大鼠。将大鼠分为5组(每组n=10):Ⅰ组(假手术组);Ⅱ组(BCCAO手术组);Ⅲ组[BCCAO后于海马区注射0.3 mg·kg^(-1)·w^(-1)的沉默lncRNA NEAT1的短发夹RNA重组质粒(shNEAT1),持续12 w];Ⅳ组[BCCAO后于海马区每周注射0.3 mg·kg^(-1)·w^(-1)的shNEAT1和50 mg·kg^(-1)·w^(-1)的沉默克洛托蛋白(Klotho)的短发夹RNA重组质粒(shKlotho),持续12 w];V组[BCCAO后于海马区注射0.3 mg·kg^(-1)·w^(-1)的shNEAT1和25mg·kg^(-1)哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的抑制剂(AZD-8055),持续12w]。行Morris水迷宫实验记录逃避潜伏期。实时荧光定量PCR (qRT-PCR)测lncRNA NEAT1的表达。Western blot法检测Klotho、mTOR、磷酸化的mTOR (p-mTOR)、神经核抗原(NeuN)、多聚腺苷酸核糖聚合酶(PARP)、半胱天冬酶-3(caspase-3)、切割模式的半胱天冬酶-3(cleaved-caspase-3)的表达。免疫荧光化学检测海马区NeuN阳性细胞数。结果 与Ⅰ组比,Ⅱ组大鼠的逃避潜伏期延长,lncRNA NEAT1、PARP、cleaved-caspase-3的表达均上调,NeuN、Klotho和p-mTOR的表达均下调,NeuN阳性的细胞数减少(~均P<0.05)。与Ⅱ组比,Ⅲ组大鼠的逃避潜伏期缩短,且海马组织中lncRNA NEAT1、PARP、cleaved-caspase-3的表达均下调,NeuN、Klotho和p-mTOR的表达均上调,NeuN阳性的细胞数增加(~均P><0.05)。与Ⅲ组比,Ⅳ组和Ⅴ组中大鼠的逃避潜伏期延长,且海马组织中PARP、cleaved-caspase-3的表达均上调,NeuN、Klotho和p-mTOR的表达均下调,NeuN阳性细胞数都减少(~均P <0.05)。结论 lncRNA NEAT1通过负调控Klotho/mTOR轴促进CCH大鼠的认知障碍,为研究CCH的有效治疗靶点提供理论依据。

三种方式构建脑低灌注大鼠模型的比较研究

目的通过比较3种大鼠脑灌注不足模型的脑血流量、脑组织中神经细胞形态改变及血清氧化与炎症因子水平的变化,为脑血管疾病及神经退行性疾病机制及治疗药物研究提供实验动物模型。方法将88只雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=16)、经典双侧颈总动脉结扎组(经典2-VO组,n=24)、改良2-VO组(n=24)和线栓法组(n=24)。经典2-VO组行双侧颈总动脉结扎术,改良2-VO组在结扎之前先从颈总动脉抽血(1 mL/100 g),线栓法组行大脑中动脉闭塞术。前2种模型的假手术组仅分离颈总动脉但不结扎,线栓法模型的假手术组仅结扎颈总动脉近心端和颈外动脉,但不插入栓线。术后1、3和7 d时检测3组大鼠的脑血流量、脑梗死体积、血清炎症因子水平、海马组织苏木素-伊红(HE)染色和超微结构。结果激光散斑的结果显示:改良2-VO组大鼠脑血流下降幅度较其他2组更明显。第7天时,仅有改良2-VO组大鼠脑血流量相较于假手术组仍有显著性差异,且仍处于低灌注状态(与术前相比脑血流量下降30%)。TTC染色的结果显示:随着造模时间延长,3组大鼠纹状体区域的白色梗死灶逐渐变大,其中改良2-VO组大鼠有4只(约26.7%)在皮层和纹状体都出现了白色梗死灶,线栓法组有10只(约66.7%)在患侧皮层和纹状体出现了白色梗死灶。ELISA结果显示:3组模型大鼠造模后炎症因子TNF-α、IL-1β、hs-CRP水平升高,氧化因子ROS的水平升高,抗氧化因子SOD水平下降。在术后第7天时,经典2-VO组与线栓法组大鼠的hs-CRP与假手术组相比无显著性差异,但改良2-VO组与假手术组相比上述所有指标仍有显著性差异。HE染色的结果显示,改良2-VO组相较于另2组能造成更严重的海马CA1和CA3区损伤。透射电镜的结果显示,改良2-VO组相较于另2组能造成海马区细胞更严重的线粒体和内质网损伤。结论成功构建脑低灌注大鼠模型,相较于经典2-VO法和线栓法,改良2-VO法能在相同的时间内造成更完全的脑低灌注和更严重的神经损伤,更接近人类脑低灌注病理状态。

