细胞毒性T淋巴细胞和T白血病细胞利用柔软性逃避穿孔素介导的杀伤

目的细胞毒性淋巴细胞(CTL)释放的穿孔素仅在肿瘤细胞膜表面打孔,而不在CTL表面形成孔洞,这种单向杀伤机制在免疫学角度尚未被阐明。穿孔素打孔既是一个化学过程,也是一个生物力学过程,细胞可利用其柔软性妨碍穿孔素打孔。方法实验室前期研究发现活化的CTL下调FLNA表达,通过柔软性逃避穿孔素介导的杀伤,这种柔软性同样被T白血病细胞用于免疫逃逸。结果和结论本研究在细胞、动物及病人3个水平结合多组学、原子力显微镜等手段,发现ZAP70介导的YAP Y357磷酸化和活化使filamin A下调来诱导柔软性的形成。并且在CTL中,耐药转运蛋白MDR1表达更高,因此CTL比恶性T细胞对YAP抑制剂更具耐药性。YAP的适度抑制使恶性T细胞变硬,但CTL仍然保持一定的柔软性,从而使CTL在杀伤恶性肿瘤细胞时避免自溶。因此,本发现揭示了一种基于机械力的针对T细胞白血病的免疫治疗策略。本研究基于生物机械力学和肿瘤免疫核心问题进行探究,揭示了T白血病细胞免疫逃逸背后的生物力学机制,为开发基于生物机械力学的新型免疫治疗奠定了理论基础。

猪源病毒细胞毒性T淋巴细胞表位研究进展

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子,也称为猪白细胞抗原(swine leukocyte antigen,SLA)Ⅰ类分子,在机体抗原递呈、器官移植、细胞免疫应答和调控等方面起重要作用。细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位是抗原经抗原递呈细胞加工后,与SLA-Ⅰ类分子结合并递呈的线性肽段,具有高度特异性,在机体抗原识别递呈和细胞免疫抵抗病毒感染方面发挥着关键作用。CTL表位能够刺激CTLs发挥细胞杀伤作用,主要表现为杀伤病毒。作者将对口蹄疫病毒、非洲猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒等几种重要的猪源病毒的CTL表位研究现状进行综述,并利用生物信息学手段分析SLA-Ⅰ与CTL表位结合基序特征,以期为今后相关猪源病毒CTL表位的研究和多表位疫苗的设计提供参考。

γδT淋巴细胞及其亚型在毒性弥漫性甲状腺肿中的分布研究

目的研究γδT淋巴细胞及其亚型在毒性弥漫性甲状腺肿(GD)中的分布并探讨γδT淋巴细胞在GD免疫学发病机制中的作用。方法选取2022年6-12月上海市嘉定区中心医院内分泌门诊确诊的GD患者59例作为GD组,另选择同期65例健康志愿者作为对照组。检测两组相关甲状腺指标[包括游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TG-Ab)、抗促甲状腺激素受体抗体(TRAb)],采用流式细胞术检测两组外周血中γδT淋巴细胞及其亚型的比例,分析γδT淋巴细胞表面活化分子CD69、HLA-DR及协同刺激分子CD40配体(CD40L)与诱导性共刺激分子(ICOS)的表达水平。结果GD组TSH水平低于对照组,FT3、FT4、TPOAb、TG-Ab、TRAb水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组γδT淋巴细胞比例比较,差异无统计学意义(P>0.05);GD组Vδ1γδT淋巴细胞比例高于对照组,Vδ2γδT淋巴细胞比例低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。GD组γδT淋巴细胞表面活化分子CD69、HLA-DR表达水平及协同刺激分子CD40L、ICOS的表达水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论GD患者外周血γδT淋巴细胞亚型改变表现为Vδ1γδT淋巴细胞比例上调与Vδ2γδT淋巴细胞比例下调,γδT淋巴细胞功能活化并表达协同刺激分子CD40L、ICOS可能是促进GD产生自身抗体及自身体液免疫应答的重要病理机制。

