脂氧素受体激动剂BML-111减轻佐剂诱导的关节炎

目的观察脂氧素受体激动剂BML-111对大鼠佐剂诱导的关节炎(adjuvant arthritis,AA)病理改变及炎症因子表达的影响。方法♂SD大鼠足跖部注射弗氏完全佐剂诱导建立AA动物模型,脂氧素受体激动剂BML-111于造模后每日腹腔注入。观察AA大鼠足爪肿胀情况并给予定量临床评分;取病变关节切片HE染色后,光学显微镜下观察关节组织病理改变;EILSA法检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)浓度。结果BML-111处理降低AA大鼠关节临床病变评分并减轻关节组织病理损伤,这一效应伴有血清中TNF-α和IL-6浓度明显降低。结论脂氧素受体激动剂BML-111可减轻佐剂诱导的大鼠关节病变,提示脂氧素可调节免疫介导的慢性炎症过程,在关节炎等慢性炎症性疾病中有潜在应用价值。

风湿壮骨胶囊对佐剂诱导的大白鼠关节炎的作用

目的 :考察风湿壮骨胶囊对大白鼠原发性和继发性关节炎的作用。方法 :采用弗氏完全佐剂诱导的大白鼠多发关节炎为模型 ,观察其致炎后不同时间 ,左 (右 )后跖肿胀情况。结果 :对原发病关节炎、继发性关节炎有明显的消肿抗炎作用。

木樨草素对弗氏佐剂诱导大鼠关节炎的改善作用及其机制

目的:探讨木樨草素对佐剂诱导大鼠关节炎的改善作用及其可能机制。方法:采用佐剂注射大鼠左足建立关节炎模型,分为正常对照组、弗氏佐剂性关节炎(AA)组、双氯芬酸钠(DS)组、木樨草素20(Lu 20)组和Lu 40组,每组10只。实验第21~28天,每日DS组大鼠口服双氯芬酸钠5 mg/kg,Lu 20组和Lu 40组分别口服木樨草素20 mg/kg和40 mg/kg。采用排水法检测大鼠左后足踝关节体积(HPV),酶联免疫法检测大鼠血清及滑膜液中细胞因子水平,观察大鼠滑膜病理改变,采用蛋白印迹法检测大鼠滑膜组织HMGB1/TLR/NF-κB相关蛋白表达。结果:AA组注射弗氏佐剂后第7、14、21天左后足HPV进行性升高,与正常对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。注射佐剂后第28天Lu 20组、Lu 40组及DS组大鼠左后足HPV明显减小,与AA组相比,差异均有统计学意义(P<0.01),但Lu 20组、Lu 40组、DS组3组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组相比,AA组大鼠血清及滑膜液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。Lu 20组、Lu 40组及DS组大鼠血清及滑膜液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平明显低于AA组,差异均有统计学意义(P<0.01),而Lu 20组、Lu 40组、DS组3组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。AA组大鼠踝关节出现明显的滑膜水肿、炎性细胞浸润、上皮变性和关节软骨糜烂。与AA组相比,Lu 20组、Lu 40组及DS组大鼠关节滑膜水肿、炎性细胞浸润、上皮变性及关节软骨糜烂明显减轻。Lu 20组、Lu 40组、DS组病理改变无明显差异。与正常对照组比较,AA组大鼠滑膜组织中HMGB1、TLR4、MyD88、p-NF-κB-p65(P-P65)和p-IκBα蛋白表达水平显著上调;与AA组比较,Lu 20组、Lu 40组及DS组大鼠滑膜组织中上述蛋白水平明显下调,而Lu 20组、Lu 40组、DS组之间无明显差异。结论:木樨草素可显著改善佐剂诱导的大鼠关节炎,其机制可能与调控HMGB1/TLR/NF-κB相关蛋白有关。

挂金灯活性部位对佐剂诱导性大鼠类风湿关节炎症的影响

目的:研究挂金灯活性部位对佐剂诱导性大鼠类风湿关节炎症的影响。方法:采用大鼠足趾注射完全费氏佐剂复制大鼠类风湿关节炎模型,观察挂金灯活性部位对大鼠类风湿关节炎症的影响。结果:挂金灯活性部位高、中、低浓度组对大鼠体质量的影响相对都较轻,以高剂量组治疗效果明显;挂金灯活性部位高、中、低剂量组均可以减轻费氏完全佐剂引发的大鼠足趾肿胀,其中高剂量组抑制作用最强。结论:挂金灯活性部位对AA大鼠有明显的抗炎消肿作用,能减轻或减缓炎性反应,具有减轻关节肿胀、不良反应低的特点。