慢性脑低灌注致血管性痴呆发病机制研究进展

血管性痴呆(VaD)是一种神经退行性疾病,由整个大脑或局部大脑区域长期慢性低灌注引起,并最终发展为严重的认知功能障碍综合征。慢性脑低灌注可能是血脑屏障破坏、神经炎症、氧化应激、兴奋性毒性、神经血管解耦联、脱髓鞘和髓鞘再生失败等病理反应发生的基础,与VaD认知障碍的发生密切相关。慢性脑低灌注时血管内皮细胞功能障碍、周细胞丢失、血管周围空间增加导致血脑屏障分解和损伤,有害物质进入脑实质,造成白质病变、影响认知致VaD发生。慢性脑低灌注时促炎细胞因子过度激活,加剧神经炎症,诱发炎症—免疫级联反应,使白质损伤、神经元丢失,加速VaD发生发展。缺氧下内皮细胞中活性氧产生过量且细胞抗氧化系统无法对其适当调节,诱发氧化应激,损害内皮功能,加速神经血管功能障碍,导致白质损伤和认知损害。慢性脑低灌注时细胞能量失衡状态过度激活谷氨酸受体,使神经元功能紊乱和死亡,出现兴奋性毒性,导致细胞凋亡或坏死,最终诱发VaD。大脑能量供应紊乱、神经血管单元之间的细胞信号转导和营养耦合发生异常,使神经血管单元功能整体损害,导致一系列级联反应诱发VaD。慢性脑低灌注时少突胶质细胞祖细胞易损伤而发育停滞,致髓鞘再生失败,兴奋性毒性、氧化应激和炎症通过使细胞功能丧失、线粒体功能障碍和促凋亡信号蛋白的产生导致少突胶质细胞损伤、死亡和白质损伤,引发脱髓鞘,使轴突电位传递减慢引起脑功能障碍,还可致轴突损伤和神经元损伤,导致VaD发生。

淫羊藿次苷Ⅱ调节海马tau蛋白磷酸化水平改善慢性脑低灌注大鼠的学习记忆功能障碍

目的:研究淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)抗慢性脑低灌注(CCH)诱导的大鼠学习记忆功能减退的作用及其可能的作用机制。方法:Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,HE染色观察海马神经元的形态,Nissl染色观察海马神经元的存活数量,Western blot检测海马tau蛋白在丝氨酸199位点磷酸化(p-Ser 199-tau)、丝氨酸396位点磷酸化(p-Ser 396-tau)、丝氨酸404位点磷酸化(p-Ser 404-tau)及苏氨酸231位点磷酸化(p-Thr 231-tau)的水平。结果:ICSⅡ(16 mg/kg)能改善CCH大鼠的学习记忆障碍,减轻海马CA1区神经元结构损伤,增加海马CA1区存活神经元数量,降低海马p-Ser 199-tau、p-Ser 396-tau、p-Ser 404-tau、p-Thr 231-tau的水平。结论:ICSⅡ具有改善CCH所致大鼠学习记忆功能减退及海马神经元损伤的作用,其机制可能与下调tau蛋白异常磷酸化水平有关。