慢性阻塞性肺病稳定期患者外周血Treg细胞与细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4的表达及意义

目的检测吸烟者及慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA4)/B7及Treg细胞的表达,观察免疫指标在COPD外周血中的变化及临床意义。方法选择8名健康志愿者为A组(正常对照组)、8名吸烟但肺功能正常者为B组、8名轻中度慢性阻塞性肺疾病患者为C组,收集3组研究对象的外周血标本,采用流式细胞术分析方法检测各组外周血单个核细胞CD11c^(+)树突状细胞(DCs)的比例、CD11c^(+)DCs表面CD80及CD86的表达,Treg细胞(CD4^(+)CD25^(+)FOXP3^(+))及CD4^(+)CD25^(+)CTLA4^(+)的表达。结果与A组比较,B组及C组的CD11^(+)DCs、CD80(B7-1)和CD86(B7-2)表达均显著增多,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在Treg细胞表达上,与A组相比,B组及C组的Treg细胞减少(均P<0.05),而B组与C组间比较无统计学意义(P>0.05)。与A组相比,B组及C组的CTLA4^(+)细胞表达增多,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论吸烟者及COPD患者外周血中CTLA4/B7呈高表达,Treg细胞比例减少,提示吸烟所致免疫细胞异常可能参与COPD全身炎症进展过程。

艾灸干预免疫抑制兔细胞毒性T淋巴细胞抗原-4的作用效应分析

目的:比较不同艾灸干预下免疫抑制兔细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)及程序性死亡受体1(PD-1)表达变化的异同。方法:20只大耳白兔随机分为空白组、模型组、艾条灸(MSM)组与隔药饼灸(HPM)组,每组5只,连续7 d腹腔注射环磷酰胺(CTX)诱导免疫抑制模型。造模成功后分别进行MSM与HPM干预,均为隔日灸,共治疗10次。治疗结束后麻醉白兔,取血清、肝脏与脾脏,ELISA检测血清中PD-1、PD-L1含量,免疫组化法检测肝组织PD-1含量,RT-qPCR检测肝、脾组织CTLA-4 mRNA含量。结果:HPM和MSM均可降低免疫抑制下PD-1及PD-L1水平,并可有效抑制脾脏CTLA-4和肝脏PD-1、CTLA-4水平升高,与免疫抑制模型组相比差异均存在统计学意义(P<0.05),且Pearson相关性检验表明肝组织中CTLA-4与PD-1呈显著正相关(r=0.7807,P<0.001)。结论:HPM可通过调控多个免疫抑制位点改善机体免疫功能。

CHB合并EBV感染患者外周血双阴性T淋巴细胞和滤泡辅助性T细胞水平及其临床意义

目的评价慢性乙型病毒性肝炎(CHB)合并爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)感染患者外周血双阴性T淋巴细胞(DN T)、滤泡辅助性T细胞(Tfh)和CD4+T细胞水平以及CD4+/CD8+比值(CD4-CD8 Ratio)变化,并分析其与肝功能各项指标的相关性,探讨其临床意义。方法收集2021年10月至2023年8月南京中医药大学附属医院30例CHB合并原发性EBV感染患者(CHB+EBV组)、30例CHB患者(CHB组)及30名健康对照者(对照组)的外周血,采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中Tfh细胞和DN T细胞、CD4+细胞、CD8+的水平,使用生化分析仪检测肝功能指标:天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、直接胆红素(DBIL)、总胆红素(TBIL)、间接胆红素(IBIL)。结果外周血Tfh细胞水平:CHB+EBV组>CHB组>对照组,外周血DN T细胞水平:CHB组>CHB+EBV组>对照组,外周血CD4+T细胞水平:对照组>CHB组>CHB+EBV组,CD4+/CD8+比值:对照组>CHB组>CHB+EBV组,差异有统计学意义(P<0.05)。CHB+EBV组患者血液中ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL和ALP水平均明显高于CHB组和对照组(P<0.05)。相关性分析结果显示,患者外周血Tfh细胞与血液中ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL和IBIL呈正相关(P<0.05)。DNT细胞与血ALT,AST,TBIL,DBIL和IBIL呈正相关(P<0.05),但与ALP无明显相关性(P>0.05)。CD4+细胞及CD4+/CD8+值与血ALT,AST,ALP,TBIL,DBIL及IBIL呈负相关(P<0.05)。结论双阴性T淋巴细胞和滤泡辅助性T细胞参与了CHB合并EBV感染免疫进程,且与患者肝损害有关。

