皂苷及其体内代谢产物的分析方法研究进展

皂苷(saponins)是中药中重要的有效成分之一,含有该类成分的中草药种类繁多。近年来对其研究也越来越广泛和深入,研究表明该类成分在治疗多种疾病,如抗炎、抗肿瘤、祛风湿等方面都具有良好的发展前景。主要介绍了皂苷及其体内代谢产物的分析方法研究进展,以期为该类成分的进一步研究提供思路。

丹参酮类药物体内代谢产物的LC-DAD-MS鉴定

目的 丹参酮是从我国传统名贵中药丹参中分离提取的一类具有多种药理活性并具有较新结构的丹参二萜醌类化合物，主要代表成分为隐丹参酮，丹参酮IIA，丹参酮I和二氢丹参酮I。丹参酮具有抗菌消炎、抗自由基抗脂质过氧化、抗肿瘤、抑制内皮细胞产生内皮素-1以及诱导细胞的分化等多种药理学活性。本研究采用LC-DAD-ESI—MS“方法系统鉴定了隐丹参酮，丹参酮IIA，

异钩藤碱在猫体内代谢产物结构的研究

研究异钩藤碱(isorhynchophylline,Isorhy)的心血管药理效应已有较深入的研究,但在动物体内的代谢情况未见报道,本研究观察了该药在猫体内的代谢情况.方法:麻醉猫静脉注射Isorhy 10mg/kg后,在不同的时间点采血样20ml,血浆样品以氢氧化钠和乙醚预处理.将另外的猫麻醉后取其肝脏,按1∶5比例用0.2M磷酸缓冲液(pH=7.35～7 .45)匀浆后离心(15000g,4℃)20min,取上清液加Isorhy成0.2mg/ml上清液,于37℃孵化3 h后,以血浆样品同法预处理该上清液,用HPLC法测定Isorhy的体内代谢物的相对浓度.以H PLC-MS法测定Isorhy代谢物分子离子峰的质荷比(m/z);在HPLC上分离并收集代谢物的色谱峰流分,60℃减压蒸馏24小时,再用HPLC-MS测定Isorhy代谢物加热裂分化合物分子离子峰质荷化(m/z).根据m/z得出分子量(MW),推测二者的化学结构.结果:血浆样品和孵化的肝组织匀浆上清液在HPLC上有明显的代谢产物峰,二者在HPLC的保留时间相同(tR8.2±0.1min),而原药Isorhy的tR＝11.9± 0.1min.Isorhy iv给药0.5h后开始产生代谢物,相对浓度变化范围为0.38～0.89u g/ml.HPLC-MS显示Isorhy代谢产物(metabolite)的分子离子峰MW＝386,该代谢物60℃减压蒸馏24小时后样品的分子离子峰MW＝300.结论:1.异钩藤碱在猫体内有明显的代谢产物;2.猫血浆和肝脏上清液中的异钩藤碱代谢物为同一物质,提示Isorhy可能主要经肝脏代谢;3.代谢物的分子量(MW)为386,是异钩藤碱的加氢还原产物;4.代谢物的物理性质不稳定,加热会裂分为另外的化合物,其MW为300.

苯环壬酯与噻环壬酯在大鼠体内代谢产物的LC-MS鉴定

目的系统研究中枢抗M胆碱新手性药物苯环壬酯（Phencynonate）和其先导物噻环壬酯（Thiencynonate）在大鼠体内的代谢产物。方法采用LC—ESI—MS^n与离子簇技术方法，根据代谢产物质谱中的准分子离子峰[M＋H]^＋及其特征碎片峰，结合原形药物的碎片离子和ESI—MS质谱断裂规律，鉴定了苯环壬酯和其先导物噻环壬酯代谢产物可能的化学结构。