脑血流低灌注患者丁苯酞治疗前后DSA评估脑血管侧支循环变化

目的观察脑血流低灌注患者应用丁苯酞注射液前后脑血管造影评估侧支循环的变化。方法收集2019-07—2023-04在威海市立第三医院神经内科住院治疗的10例脑血管低灌注(主要指存在大血管狭窄或次全闭塞)患者,应用丁苯酞注射液前行数字减影血管造影(DSA)评估侧支循环情况,记录同时间节点的血管染色影像,完成后给予丁苯酞注射液10~14 d,再次行DSA评估侧支循环情况,并记录同时间节点的血管染色影像,对治疗前后的影像进行对比,观察用药前后侧支循环的变化。结果10例患者中分别选取5个时间节点的影像对比,50组中42组对比可见差异,主要表现为同范围内同一分支血管的粗细有改善,长度有增长。结论对于脑血流低灌注患者,应用丁苯酞注射液10~14 d前后脑血管造影对比,同供血范围内可发现分支血管增粗、变长,造影剂染色变深,侧支循环可出现不同程度的改善。

慢性低灌注脑血管组织细胞的改变

目的 观察慢性低脑灌注状态软脑膜血管组织细胞活性改变。方法 18只大鼠颈动脉-颈外静脉瘘（CJF）模型动物饲养 26周后断头处死取软脑膜血管（CJF开放组）,其中 9只大鼠处死前 CJF阻断0.5h（CJF阻断组）,应用流式细胞仪测定血管组织细胞活性。结果 CJF开放组软脑膜血管组织有6.28％细胞坏死,2.42％凋亡;CJF阻断组软脑膜血管组织细胞凋亡明显增加达 17.95％。结论 长期低脑灌注状态脑血管结构改变可能参与了“正常灌注压突破”的发生。

黄芩甙对慢性脑低灌注大鼠认知功能及其对海马内LC-3 Ⅱ和Beclin-1表达的影响

目的观察黄芩甙对慢性脑低灌注大鼠学习记忆功能及海马区自噬相关蛋白LC-3Ⅱ和Beclin-1表达的影响。方法将50只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组和黄芩甙低、中、高剂量组,每组各10只。采用永久性双侧颈总动脉结扎建立慢性脑低灌注大鼠模型,黄芩甙组腹腔注射3种不同剂量的黄芩甙(60、120、240 mg·kg^-1·d^-1),对照组和模型组给予等量0.9%(质量分数)氯化钠注射液腹腔注射。4周后采用Morris水迷宫法进行行为学检测,Western blotting法检测自噬相关蛋白LC-3Ⅱ和Beclin-1的表达。结果与对照组相比,模型组Morris水迷宫平均逃避潜伏期和游泳距离均明显延长(P<0.01),空间探索实验中在原平台所在象限游泳时间明显缩短(P<0.01),海马区自噬相关蛋白LC-3Ⅱ和Beclin-1表达明显增加(P<0.01)。与模型组比较,黄芩甙干预后,大鼠学习记忆能力显著改善(P<0.01或P<0.05),海马内LC-3Ⅱ和Beclin-1表达均显著低于模型组(P<0.01或P<0.05),差异有统计学意义。结论黄芩甙能够改善慢性脑低灌注大鼠的学习记忆功能,并抑制自噬相关蛋白LC-3Ⅱ和Beclin-1的表达。

维脑康胶囊对慢性脑低灌注大鼠脑内胆碱能系统及清除自由基能力的影响

目的：观察维脑康胶囊（WNK）对慢性脑低灌注所致大鼠认知障碍的干预作用及机制。方法：结扎大鼠双侧颈总动脉，4周后分为：假手术组，模型组，达纳康组，WNK8．25，16．5，33．0mg·kg^-1组；同时灌胃给药，给药周期8周，测定大鼠在MORRIS水迷宫中寻找平台的持续时间，同时HPLC—ECD测定脑组织中乙酰胆碱（ACh）含量，比色法测定乙酰胆碱酯酶（AChE）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量。结果：与模型组比较，给药4～8周，WNK组大鼠寻找平台时间明显缩短，脑内AChE活性明显降低（P〈0．05），ACh含量明显增加（P〈0．05～0．01），SOD活性明显增强（P〈0．05）。结论：WNK对慢性脑低灌注引起的认知障碍的改善作用可能与增强清除自由基能力以及保护胆碱能系统有关。