急性病毒性肝炎患者血清HDAC3和HDAC11表达与T细胞淋巴亚群的关系研究

目的 探究急性病毒性肝炎(AVH)患者血清组蛋白脱乙酰酶3(HDAC3)和组蛋白脱乙酰酶11(HDAC11)表达水平与T细胞淋巴亚群的关系。方法 选取2022年1月—2023年6月在秦皇岛市第三医院就诊的120例AVH患者作为研究对象(AVH组),并选择同期的120名体检健康者作为对照组。收集并比较两组的一般临床资料。检测两组血清中HDAC3、HDAC11、CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)水平。利用Pearson等级相关性分析AVH患者血清HDAC3、HDAC11水平与T细胞淋巴亚群的相关性。利用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HDAC3、HDAC11对诊断AVH的临床价值。结果 AVH组和对照组的年龄、性别和BMI无显著性差异(P>0.05)。与对照组相比,AVH组的丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、总胆红素、三酰甘油、胆固醇、低密度胆固醇显著升高(P<0.05),而AVH组的高密度胆固醇显著降低(P<0.05)。AVH组患者的血清HDAC3和HDAC11表达水平均显著高于对照组(P<0.05),CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)均显著降低于对照组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,AVH患者血清HDAC3水平与CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)均呈负相关(r=-0.458、-0.533、-0.462,均P<0.001),HDAC3表达水平与CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)均呈负相关(r=-0.473、-0.551、-0.422,均P<0.001)。ROC曲线显示,HDAC3、HDAC11及二者联合预测诊断AVH的曲线下面积(AUC)分别为0.921、0.941、0.988,血清HDAC3、HDAC11联合诊断AVH的临床应用价值高于单项指标诊断(Z_(二者联合-HDAC3)=3.672、P=0.000;Z_(二者联合-HDAC11)=3.078、P=0.002)。结论 AVH患者血清HDAC3和HDAC11表达水平升高,且与T淋巴细胞亚群存在相关性,HDAC3与HDAC11联合预测AVH的临床价值较高。