胶原诱导的关节炎和佐剂诱导的关节炎大鼠模型的制备

目的制备实用性的胶原诱导的关节炎(CIA)和佐剂诱导的关节炎(AA)动物模型。方法采用牛Ⅱ型胶原蛋白溶于0.5mol/L醋酸中,加入等量弗氏不完全佐剂混匀乳化配成牛Ⅱ型胶原蛋白乳剂和灭活卡介苗溶于弗氏不完全佐剂中配成弗氏完全佐剂分别足跖皮内免疫Wistar大鼠,第21天加强免疫,利用YLS-7B足趾容积测量仪测量大鼠足部体积,利用PLANMECA TNTRAX线摄片机对大鼠足部拍摄,然后进行大鼠后足的近端趾间和跖趾关节病理观察。结果CIA加强组和AA高剂量组大鼠免疫足出现明显的红肿,且肿胀足体积与正常对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01);X线和病理HE染色结果亦显示,关节组织呈现关节间隙狭窄、滑膜纤维组织增生、软骨及骨的破坏等病变。结论经改进的CIA和AA大鼠模型呈现典型的关节病变的特征,可为进一步研究人类类风湿性关节炎的发病机制和新药研发提供良好实用性动物模型。

雌性Lewis大鼠佐剂诱导关节炎模型的建立与评价

目的建立佐剂诱导关节炎(adjuvant-induced arthritis,AA)大鼠模型及其评价方法。方法将20只雌性Lewis大鼠随机分为AA模型组和对照组,每组10只。在模型组大鼠右后足趾皮内注射完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)建立AA模型,对照组则注射生理盐水。通过动物体质量、机械痛阈(mechanical withdraw threshold,MWT)、后足容积、关节炎指数(arthritis index,AI)评分及全血白细胞计数(white blood cell count,WBC)和血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR)等指标对模型进展进行评价。分别在建模后第14,28天取材进行踝关节组织病理学检查,并测定大鼠肝脏、脾脏及胸腺质量对于体质量的相对质量。结果AA模型大鼠注射CFA后可出现多发性关节炎,其病程呈阶段性特点。注射后第1-14天为急性期及相对缓解期,主要表现为注射足机械痛阈降低(P<0.001)、足容积增加(P<0.001)以及AI评分的升高(P<0.001),血液学检查可见WBC升高(P<0.001)和ESR加快(P<0.001);至建模第14天时模型大鼠肝脏(P<0.01)、脾脏(P<0.05)及胸腺(P<0.05)相对质量均显著高于对照组,注射足踝关节HE染色则以炎症表现为主;第15-28天为模型病程进展的慢性期,特征性表现为开始出现对侧足的疼痛(P<0.05)和肿胀(P<0.05),此阶段AI评分进一步升高(P<0.001),体质量减轻(P<0.05),WBC与ESR水平仍显著高于对照组(P<0.001),注射足踝关节出现结构的破坏。结论成功建立了AA大鼠模型及模型的评价方法。

CD40单克隆抗体佐剂诱导的T细胞应答

以纯化重组蛋白为免疫原的疫苗均有免疫原性不强的缺点,传统铝盐佐剂是弱佐剂,只能增强部分抗原的免疫原性,且主要诱导TH2型免疫应答,不能对细胞内感染产生有效的免疫应答,因而需要探索能够诱导TH1型免疫应答的新型佐剂.

新疆地产全蝎对佐剂性关节炎大鼠抗炎作用研究

目的:观察地产全蝎(Scorpio)对佐剂性关节炎模型大鼠的关节肿胀及免疫、炎症因子变化。方法:建立弗氏完全佐剂模型,60只大鼠随机分为正常组、模型组、全蝎高、中、低剂量组(1.04、0.52、0.26 g·kg^(-1))、阳性组,灌胃给予相应药物干预,期间测量大鼠体质量、足跖直径,最后检测脏器指数,采用ELISA法检测血清TNF-α、IL-6、MMP-3、IL-1β、IL-10水平。结果:与正常组相比,模型组及治疗组大鼠体质量显著降低(P<0.05),与模型组相比,全蝎高中剂量组和阳性组大鼠足跖直径显著降低(P<0.05);与正常组相比,模型组大鼠的胸腺指数和脾指数显著升高(P<0.05),与模型组相比,全蝎低剂量组和阳性组的胸腺指数显著降低(P<0.05),全蝎中剂量组和阳性组的脾脏指数显著降低(P<0.05);与正常组相比,模型组大鼠血清中TNF-α、MMP-3、IL-6、IL-1β水平均显著升高(P<0.05),IL-10水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,高剂量组降低MMP-3显著,中剂量组降低TNF-α、MMP-3、IL-1β、IL-6水平与升高IL-10水平显著,低剂量组降低TNF-α、MMP-3、IL-6水平显著。结论:地产全蝎能够显著改善佐剂性关节炎大鼠的右后肢足肿胀程度,提高大鼠免疫力,抑制炎性反应,表明其对类风湿关节炎具有一定的治疗前景。