小檗碱及其体内代谢产物对高糖诱导大鼠H9c2心肌细胞损伤的保护作用

目的 探究小檗碱及其体内代谢产物对高糖诱导大鼠H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法 将H9c2心肌细胞分成对照组、模型组、正常给药组、模型给药组,对照组用无血清DMEM培养,正常给药组于无血清DMEM中加药,模型组用含50 mmol·L^(-1)葡萄糖的无血清DMEM培养(造模剂量筛选实验设置25、50、100、200 mmol·L^(-1)),模型给药组于高糖无血清DMEM中加药,加药浓度分别为小檗碱1.25、2.50、5.00、10.00μmol·L^(-1),二氢小檗碱(DHB) 0.5、1.0、2.0、4.0μmol·L^(-1),小檗红碱1.25、2.50、5.00、10.00μmol·L^(-1),非洲防己碱(COL)1.25、2.50、5.00、10.00μmol·L^(-1),巴马汀3.125、6.250、12.500、25.000μmol·L^(-1),药根碱6.25、12.50、25.00、50.00μmol·L^(-1),去亚甲基小檗碱(DEM)6.25、12.50、25.00、50.00μmol·L^(-1),处理48 h后,通过细胞增殖计数(CCK-8)法检测细胞存活率;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测经典代谢调控通路沉默调节蛋白1(Sirt1)、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α(PGC1α)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)基因水平,葡萄糖代谢相关基因丙酮酸脱氢酶激酶4 (PDK4)、葡萄糖激酶(GCK)、己糖激酶(HK2)、葡萄糖转运蛋白4(Glut4)表达水平,线粒体动力学相关基因线粒体融合蛋白2 (Mfn2)、视神经萎缩蛋白1 (OPA1)、动力学相关蛋白1(Drp1)水平及细胞凋亡相关基因天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Caspase-9、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、 B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)水平;通过Westernblotting实验检测PGC1α、 Glut4、线粒体氧化磷酸化系统(OXPHOS)蛋白表达。结果 与高糖模型组相比,小檗碱2.5、5.0、10.0μmol·L^(-1),DHB 1、2μmol·L^(-1),COL 5、10μmol·L^(-1),巴马汀12.5μmol·L^(-1),药根碱25、50μmol·L^(-1),DEM 12.5、25.0μmol·L^(-1)处理48 h的细胞存活率均显著上升(P<0.05、0.01、0.001);小檗碱、DHB、药根碱、DEM处理的心肌细胞中PDK4水平显著增加(P<0.05、0.001),小檗碱、DHB、DEM处理的心肌细胞中GCK水平显著增加(P<0.01、0.001),小檗碱、DHB、COL、巴马汀、DEM处理的心肌细胞中HK2水平显著增加(P<0.05、0.01),DEM处理的心肌细胞中Glut4水平显著增加(P <0.001);药根碱、DEM处理的心肌细胞中OPA1水平显著增加(P<0.05、0.001),小檗碱、DHB、COL、巴马汀、药根碱、DEM处理的心肌细胞中Drp1水平显著降低(P<0.01、0.001),小檗碱、DHB、药根碱、DEM处理的心肌细胞中Mfn2水平显著增加(P<0.05、0.001);小檗碱、DHB、COL处理的心肌细胞中Caspase-3水平显著降低(P<0.01、0.001),小檗碱、小檗红碱、COL、巴马汀处理的心肌细胞中Caspase-9水平显著降低(P<0.01、0.001),小檗碱、DHB、小檗红碱、COL、巴马汀、药根碱、DEM处理的心肌细胞中Bax水平显著降低(P<0.05、0.001),小檗碱、DHB、巴马汀处理的心肌细胞中Bcl-2水平显著增加(P<0.01、0.001);小檗碱及其代谢产物处理的心肌细胞中PGC1α、Glut4、OXPHOS表达均明显增加。结论 小檗碱体内代谢产物可以缓解高糖造成的H9c2心肌细胞损伤,其作用机制与调控Sirt1/PGC1α/PPARα信号通路,促进H9c2心肌细胞葡萄糖代谢、改善线粒体功能、抑制细胞凋亡有关。

小檗碱体内代谢产物对前脂肪细胞分化和脂代谢的影响

目的探究小檗碱(BBR)体内代谢产物对3T3-L1前脂肪细胞分化和脂代谢的作用。方法将3T3-L1前脂肪细胞分为对照组和BBR代谢产物处理组,用细胞增殖计数法检测细胞存活率。BBR、二氢小檗碱(DHB)、小檗红碱(BRB)、非洲防己碱(COL)、巴马汀(PAL)、药根碱(JAT)和去亚甲基小檗碱(DEM)组分别给予5μmol·L^(-1)BBR、2.5μmol·L^(-1)DHB、10μmol·L^(-1)BRB、20μmol·L^(-1)COL、25μmol·L^(-1)PAL、50μmol·L^(-1)JAT和50μmol·L^(-1)DEM处理;对照组给予正常培养。用实时荧光定量聚合酶链反应法检测脂蛋白脂肪酶(LPL)、乙酰辅酶A羧化酶A(ACACA)等mRNA的表达水平。结果DHB、COL、PAL、JAT、DEM孵育48 h与对照组相比,均不影响细胞存活率,20μmol·L^(-1)BRB可将细胞活性降至(86.55±1.99)%。培养12 d后,对照组和BBR、DHB、BRB、COL、PAL、JAT、DEM组的LPL mRNA相对表达水平分别为1.00±0.02、0.41±0.04、0.44±0.04、1.40±0.08、1.27±0.10、1.15±0.07、3.06±0.30和1.45±0.07,ACACA mRNA相对表达水平分别为1.01±0.01、0.62±0.04、0.69±0.06、1.78±0.17、4.77±0.19、4.20±0.14、6.38±0.30和1.18±0.08。BBR、DHB、JAT组的LPL mRNA相对表达水平与对照组比较,BRB、COL、PAL、JAT组的ACACA mRNA相对表达水平与对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论小檗碱体内代谢产物可以抑制脂肪细胞分化和促进脂代谢,从而减少细胞中脂质蓄积。