T淋巴细胞亚群和中性粒细胞/淋巴细胞比值与脓毒症严重程度的相关性分析

目的分析T淋巴细胞亚群、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)降钙素原(PCT)等炎症指标水平与脓毒症严重程度的相关性。方法采用前瞻性研究方法。选择2021年1月至2022年12月山东省淄博市中心医院重症医学科收治的78例脓毒症患者作为研究对象。将患者按病情严重程度分为脓毒性休克组(37例)和脓毒症组(41例),以同期40例本院健康体检者作为健康对照组。采用流式细胞仪测定3组受试者CD4^(+)T淋巴细胞(CD4^(+)T)和CD8^(+)T淋巴细胞(CD8^(+)T)计数水平,计算CD4^(+)T/CD8^(+)T淋巴细胞比值(CD4^(+)T/CD8^(+)T)、NLR;采用电化学发光免疫分析法测定PCT、白细胞介素-6(IL-6)水平;采用免疫散射比浊法测定C-反应蛋白(CRP)水平,记录两组患者24h内急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEI),比较各组淋巴细胞亚群及各项炎症指标的差异;采用Pearson相关性分析法分析各项指标与APACHEI的相关性。结果脓毒性休克组、脓毒症组CD4^(+)T、CD8^(+)T、CD4^(+)T/CD8^(+)T均明显低于健康对照组[CD4^(+)T计数(×10^(6)L):168.27±76.68、266.08±131.57比789.60±173.78,CD8^(+)T计数(×10^(6)/L):156.50±68.37、205.81±75.60比636.42±90.59,CD4^(+)T/CD8^(+)T:1.09±0.39、1.27±0.34比1.44±0.38,均P<0.01],NLR、PCT、CRP及IL-6水平均明显高于健康对照组[NLR:25.85±11.62、15.94±8.72比2.68±1.31,PCT(μg/L):21.82±15.28、9.09±4.96比0.13±0.10,CRP(mg/L)158.65±62.33、106.97±51.49比6.48±2.08,IL-6(ng/L):1344.64±899.21、245.31±176.99比3.25±1.83,均P<0.01];脓毒性休克组APACHEⅡ评分明显高于脓毒症组(分:32.00±1.00比22.01±1.09,P<0.05)。相关性分析显示:脓毒症患者2组的CD4^(+)T、CD8^(+)T、CD4^(+)T/CD8^(+)T水平与APACHEⅡ评分水平均呈负相关(r值分别-0.571、-0.506、-0.555,均P<0.01),NLR、PCT、CRP及IL-6水平与APACHEⅡ评分均呈正相关(r值分别0.711、0.709、0.777、0.707,均P<0.01)。结论T淋巴细胞亚群水平越低,NLR及PCT等炎症指标水平越高,脓毒症病情越严重。因此,T淋巴细胞亚群及各项炎症指标水平可作为评估脓毒症病情严重程度的标志物。

乙酰半胱氨酸雾化吸入辅助治疗对病毒性肺炎患者血清炎性因子及T淋巴细胞亚群水平的影响

目的探讨乙酰半胱氨酸雾化吸入辅助治疗对病毒性肺炎患者血清炎性因子及T淋巴细胞亚群水平的影响。方法选取医院2019年1月至2021年12月收治的病毒性肺炎患者148例,按随机数字表法分为对照组和研究组,各74例。两组患者均予奥司他韦胶囊口服治疗,研究组患者加用乙酰半胱氨酸雾化吸入,均每日2次,连用5 d。结果研究组治疗总有效率为94.59%,显著高于对照组的82.43%(P<0.05)。研究组患者发热、咳嗽、咳痰、肺部罗音的临床症状消失时间均显著短于对照组(P<0.05)。治疗后,两组患者的血清炎性因子C反应蛋白(CRP)、降钙原素(PCT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平均显著降低(P<0.05),且研究组显著低于对照组(P<0.05);两组CD_(3)^(+),CD_(4)^(+),CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)均显著升高,CD_(8)^(+)均显著降低(P<0.05),且研究组上述指标变化更显著(P<0.05)。研究组与对照组治疗期间不良反应总发生率相当(9.46%比14.86%,P>0.05)。结论乙酰半胱氨酸雾化吸入辅助治疗能有效改善患者的临床症状,降低血清炎性因子水平,改善T淋巴细胞亚群水平,且安全性高。

干扰肿瘤微环境对细胞毒性T淋巴细胞瘤体内归巢和杀伤活性的影响

目的探讨应用低剂量环磷酰胺(cyclophosphamide,CYC)干扰荷瘤小鼠体内微环境对改善过继回输的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)瘤体内归巢和杀伤活性的作用。方法建立C57BL/6荷瘤小鼠模型并分为对照组、CYC注入(CYCI)组、0.9%Na Cl溶液注入(NSI)+CTL组和CYCI+CTL组,每组40只,分别给CYCI组、CYCI+CTL组每只小鼠腹腔注入CYC(20mg/kg),NSI+CTL组小鼠注入等量0.9%Na Cl溶液。检测注射前后不同时间小鼠瘤体内调节性T细胞(Treg)、白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β)水平变化。于注射后第4天回输CFSE-CTL,每只0.2 ml,含5×l06个细胞。流式检测对比NSI+CTL组和CYCI+CTL组瘤体内CFSE-CTL比例。结果 NSI+CTL组小鼠Treg、IL-10、TGF-β水平随着瘤体增长而逐渐增高;CYCI+CTL组比NSI+CTL组回输的CFSE-CTL在肿瘤内归巢明显增加和持久(P<0.05)。各组肿瘤体积除对照组和CYCI组外,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论提前应用低剂量CYC干预荷瘤小鼠体内微环境,可降低瘤体内Treg、IL-10和TGF-β水平,使过继回输的CTL在肿瘤中的归巢聚集明显增强,杀伤肿瘤效率提高。