慢性脑低灌注状态对大鼠学习记忆功能及脑组织自由基代谢的影响

目的探讨双侧颈总动脉结扎所致的慢性脑低灌注状态下大鼠学习记忆功能及脑组织自由基代谢的时程改变。方法雄性SD大鼠,行双侧颈总动脉结扎术,术后4h、24h、3d、7d、2周、4周、8周分别取脑组织进行超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的检测,在脑缺血2周、4周、8周时进行Morris水迷宫实验。结果Morris水迷宫实验结果表明,各缺血组大鼠在学习记忆功能上较对照组有显著减退,表现在逃避潜伏期[从(8.68±1.32)s延长至(23.95±4.76)s,P<0.05]和游泳路径[从(171.99±23.12)cm延长至(573.68±124.22)cm,P<0.01]均明显延长,缺血8周时仍不能恢复,表明双侧颈总动脉结扎所致的慢性脑低灌注状态可引起大鼠学习记忆功能明显下降。自由基代谢相关检测结果表明,缺血4h起,大鼠皮层SOD活性显著降低[从(257.97±10.79)Nu/mg蛋白降至(152.68±38.26)Nu/mg,P<0.01],MDA含量明显升高[从(2.95±0.34)nmol/mg蛋白升至(5.31±1.68)nmol/mg,P<0.05],缺血8周时仍不能完全恢复。结论双侧颈总动脉永久结扎后形成的脑部慢性低灌注状态可导致脑组织自由基代谢紊乱,并进一步引起学习记忆功能减退。

低灌注兔模型脑血流动力学的多层螺旋CT灌注成像研究

目的探讨多层螺旋CT在实验性低灌注兔模型脑血流动力学研究中的价值。方法健康新西兰大白兔16只,随机分成正常对照组6只及低灌注模型组10只。采用结扎双侧颈总动脉及右侧椎动脉的方法,创建实验性低血流灌注模型。所有兔在术后4-6小时行CT平扫选择显示上矢状窦最大的两个层面,经股静脉以2ml/s速率注入造影剂行头颅CT灌注扫描,经后处理获得灌注图像。对感兴趣区平均脑血流量、平均脑血容量及达峰时间等血流动力学参数进行测量与分析。取兔脑与CT灌注扫描相对应层面的切片行HE染色。结果低灌注模型组大白兔脑组织CBV为（20.43±2.88）ml·100mg^-1,CBF为（45.75±9.96）ml·min^-1·100mg^-1,TP为（2.61±0.29）s;正常对照组CBV为（33.37±11.06）ml·100mg^-1,CBF为（58.85±20.58）ml·min^-1·100mg^-1,TP为（2.08±0.20）s;统计学分析表明,两组研究对象间的三个参数均具有显著性差异,且TP对低灌注模型组脑血流动力学参数变化的反映更加敏感。结论结扎双侧颈总动脉及单侧椎动脉制作兔低血流灌注模型稳定可靠。经股静脉团注对比剂行CT灌注扫描可较敏感地反映低灌注模型脑组织的血流动力学状态,为缺血性脑梗死的早期预防和诊断、治疗提供重要信息。

白藜芦醇通过AKT/mTOR信号通路改善慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍

目的探究白藜芦醇对慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍的改善作用,以及AKT/mTOR信号通路在其中的调控机制。方法采用永久结扎双侧颈总动脉法制作慢性脑低灌注大鼠模型。随机将大鼠分为假手术组、慢性脑低灌注模型组、白藜芦醇+慢性脑低灌注组,每组30只。采用Morris水迷宫定向航行试验和空间探索试验评价大鼠认知功能;采用神经功能缺损评分测试大鼠行为学;采用HE染色观察大鼠额颞叶皮层、海马区病理学改变以及神经元丢失情况;采用TUNEL染色检测神经元凋亡;采用Western blotting检测AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达情况。结果白藜芦醇能改善由于长期低灌注造成的大鼠行为学损伤以及认知功能障碍。白藜芦醇治疗后,海马萎缩现象得到改善,神经元丢失和形态学异常现象得到缓解;大鼠神经元细胞凋亡率下降,抑制慢性低灌注大鼠脑组织AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达。结论白藜芦醇对慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍具有改善作用,这种作用可能是通过AKT/mTOR信号通路调控的。