热矿泥浴对大鼠佐剂诱导性关节炎的作用及机制

目的 观察热矿泥浴对大鼠佐剂诱导性关节炎 (AIA)的治疗效果及作用机制。方法 Wistar大鼠按AIA造模后 ,随机分为 3组 ,分别给予热矿泥浴、普通黄泥浴共 19d ,空白对照组则不予处理。连续观察关节炎症积分 ,第 30天取标本 ,检测血清肿瘤坏死因子 (TNF α)含量 ,观察关节的组织病理学改变 ,原位杂交法观察基质金属蛋白酶 1(MMP 1)和细胞间粘附分子 (ICAM 1)mRNA在关节滑膜和软骨中的表达。结果热矿泥浴能显著降低AIA的关节炎症的程度 ,包括炎症积分、组织切片的滑膜细胞增生和软骨侵袭。热矿泥浴还能显著降低血液中的TNF α含量 ,抑制滑膜和软骨细胞的MMP 1mRNA以及软骨细胞ICAM 1mRNA的表达。普通黄泥浴也能抑制软骨细胞的ICAM 1mRNA的表达。结论 热矿泥浴能显著抑制大鼠AIA的关节炎症 ,其机制与抑制TNF α的产生以及MMP 1和ICAM 1在滑膜和软骨中的表达有关 ,且这种作用不单纯是泥浴的物理作用 。

补阳还五汤对诱导性佐剂关节炎大鼠的药理作用研究

目的:探讨补阳还五汤对诱导性佐剂关节炎大鼠的药理作用研究。方法:采用大鼠足跖注射Freundi′s完全佐剂形成佐剂性关节炎(AA),观察补阳还五汤对病鼠超敏反应与左右足跖厚度、血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)、循环免疫复合物(CIC)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化。结果:与模型组比较,注射佐剂的大鼠右后跖从第2d开始肿胀,持续15d(原发性损害),补阳还五汤260 g生药/kg.d,连续15d能抑制大鼠足肿胀的程度,对大鼠胸腺指数和脾脏指数有升高作用;并能降低TNF-α、IL-2、CIC和PGE2含量及抑制超氧化物歧化酶(SOD)活性的释放(P<0.001)。结论:补阳还五汤能抗佐剂性关节炎(AA)并能降低致炎因子和相关炎症介质,其抗炎机制可能是通过抑制TNF-α、IL-2、CIC和PGE2含量及提高超氧化物歧化酶(SOD)的含量而发挥抗炎作用。

改良弗氏完全佐剂制备大鼠类风湿性关节炎模型

[目的]建立改良弗氏完全佐剂制备大鼠类风湿性关节炎模型。[方法]将液体石蜡、Tween80按3︰1的比例混合均匀,高压灭菌后4℃保存,使用时加入卡介苗(10mg/ml)、Ⅱ型胶原纤维(5mg/ml)配制成弗氏完全佐剂(CFA),充分研磨混匀乳化后,取0.1ml注射于大鼠左后足垫皮内致敏。[结果]AIA大鼠致炎后15h,致炎侧足肿胀达高峰,表现为早期的炎症反应,持续2～3d逐渐减轻,7～8d后再度肿胀,继发病变于致炎后10d左右出现,表现为对侧和前足肿胀,且进行性加重,大鼠行动不便,体重下降,表现类似人类RA,造模成功。[结论]改良弗氏完全佐剂可成功制备大鼠类风湿性关节炎模型。

佐剂型类风湿关节炎模型改良与DDR2表达的研究

目的 建立更加简便实用的类风湿关节炎模型 ,为类风湿关节炎发病机制的研究提供良好的实验材料 ;观察盘状结构域受体 2 (DiscoidinDomainReceptor2 ,DDR2 )在类风湿模型动物早期的表达 ,为探讨DDR2与类风湿关节炎滑膜细胞损伤的关系提供依据。方法 放射影像学、酶联免疫检测和免疫组织化学。结果 从病理学、影像学、血清学及临床特征观察模型的改良情况 ,符合类风湿关节炎临床特征的个体达到 85 %以上 ,且建模时间明显缩短 ;免疫组化显示 ,DDR2免疫反应阳性产物定位于关节囊滑膜细胞和滑膜下层细胞的胞膜和胞浆。结论 经改良的佐剂型类风湿关节炎模型优于常规的动物模型 ;

