利用体内噬菌体展示技术筛选及鉴定肺癌特异性结合肽

目的利用体内噬菌体展示技术筛选并鉴定与肺癌特异性结合的多肽。方法用肺癌细胞A549接种裸鼠复制荷瘤动物模型,将随机肽库尾静脉注入裸鼠体内,循环15 min后取肿瘤组织中结合的噬菌体,如此进行3轮体内筛选后挑取噬菌体克隆,ELISA初步鉴定噬菌体克隆对肺癌细胞的亲和力、特异性。将阳性噬菌体克隆扩增、测序获得外源多肽氨基酸序列,化学方法合成多肽,鉴定多肽对肺癌细胞和组织的亲和力、特异性。结果ELISA结果显示,随机挑选的20个噬菌体单克隆中,1个对A549具有很强亲和力。测序获得多肽,命名为zp2。化学合成多肽zp2。竞争抑制、细胞免疫荧光和组织免疫荧光实验结果表明多肽zp2与肺癌细胞A549及肺癌组织特异性结合。结论利用体内噬菌体展示技术筛选出与肺癌细胞A549特异性结合的多肽,为肺癌诊断及治疗药物的研制奠定基础。

利用体内噬菌体展示技术筛选肝癌组织特异性结合肽

目的筛选人源肝癌组织特异性结合短肽。方法体外培养人源肝癌细胞株BEL-7402,建立荷瘤裸鼠模型。尾静脉注射噬菌体12肽文库至荷瘤裸鼠体内,循环20 m in后回收肿瘤组织中噬菌体,同时取正常对照组织进行噬菌体效价测定和免疫组化观察。将回收的噬菌体扩增、纯化,并以此作为起始物进行下一轮筛选。经过3轮体内筛选,得到与肝癌组织或细胞特异结合的肽段。随机挑选噬菌体单克隆进行测序,分析序列同源性后进行体外细胞酶联免疫吸附试验(ELISA)和体内回输实验,验证噬菌体克隆的导向性。结果经过3轮体内筛选,瘤组织中噬菌体的回收率逐步提高,回收量随着输入量的增加迅速增加,而每轮筛选肝组织中的噬菌体回收量始终保持在一个恒定范围,并不随输入量的增加而增加。免疫组化结果显示,第3轮筛选后,瘤组织中的噬菌体得到高水平富集,同时其他组织的非特异性结合降至最低。肝癌细胞特异性结合最强的是A54号单克隆,A67、B2号单克隆次之。B2的导向效果最好,A54次之。通过对噬菌体单克隆的序列分析,初步确定了PSS/PTT基序。结论利用体内噬菌体展示技术,可以成功筛选到与肝癌细胞或组织特异结合的噬菌体肽。

利用体内噬菌体展示技术进行人源肿瘤细胞特异性结合肽的筛选

目的 :寻找肿瘤细胞特异性结合肽 ,为肿瘤诊断试剂及肿瘤药物的研制奠定基础。方法 :用培养的人源肿瘤细胞使裸鼠致瘤 ,将随机肽库从裸鼠的尾静脉注射到裸鼠体内 ,循环数分钟后取肿瘤组织及正常对照组织进行噬菌体筛选 ;经过 2～ 3轮体内筛选 ,获得在肿瘤组织中富集的肽段。结果与结论 :利用体内噬菌体展示技术 ,结合人源肿瘤细胞 (SMMC_772 1和PLA_80 1D)裸鼠致瘤模型 ,从随机十二肽库中成功地筛选到可以较高特异性地结合SMMC_772 1肿瘤细胞或肿瘤血管的噬菌体多肽 ,通过对噬菌体单克隆进行测序 ,初步确定了几种可能的多肽基序(motif)。

肺癌细胞特异性结合肽的体内筛选及初步鉴定

目的筛选能与肺癌细胞特异性结合的多肽并初步鉴定其亲和力和特异性。方法用人肺癌细胞A549使裸鼠致瘤,尾静脉注射肽库。取荷瘤鼠的肿瘤组织,用体内噬菌体展示技术进行筛选;经过3轮体内筛选,获得在肿瘤组织中富集的噬菌体;利用ELISA和细胞免疫化学DAB染色法初步鉴定各克隆亲和力、特异性;对阳性克隆行DNA测序,利用生物信息学对此多肽进行分析、比对。结果随机挑选的10个单克隆中,8个均对A549细胞具有较高亲和力,其中3号克隆亲和力最高,其可特异性结合肺癌细胞A549和NCI-H1299,且对A549的亲和力强于NCI-H1299。DNA测序结果显示该序列与美国国立生物技术信息中心(NCBI)GenBank DNA序列数据库和Swiss-Prot蛋白数据库中的已知基因和蛋白无同源性。结论筛选出了能与肺癌细胞特异性结合的多肽。

2006年度中国基础研究十大新闻简介——发现一种可有效通过皮肤传送大分子药物的透皮短肽

通过皮肤给药对于像糖尿病这样需要多次重复给药的疾病具有独特的优点，其关键是如何使大分子药物能够有效透过皮肤进入循环系统。中国科技大学生命科学学院和合肥微尺度物质科学国家实验室（筹）温龙平研究组，将体内噬菌体展示技术应用于透皮研究，找到了一个由11个氨基酸组成的能高效帮助蛋白质类药物透皮的短肽（ACSSSPSKHCG）。

肝、胆

双向电泳分析肝癌细胞线粒体的差异表达蛋白；利用体内噬菌体展示技术筛选肝癌组织特异性结合肽；抗肝癌单链免疫毒素HAb25（scFv）-PE40的构建及其导向作用的实验研究；HBx蛋白羧基端缺失对肝癌细胞生物学行为的影响；反义survivin-脂质体复合物对肝癌细胞生长凋亡和细胞周期的影响；抑癌基因PTEN对肝癌细胞增殖的抑制及作用机制.