细胞毒性T淋巴细胞来源外泌体抑制肝星状细胞活化的机制

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞(CTL)来源外泌体能否下调HBx表达从而抑制肝星状细胞(HSC)活化。方法收集HepG2、HepGA14、CTL细胞上清液提取外泌体(分别简写为NC-exo、HBV-exo、CTL-exo),透射电镜观察其形态,Western Blot检测外泌体标志物CD63和TSG101的表达。将氟硼二吡咯染料(BODIPY)标记的NC-exo、HBV-exo以及CTL-exo与HBV-exo按不同比例混合后,分别与HSC LX-2(HSC-LX2)共培养,荧光显微镜观察外泌体能否进入LX-2细胞,倒置显微镜观察细胞形态学改变,实时荧光定量PCR(qPCR)检测LX-2细胞中TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen1)等活化生物标志物的表达。将CTL-exo加入到HepGA14培养体系中,qPCR检测HepGA14细胞内HBV DNA、cccDNA及外泌体中HBx mRNA表达水平,Western Blot检测外泌体HBx蛋白表达水平。符合正态分布的计量资料两组间比较采用成组t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果外泌体均为双层膜结构的微囊,呈圆形或椭圆形,囊泡的直径为50~100 nm,表达标志性蛋白CD63和TSG101。荧光显微镜观察示外泌体可进入LX-2细胞,并且HBV-exo进入LX-2细胞后,HSC胞体增大、胞突伸展。qPCR结果示NC-exo、HBV-exo、NC-exo+HBV-exo和Con组LX-2细胞中TGF-β1、α-SMA、Collagen1基因表达水平差异均有统计学意义(F值分别为444.678、417.144、571.508,P值均<0.05)。CTLexo干预HepGA14细胞后,qPCR结果显示HepGA14细胞中HBV DNA、cccDNA表达水平较对照组明显下降(P值均<0.05),外泌体中HBx mRNA相对表达量明显下降(P<0.05);HBx蛋白表达水平与对照组相比也明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。CTL-exo和HBV-exo按照不同比例(2∶1、5∶1、10∶1)进行混合后干预LX-2细胞,qPCR结果显示各组间LX-2细胞中TGF-β1、α-SMA和Collagen1基因表达随着CTL-exo比例的增加而逐渐减弱,差异有统计学意义(P值均<0.05)。结论CTL-exo可下调HBV-exo中HBx蛋白表达抑制HSC活化,提示CTL-exo有抗乙型肝炎肝纤维化作用。