人用疫苗佐剂的安全性

从铝佐剂诞生至今,佐剂发挥着免疫调节、抗原递送的作用。新型人用疫苗佐剂陆续批准上市,以弥补疫苗免疫原性较弱的缺点。然而,人体免疫系统、病原体、佐剂之间的作用机制尚未完全清楚,佐剂诱导的自身免疫/炎性综合征(autoimmune/inflammatory syndrome induced by adjuvants,ASIA)及相关不良反应,限制了人用疫苗佐剂的大量使用,这些均引起了人们对佐剂安全性的高度关注。现就7种已上市人用疫苗佐剂(铝佐剂、MF59、AS03、ISA51、病毒体佐剂、AS01及AS04)的作用机理、应用情况及其安全性问题作一阐述,为新型人用疫苗佐剂合理、可靠的分析与评价提供思路。

类风湿关节炎动物模型研究进展

类风湿关节炎是一种多发性自身免疫性疾病,多累及关节,最终会导致关节的畸形,在自然病程中,10年致残率可超过60%,严重影响生活质量。类风湿关节炎的动物模型在其发病机制、治疗方法、治疗靶点等方面的研究中发挥重要作用。本综述主要介绍几种常见类风湿关节炎动物模型的构建方法、发病机制及其应用,以便在今后的疾病研究中选择合适的动物模型。

脂氧素抑制关节炎大鼠滑膜及IL-1β刺激的RSC-364细胞中VEGF的表达

目的探讨在体内外脂氧素A4（lipoxin A4，LXA4）对血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达的影响及其可能机制。方法SD雄性大鼠（6-8周龄，200-250 g，32只）分为正常对照组、BML-111单独处理组（BML-111）、佐剂诱导的关节炎（adjuvant arthritis，AA）模型组及BML-111干预组（AA＋BML-111），每组8只。AA组通过左后足跖部注射弗氏完全佐剂诱导建立AA动物模型，AA＋BML-111组于造模后每日腹腔注入LXA4受体激动剂BML-111。28 d后，取病变关节滑膜组织，匀浆后ELISA法检测VEGF水平，免疫印迹法检测VEGF受体2（VEGFR2）总蛋白水平及磷酸化水平。体外培养RSC-364大鼠成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocyte，FLS），采用白细胞介素-1β（interleukin 1β，IL-1β）诱导VEGF表达，加入空白溶剂或不同浓度LXA4（1-100 nmol/L）共同孵育24 h后，ELISA法检测上清液中VEGF水平，免疫印迹法检测P38、JNK和ERK的总蛋白水平及磷酸化水平，免疫印迹法检测缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factors 1α， HIF-1α）蛋白含量。结果在AA大鼠滑膜组织，BML-111明显降低VEGF水平（P〈0.01），对VEGFR2表达无明显影响，但显著降低磷酸化VEGFR2的水平（P〈0.01）。在FLS细胞，LXA4剂量依赖性抑制IL-1β诱导的VEGF表达（P〈0.01），显著降低P38（P〈0.05）、JNK和ERK磷酸化水平（P〈0.01），下调HIF-1α含量（P〈0.01）。结论LXA4可能通过抑制MAPK、HIF-1α下调RSC-364细胞中IL-1β诱导的VEGF表达，影响AA大鼠模型中血管新生和血管翳的形成。

赤雹根总皂苷对大鼠肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的通过观察赤雹根总皂苷(TSTR)对完全弗氏佐剂(FCA)诱导性关节炎(AA)大鼠肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响。方法 SPF级,雄性SD大鼠60只,采用随机数字表法,取10只作为空白组,其余大鼠均于右后足跖部,皮下注射FCA0. 1 ml建立AA模型大鼠,于注射FCA后第18天,评价大鼠关节炎指数(AI),将AI值≥6定义为造模成功,将模型大鼠随机分为模型组、TSTR 40,80,160 mg/kg组和雷公藤多苷(TG)12 mg/kg对照组,各药物组均灌胃给予相应药物21 d。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中TNF-α含量;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠足趾中TNF-αmRNA表达水平;免疫组化法检测脾脏中TNF-α蛋白表达水平。结果给药后,空白组和TSTR各剂量组血清TNF-α含量、足趾中TNF-αmRNA的表达水平、脾脏中TNF-α蛋白表达水平均显著低于模型组(P<0. 01,P<0. 05)。结论 TSTR对AA大鼠的治疗作用与抑制TNF-α的表达有关。