远志汤对慢性脑低灌注大鼠认知功能及海马凋亡蛋白的影响

目的观察远志汤对慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力及海马凋亡蛋白的影响。方法采用永久结扎大鼠双侧颈总动脉法造模。将42只SD大鼠采用数字表法随机分为正常对照组,模型组,假手术组,远志汤高、中、低剂量组[20、10、5 g/(kg·d)]及阳性药物对照组[盐酸多奈哌齐0.52 mg/(kg·d)],每组各6只,分别灌胃给药,1次/d,给药4周。通过Morris水迷宫定位航行实验及空间探索实验,观察远志汤对慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力的影响;通过免疫荧光染色法检测远志汤对慢性脑低灌注大鼠海马凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白抗体(Bcl-2 associated X protein,Bax)及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)表达的影响。结果模型组大鼠较对照组和假手术组的逃避潜伏期和搜索距离明显延长(P<0.01),在原平台所在象限的搜索时间明显缩短(P<0.01)。而远志汤各剂量干预均可明显缩短大鼠的逃避潜伏期和搜索距离(P<0.01),并延长在原平台所在象限的搜索时间(P<0.01)。模型组大鼠海马Bax和Caspase-3的表达较对照组和假手术组增加,差异有统计学意义(P<0.05),Bcl-2则显著下降,差异有统计学意义(P<0.01)。而远志汤高、中剂量组干预均可明显减少Bax和Caspase-3的表达(P<0.05),增加Bcl-2的表达(P<0.05)。结论远志汤可能通过调节海马凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达以改善慢性脑低灌注大鼠的认知功能。

丁苯酞注射液对慢性脑低灌注状态大鼠前脑线粒体超微结构及ATP酶活性的影响

目的:观察丁苯酞注射液对慢性脑低灌注状态大鼠前脑线粒体超微结构及ATP酶活性的影响。方法:雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组,生理盐水组,丁苯酞组。术后第4周,生理盐水组腹腔注射生理盐水;丁苯酞组腹腔注射丁苯酞注射液。治疗4周后,观察电镜下线粒体超微结构改变;提取线粒体,测定线粒体成分的ATP酶活性。结果:电镜观察表明丁苯酞组线粒体超微结构的破坏明显比生理盐水组轻。丁苯酞组的Na-K-ATP酶活力明显高于生理盐水组(P<0.01),丁苯酞注射液可明显增加线粒体ATP酶活性。结论:丁苯酞注射液对慢性脑低灌注状态下线粒体结构和功能具有一定保护作用。

颈内动脉粥样硬化斑块及脑组织低灌注相关指标与分水岭脑梗死的关系

目的研究颈内动脉粥样硬化斑块及脑组织低灌注相关指标与分水岭脑梗死的关系。方法(1)分别对68例分水岭脑梗死患者(A组)和72例颈内动脉TIA患者(B组)进行颅内外多普勒、头部MRI、MRA检查,并记录两组患者颈内动脉系统粥样硬化斑块的部位、性质和不同狭窄率出现患病率。(2)对梗死组中38例重度狭窄患者(C组)和对照组中32例重度狭窄患者(D组)的血液流、血脂、血糖、纤维蛋白原、发病时血压、左心室射血指数、颅内侧支循环开放等指标进行比较。结果(1)A组颈内动脉系统粥样硬化斑块检出率为97.05%、以大脑中动脉(79.41%)、软斑(67.64%)、重度狭窄(58.88%)患者为常见,与B组(75.00%、36.11%、43.05%、44.44%)比较有显著差异(P<0.05);其中A组狭窄率越大,分水岭脑梗死患病率越高(χ2=8.47,<0.05)。(2)C组与D组之间甘油三脂、低密度脂蛋白、全血粘度高切、血浆粘度、餐后2h血糖、纤维蛋白原比较有显著差异(P<0.05);左心室射血指数、发病时收缩压、颅内侧支循环开放率比较有显著差异(P<0.005)。结论分水岭脑梗死与颈内动脉系统粥样硬化斑块及性质关系密切,与狭窄率呈正向关系,其中以大脑中动脉多见。并存的低灌注相关因素是诱发分水岭脑梗死的主要原因,但较少发生在侧支循环开放丰富的患者。