细胞毒性相关辅助T淋巴细胞在精原细胞瘤中的表达及其临床意义

目的 检测CD4^(+)细胞毒性相关辅助T淋巴细胞在人类正常睾丸及精原细胞瘤中的表达,探讨其在精原细胞瘤免疫微环境中的作用。方法 通过基因表达相互作用分析数据库(GEPIA)基因表达特征整合分析测序数据库分析CD4^(+)细胞毒性相关辅助T淋巴细胞标记分子CD4和颗粒酶K(GZMK)在正常睾丸及精原细胞瘤中的表达,并分析二者表达相关性及与肿瘤分期间的关系。采用免疫组化及双重荧光染色检测正常睾丸(n=8)与精原细胞瘤(n=12)组织中CD4、GZMK及CD4^(+)GZMK^(+)表达水平,并进行统计分析。结果 GEPIA基因表达谱分析结果显示精原细胞瘤CD4和GZMK表达水平高于正常睾丸,差异有统计学意义(P<0.05);高分期精原细胞瘤患者GZMK表达低于低分期精原细胞瘤,差异有统计学意义(P<0.05);CD4和GZMK表达水平呈正相关(r=0.71,P<0.05);免疫组化结果与GEPIA基因表达谱数据一致,即精原细胞瘤CD4和GZMK表达水平高于正常睾丸,差异有统计学意义(P<0.05);免疫荧光染色结果显示精原细胞瘤中CD4和GZMK表达共定位。结论 精原细胞瘤组织CD4、GZMK及CD4^(+)GZMK^(+)细胞表达水平较正常睾丸组织增高,提示CD4^(+)细胞毒性辅助性T淋巴细胞在精原细胞瘤免疫微环境中发挥重要作用。

Th1/Th2平衡、分化簇抗原28、可诱导共刺激分子、程序性死亡受体-1和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4在急性冠脉综合征患者外周血中的表达

目的研究Th1/Th2及相关细胞因子、共信号分子分化簇抗原28(CD28)、可诱导共刺激分子(ICOS)、程序性死亡受体1(PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)在急性冠脉综合征(ACS)患者外周血中的表达,并探讨其是否参与ACS的发病机制。方法前瞻性选取2021年7月至2022年4月经中山大学附属第三医院粤东医院心血管内科诊断为ACS的120例患者作为研究对象,采用ACS不同亚型的诊断标准将其分为不稳定型心绞痛(UA)组、ST段抬高型心肌梗死(STEMI)组、非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)组,每组各40例。选取同时间段行冠状动脉造影检查正常的40例住院患者作为对照组。采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清中的干扰素(IFN)-γ、白介素(IL)-2、IL-4和IL-10表达水平,采用流式细胞仪检测外周血互助性T细胞(Th)1、Th2细胞占CD4^(+)T细胞的比例以及共信号分子CD28、ICOS、PD-1、CTLA-4在CD4^(+)T细胞表面的表达水平,通过冠脉造影手术采用SYNTAX评分法评估ACS患者冠脉病变严重程度,比较四组上述各指标之间的差异并进行各指标之间的相关性分析。结果ACS患者外周血中Th1/Th2比值、Th1数量及相关细胞因子IFN-γ和IL-2的血清表达量高于对照组,其外周血CD3^(+)CD4^(+)T细胞的CD28、ICOS和PD-1表达量也高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);另外,STEMI组和NSTEMI组的这些指标也均高于UA组,差异有统计学意义(P<0.05);SYNTAX评分与外周血Th1数量、Th1/Th2比值、血清IFN-γ及IL-2水平和外周血CD3^(+)CD4^(+)T细胞的CD28及ICOS表达量呈明显正相关(P<0.05);外周血CD3^(+)CD4^(+)T细胞的CD28及ICOS表达量均与Th1数量、Th1/Th2比值、血清IFN-γ及IL-2表达水平呈明显正相关(P<0.05)。结论ACS患者外周血中的Th1、相关细胞因子IFN-γ和IL-2以及其CD3^(+)CD4^(+)T细胞的CD28、ICOS和PD-1表达较健康体检者均明显上调,其均可能在ACS的发病机制中发挥了重要作用。

基于微小RNA-142-3p与细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4的相互作用探讨细胞因子在原因不明反复性流产的作用

目的探讨原因不明反复性流产(URSA)过程中微小RNA-142-3p(miR-142-3p)与细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)的相互作用对细胞因子影响的可能机制。方法选取2016年9月至2017年12月中国科学院大学深圳医院(光明)收治的45例URSA患者纳入流产组,选取同期于中国科学院大学深圳医院(光明)进行检查的40例健康早孕者作为对照组进行回顾性研究。采用流式细胞仪检测两组研究对象外周血中CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞百分比,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Th1型细胞因子与Th2型细胞因子的表达水平。结果流产组研究对象CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞百分比低于对照组(P<0.05);流产组研究对象外周血中白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-4(IL-4)的表达水平低于对照组(P<0.05),而白细胞介素-2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的表达水平均高于对照组(P<0.05);流产组研究对象的IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-4比值均高于对照组(均P<0.05);荧光素酶报告基因检测显示,miR-142-3p与CTLA-4具有较强的结合能力。结论miR-142-3p对CTLA-4的表达具有潜在的抑制作用,这可能是促使URSA的机制之一。