中药及复方体内代谢产物鉴别策略研究进展

基于中药及复方体内代谢产物鉴别的未知性和复杂性,从“识别”和“鉴定”两方面概述了近年来中药及复方体内代谢产物鉴别研究的主要方法、策略及技术,对各种方法的适用范围及存在的问题进行了阐述,并提出今后中药及复方体内代谢鉴别研究在分析仪器、分析数据软件、化学成分示踪及对照等方面的发展方向,为相关科研人员在方法选用及策略开发时提供一定的参考。

罗丹宁衍生物Lj0104在大鼠体内的代谢产物研究

目的研究罗丹宁衍生物Lj0104在大鼠体内的主要代谢产物。方法对雄性SD大鼠采用口服和静脉注射两种给药方式,给药剂量为5.0 mg/kg(口服)和1.0 mg/kg(静脉注射)。在24 h内眼眶取血,采用质谱方法对血浆中母体化合物及代谢产物进行分析。结果发现Lj0104有3种主要代谢产物。结论化合物Lj0104主要代谢为水解和羟基化产物。该研究为进一步对该化合物进行结构改造提供了实验及理论依据。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS鉴定欧前胡素在大鼠体内的代谢产物

采用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS分析鉴定欧前胡素在大鼠体内的代谢产物。大鼠灌胃给予欧前胡素后,采集血浆、尿液和粪便,以固相萃取法处理生物样品,利用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS,以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,分别采集正、负离子模式下的各样品数据,并解析欧前胡素的代谢产物,探究欧前胡素在大鼠体内的代谢途径。根据精确相对分子质量、多级质谱裂解信息以及对照品质谱裂解规律,并结合相关参考文献,共从大鼠体内检测到51个代谢产物。其中,从血浆、尿液以及粪便中分别检测到35、40、16个,其主要代谢途径为氧化、葡萄糖醛酸化、脱异戊烯基、硫酸酯化和羧基化等。该文深入研究了大鼠体内欧前胡素代谢转化情况,可为其进一步的药效学评价及开发利用提供参考借鉴。

蛋氨酸预防兔对乙酰氨基酚的肝中毒

对乙酰氨基酚（paraeetamol，APAP，又称扑热息痛），是常用的解热镇痛剂，又是非那西丁的体内代谢产物，目前全世界应用最广泛的药物之一。有报道指出，腺苷蛋氨酸（S-adenosyl-L-Methionine，SAMe）是肝脏的重要代谢产物和谷胱甘肽的前体，可治疗猫APAP中毒。本实验采用家兔为实验对象，通过提前注射SAMe，比较家兔体内对乙酰氨基酚血液浓度与血糖值，探讨SAMe在预防APAP中毒方面的机理。

急性肾衰竭诊断的一些进展

急性肾衰竭（acute renal failure，ARF）是由多种病因引起的症侯群。传统的概念是包括肾前性、肾性和肾后梗阻性因素所致的肾功能急剧坏转，体内代谢产物潴留，水、电解质及酸碱平衡紊乱临床综合征。近来美国肾脏病学会提出用急性肾损伤（acute kidney injury，AKI）一词代替ARF，其目的在于除外肾前性、肾后性等因素所引起的肾功能急剧恶化的状况。

胆道放射性核素显像

肝细胞具有多种代谢功能,许多内原性化合物(如体内代谢产物)和外原性化合物(包括肝胆显象剂在内的各种药物),均经肝细胞摄取和代谢,并随胆汁排出体外。因此,静脉注入肝胆显象剂后。

张勉之教授治疗慢性肾衰竭经验

慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)是各种肾脏疾病发展到最后阶段的临床综合征,以体内代谢产物蓄积,水、电解质及酸碱平衡失调以及全身多系统受累为主要表现。该病起病隐匿,病因复杂,临床常见恶心呕吐、腰痛、乏力、尿少、浮肿、皮肤瘙痒、贫血等症,据此本病可归属于中医虚劳、关格、癃闭、肾风等范畴。中医药在治疗CRF方面积累了丰富的临床经验,同时对延缓CRF进展有确切的疗效及特色[1]。张勉之教授是全国百名杰出青年中医,知名中医肾病专家,博士生导师,享受国务院政府特贴专家,师从国医大师张大宁教授,从事肾内科医、教、研工作多年,在补肾活血法基础上,结合长期临床和科研实践,融贯中西,不断拓展补肾活血法的理论及临床应用范围,擅长运用中西医结合治疗各种类型的肾脏疾病,积累了丰富的临床经验,疗效显著。