慢性脑低灌注致大鼠持续性学习记忆受损及海马神经血管单元改变

目的观察在大鼠慢性脑低灌注(chronic cerebral hypoperfusion,CCH)模型中海马神经血管单元变化的特点,探讨海马神经血管单元变化与CCH致大鼠学习记忆受损的关系。方法取220~250 g SPF级8周龄SD雄性大鼠44只,按随机数字表法分为CCH组(n=24)和对照组(n=20)。CCH组通过永久性结扎双侧颈总动脉建立CCH模型,对照组不结扎。各组大鼠分别于术后4、12周通过旷场实验、物体辨别实验和Morris水迷宫实验检测自主探索行为反应和学习记忆功能,双重免疫荧光标记检测大鼠海马星形胶质细胞足突水通道蛋白-4(aquaporin-4,AQP4)和血管基底膜CollagenⅣ的共表达,透射电镜观察大鼠海马神经血管单元超微结构改变。结果与对照组比较,4周和12周CCH组大鼠:(1)物体辨别指数明显下降[(0.86±0.14)vs(0.71±0.16),P<0.05;(0.83±0.19)vs(0.64±0.10),P<0.05],定位航行及空间探索逃避潜伏期均显著延长(P<0.05);(2)海马星形胶质细胞足突AQP4[(1.94±0.80)vs(1.10±0.41),P<0.05;(2.05±0.51)vs(0.96±0.50),P<0.01]、血管基底膜CollagenⅣ[(6.90±2.42)vs(4.25±1.01),P<0.05;(6.63±2.20)vs(3.66±1.22),P<0.01]表达显著降低,二者的共表达比例[(0.94±0.02)vs(0.91±0.01),P<0.01;(0.91±0.01)vs(0.89±0.01),P<0.01]均明显减少;(3)超微结构显示海马星形胶质细胞足突与血管基底膜明显解离,胶质血管连接及神经血管单元明显破坏。结论慢性脑低灌注所致大鼠持续性学习记忆功能受损可能与海马神经血管单元的破坏有关。

脑低灌注与脑梗死的关系分析

目的:了解低灌注对脑梗死形成的影响,探讨如何保证正常的脑灌注,减少脑梗死的发病率的方法。方法:对60例低灌注性脑梗死患者的病因情况进行回顾性调查,了解各种原因导致的脑组织低灌注与脑梗死的关系。结果:60例低灌注脑梗死中,有重大手术者9例,占15.0%;发热、大量出汗后21例,占35.0%;急性胃肠炎、脱水者4例,占6.7%;需限水、限食、甚至禁食者11例,占18.3%;过量服用降压药物者15例,占25.0%。所有梗死部位均为分水岭梗死。结论:低灌注是导致脑梗死的危险因素,应当维持正常的脑灌注量、进行个体化治疗,以减少脑梗死的发生。

慢性脑低灌注大鼠海马BDNF的表达与认知功能损害

目的 观察慢性脑低灌注大鼠认知功能损害与海马脑源性神经营养因子 (Brain derivedneurotrophicfactor,BDNF)表达的关系。方法 通过结扎大鼠双侧颈总动脉 ,制成慢性脑低灌注模型 ,分缺血 6周组和 4月组及相应假手术组 ,在相应时间点用三等份MG 2Y型迷宫法测定大鼠学习记忆能力。用免疫组化S P法检测 4组大鼠海马中BDNF的表达 ,在光镜下测其平均光密度。结果 显示手术组与假手术组相比学习记忆能力明显下降 ,慢性脑低灌注大鼠缺血 4月组与缺血 6周组相比学习记忆能力也下降 (P <0 0 5 )。缺血 4月组大鼠海马BDNF表达的平均光密度值与Y型迷宫实验正确次数间存在正相关 (r=0 782 5 ,P <0 0 5 )。结论 表明在慢性脑低灌注状态下 ,大鼠学习记忆能力随海马BDNF表达的下降而下降 ,内源性BDNF可能通过对突触传递和认知功能有内在保护作用。