GPC3刺激对DC-CTL靶向杀伤肝细胞癌的影响

目的本研究将磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)作为肝细胞癌(LIHC)的靶分子,研究其在激活树突状细胞(DC)-细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和增强肿瘤杀伤能力中的作用。方法为更系统、更全面地鉴定GPC3在多种恶性肿瘤中的意义,对GPC3在泛癌中的基因表达水平进行评估,并从LIHC与临床特征的相关性角度进一步研究GPC3。分别通过生存预后分析(Kaplan-Meier图)和受试者工作特征(ROC)曲线分析评估GPC3在LIHC中的预后价值和诊断价值。重组GPC3蛋白用于刺激DC,然后与CTL细胞共培养,经酶联免疫吸附试验(ELISA)分析以检测DC-CTL细胞中细胞因子的表达。通过CCK8测定法测定在Huh7细胞上用GPC3培养刺激的DC-CTL细胞的细胞毒性。结果GPC3的基因表达水平在大多数癌症中显著不同,并且在LIHC中与正常组织相比更高。GPC3在血清中与年龄和甲胎蛋白(AFP)水平相关(均P<0.001),而与LIHC的TNM分期、病理分期和组织学分级无关。ROC曲线分析表明,GPC3可用于准确预测LIHC。GPC3的表达水平与LIHC的总生存期无关。联合治疗显著上调了IFN-γ和TNF-α的分泌。用150 ng/ml和200 ng/ml GPC3刺激的DC-CTL细胞杀死Huh7细胞的能力强于不使用GPC3刺激的DC-CTL细胞(均P<0.05)。结论用GPC3刺激DC-CTL细胞通过促进细胞毒性在体外抑制肿瘤生长。GPC3可能是一种潜在的肿瘤标志物,可用于提高DC-CTL细胞的治疗效率。

常规疗法伍用黄芪对病毒性心肌炎患者外周血T淋巴细胞亚群的影响

比较常规疗法伍用黄芪口服液与单用常规疗法对病毒性心肌炎患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群影响。结果表明，病毒性心肌炎患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群百分率及ＯＫＴ４／ＯＫＴ８比值显著低于健康对照者（Ｐ＜０．０５，０．０１）。常规疗法伍用黄芪可显著改善心肌炎患者ＯＫＴ３、ＯＫＴ４及ＯＫＴ４／ＯＫＴ８比值（Ｐ＜０．０５，０．０１）。并探讨了伍用黄芪改善病毒性，心肌炎患者细胞免疫状况可能的作用机理。

苦参素治疗慢性乙型肝炎患者T细胞亚群和细胞毒性T淋巴细胞的变化

目的探讨苦参素治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者T细胞亚群和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的变化。方法66例CHB患者被随机分为两组,分别给予苦参素葡萄糖注射液联合水飞蓟宾葡甲胺或单用水飞蓟宾葡甲胺治疗3月。采用流式细胞仪检测CD3+、CD4+、CD8+和CTL细胞。结果在苦参素治疗3个月后患者CD3(+72.47±5.14%)、CD4(+37.81±5.04%)和CTL细胞(21.46±4.53%)均较治疗前(68.85±7.31%、33.61±7.33%和18.11±5.21%)升高,也较对照组治疗3个月后(分别为67.51±5.26%、32.58±5.52%和17.63±3.56%)升高(P<0.05或P<0.01)。苦参素治疗患者HBV DNA和HBeAg阴转率(分别为30.30%和24.24%)也高于对照组(分别为6.06%和3.03%,x2=6.53,x2=6.3,P<0.05)。结论苦参素能提高CHB患者CD3+、CD4+和CTL细胞水平,并显著提高CHB患者的抗病毒应答率。