Slit2在类风湿性关节炎大鼠滑膜的表达与益赛普对其干预的影响

目的探讨Slit2表达在类风湿性关节炎大鼠滑膜中的作用及益赛普对类风湿性关节炎大鼠滑膜Slit2表达的影响。方法用弗氏完全佐剂皮下注射建立佐剂性关节炎模型,其中8只造模14 d后予益赛普治疗,取正常、模型及治疗组膝关节组织进行HE染色及免疫组化观察Slit2的表达。结果模型组病理学积分明显高于正常组,Slit2在佐剂性关节炎大鼠滑膜表达水平显著增加,且与时间相关,通过益赛普治疗后病理学积分减少,Slit2表达下调。结论 Slit2蛋白可能在大鼠佐剂性关节炎的发生发展中发挥着重要作用,益赛普可以下调Slit2蛋白的表达。

艾灸对佐剂性关节炎模型大鼠心功能及TGF-β_1/Smads信号通路的影响

目的探讨艾灸对弗氏完全佐剂(CFA)诱导的佐剂性关节炎(AA)模型大鼠的疗效及对心功能、TGF-β_1/Smads信号通路的影响。方法 80只大鼠随机分成正常对照组、模型对照组、雷公藤多苷片(TPT)组和艾灸组,每组20只。采用CFA造模,造模成功后正常组和模型组均不做任何处理,TPT组按体重给予TPT混悬液8 mg/kg灌胃,1次/日;艾灸组予以艾灸足三里、肾俞穴治疗,1次/日,每次20 min。共治疗15日。致炎前1天、治疗前、治疗后检测各组大鼠关节肿胀率、关节炎指数(AI)及心功能[包括左室收缩末压(LVESP)、左室舒张末压(LEVDP)、左室心压上升下降最大速率(±dp/dtmax)、心率(HR)];观察各组大鼠TGF-β_1、Smad2、Smad3、Smad4、Smad7 mRNA及蛋白表达。结果治疗前,与正常组比较,模型组大鼠关节肿胀率及AI明显增高(P<0.01)。治疗后,与正常组比较,模型组关节肿胀率及AI明显增高(P<0.01);模型组±dp/dtmax值、Smad7 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01),HR、LVSDP、LVEDP水平及TGF-β_1、Smad2、Smad3、Smad4 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,TPT组及艾灸组关节肿胀率及AI明显减低(P<0.01);dp/dtmax值、Smad7 mRNA及蛋白表达升高,而HR、LVSDP、LVEDP水平及TGF-β_1、Smad2、Smad3、Smad4 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01);与艾灸组比较,TPT组AI明显升高,LVSP值、-dp/dtmax值及Smad7 mRNA及蛋白表达降低,Smad2、Smad3、Smad4 mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论艾灸在降低CFA诱导AA模型大鼠的关节肿胀度、AI及改善心功能方面明显优于TPT,其机制可能与其调控TGF-β_1/Smads信号通路相关。

卡非佐米通过抑制FLS增殖对大鼠类风湿关节炎模型的作用研究

目的本研究通过第二代蛋白酶体抑制剂卡非佐米(carfilzomib,CFZ)对大鼠佐剂诱导型关节炎(adjuvant induced arthritis,AIA)的作用,研究第二代蛋白酶体抑制剂卡非佐米(carfilzomib,CFZ)对大鼠类风湿关节炎(rheu matoid arthritis,RA)的治疗作用及其机制。方法通过注射弗氏佐剂诱导SD大鼠建立AIA大鼠模型。试验分组:低剂量组(1.0mg/kg)、中剂量组(1.5mg/kg)、高剂量组(2.0mg/kg)、预治疗组(1.5mg/kg)、同时治疗组(1.5mg/kg)、模型对照组及空白对照组。观察各组大鼠后足关节情况;TRAP染色研究各组破骨细胞抑制水平;采用ELISA分析外周血IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ表达水平;采用CCK-8分析不同剂量治疗组对纤维母细胞样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的抑制水平。结果足趾观察结果显示各治疗组大鼠后足病变情况均优于模型对照组;TRAP染色结果显示,与AIA模型对照组相比,各CFZ治疗组的破骨细胞均明显受到抑制;ELISA分析显示各CFZ治疗组外周血中IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ表达显著降低(P<0.01);CCK-8结果显示3种剂量治疗组均显著抑制FLS增生(P<0.01)。结论CZF通过抑制AIA大鼠FLS增殖,降低IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ表达,调控炎症反应,达到治疗大鼠AIA的目的,CFZ是一种具有治疗类风湿关节炎潜力的药物。