慢性脑低灌注对血脑屏障的影响

目的 通过建立一种新的慢性脑低灌注动物模型 ,探讨慢性脑低灌注对血脑屏障的影响以及正常灌注压突破 (NPPB)发生的组织学基础。方法 2 1只 SD大鼠随机分组 :假手术组、模型组动物按动静脉分流术后不同时间点 (12 h、2 4 h、72 h、1w、3w、3m )分组。采用免疫组化方法 ,研究慢性脑低灌注状态下 VEGF蛋白表达的时程变化、血管生成和星形胶质细胞反应。结果 VEGF蛋白表达主要位于血管内皮细胞胞浆 ,在假手术组动物脑组织中呈低水平表达 ,模型组动物脑组织中 VEGF蛋白表达于术后 2 4 h开始升高 ,1w达高峰 ,持续表达到术后 3w ,3m恢复到基础水平。模型组动物脑组织中微血管数量于术后 1w开始明显增加 ,一直维持到术后 3m ,而星形胶质细胞未见明显的增生反应。结论 慢性脑低灌注可持续性诱导 VEGF蛋白表达 ,并与血管生成有一定关系 ;血管生成与星形胶质细胞反应不协调影响了血脑屏障的结构完整性 ,可能是导致 NPPB的一个重要因素。

慢性低灌注大鼠血清及脑组织中ICAM-1、NF-κBp65、TNF-α及IL-1β的表达

目的观察慢性低灌注大鼠脑组织中细胞间粘附因子-1(ICAM-1)、核因子κB p65(NF-κB p65)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)的表达,探讨炎性细胞因子在慢性低灌注致血管性痴呆发病中的可能机制。方法 Wistar大鼠180只,随机分为正常对照组、假手术对照组和模型组,通过永久性结扎大鼠的双侧颈总动脉导致前脑缺血建立慢性低灌注动物模型,在术后1d、3d、7d、14d、1m、2m、3m、4m的时间点,采用免疫组化、RT-PCR、ELISA的方法,观察大鼠的血清及脑组织中ICAM-1、NF-κBp65、TNF-α、IL-1β的病理演变及表达水平。结果模型组大鼠学习记忆能力随缺血时间的延长减退越明显。缺血1m后,白质髓鞘脱失、间质疏松呈空泡样改变逐渐明显,以胼胝体及脑室周围白质明显。免疫组化染色证实ICAM-1、NF-κBp65、TNF-α及IL-1β高表达,缺血早期以皮质及海马等部位多见,后期以白质的表达最为显著,见于脑室周围白质、胼胝体等区域。NF-KBp65 mRNA在缺血后7d时最高;ICAM-1 mRNA在缺血后3d最高,随后逐渐下降,在缺血3m时表达再次升高。ELISA显示TNF-α在大鼠脑组织及血清中均出现两次高表达,且脑组织中的表达滞后于血清中的表达,但组织中蛋白的表达量远高于血清中的表达。结论 (1)慢性持续性脑低灌注可导致大鼠出现进行性认知功能障碍。(2)炎性细胞因子ICAM-1、NF-κBp65、TNF-α及IL-1β的慢性持续性高表达可能在慢性缺血致血管性痴呆病理损伤过程中起了一定的作用。

米诺环素对慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力及海马BACE-1和Aβ表达的影响

目的观察米诺环素对慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力及海马BACE-1和Aβ表达的影响,为慢性脑低灌注认知功能障碍的治疗提供依据。方法 72只SD大鼠随机分为假手术组、慢性脑低灌注组、米诺环素治疗组。结扎双侧颈总动脉建立大鼠慢性脑低灌注模型,米诺环素治疗组在慢性脑低灌注模型的基础上连续给予50mg/kg/d的米诺环素灌胃。观察时间点分别为造模后1个月、2个月和3个月。采用Morris水迷宫对大鼠进行定位航行潜伏期和空间探索时间检测后,断头取脑,采用免疫组织化学法检测海马区脑组织BACE-1和Aβ。结果在造模后1个月、2个月和3个月时间点,模型组定位航行潜伏期较假手术组明显延长(P<0.05,P<0.01),空间探索时间明显减少(P<0.01);治疗组潜伏期较模型组明显缩短(P<0.05,P<0.01),空间探索时间明显增加(P<0.05,P<0.01)。模型组BACE-1和Aβ的表达较假手术组明显增加(P<0.01),治疗组BACE-1和Aβ的表达较模型组显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论米诺环素能改善慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力,其作用机制可能与其抑制慢性脑低灌注大鼠BACE-1的表达,减少Aβ的产生有关。