微波消融后瘤内注射未成熟树突状细胞对细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性的影响

目的:探讨微波消融后瘤内注射未成熟树突状细胞(iDC)能否诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。方法:建立C57BL/6J小鼠Hepa1-6皮下肝癌模型,采用假消融、(45±2)℃、(50±2)℃、(55±2)℃和(60±2)℃消融肿瘤后,瘤内注射iDC,分离小鼠脾淋巴细胞,乳酸脱氢酶释放法检测致敏CTL对Hepa1-6和B16淋巴瘤细胞的杀伤活性以及酶联免疫斑点测定方法监测致敏脾淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-4的水平。结果:与假消融、(45±2)℃以及(60±2)℃消融辅以瘤内注射iDC相比,以及与单纯同样温度消融或单纯瘤内注射iDC相比,(50±2)℃和(55±2)℃消融后72h瘤内注射iDC,其致敏脾淋巴细胞对Hepal-6的杀伤率明显升高(P<0.05),分泌IFN-γ的水平增加(P<0.05),而(50±2)℃消融后72h瘤内注射iDC,其致敏脾淋巴细胞分泌IL-4的水平低下(P<0.05);(50±2)℃以及(55±2)℃消融瘤内注射iDC后,CTL对Hepal-6的杀伤活性高于对B16细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:50℃-55℃消融后瘤内注射iDC,能充分利用消融后瘤组织的抗原性增强,增加TAA被识别摄取以及呈递给效应细胞的量,诱导机体产生肿瘤特异性的细胞免疫应答。

应用四聚体酶联免疫斑点法和细胞内细胞因子染色法检测HIV-1感染者体内特异性细胞毒性T淋巴细胞的研究

目的应用四聚体(tetramer)、酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞内细胞因子染色(ICCS)方法研究HIV-1感染者细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的数量和功能。方法应用三种tetramer检测14例HLA-A2阳性的HIV-1感染者外周血中特异性CTLs的频率,同时采用SL9(SLYNTVATL)体外冲击HIV-1感染者的外周血单核细胞(PBMCs)。通过ELISPOT和ICCS方法检测产生γ-干扰素(IFN-γ)的CTLs,初步分析特异性CTLs在HIV-1感染中的作用。结果Tetramer SL9、IV9和YI9检测出的特异性CTLs占CD8+T细胞的百分比范围分别为0.06%-3.27%,0.05%-0.57%和0.09%-0.66%;其检出阳性率分别为11/14、10/14和5/7。ELISPOT和ICCS检测的产生IFN-γ的细胞近似,但远低于tetramer检测出的病毒特异性CTLs的数量。结论Tetramer可以敏感地检测出特异性CTLs。ELISPOT和ICCS则是研究CTLs功能的重要手段。联合使用三种方法可以更准确地评价HIV-1感染者体内CTLs的特征及其临床意义。

病毒性肺炎淋巴细胞亚群、T淋巴细胞亚群状况研究

目的探讨病毒性肺炎急性期、恢复期外周血淋巴细胞亚群及辅助性T淋巴细胞亚群Th1、Th2百分率,血清免疫球蛋白改变,了解病毒性肺炎的免疫病理状况 方法 采集急性期(43例)、恢复期(18例)及正常对照组外周抗凝血,采用流式细胞仪检测T细胞、T辅助/诱导细胞亚群(CD4+)、T抑制/毒性细胞亚群(CD8+)、B细胞、自然杀伤(NK)细胞的百分数及CD4/CD8+值;同时检测CD4+细胞中Th1、Th2细胞百分比结果 患儿急性期、恢复期B细胞百分率及急性期Th1细胞百分率与对照组比较有显著差异(P<0.05)肺炎组Th1/Th2值较对照组显著增高(P<0.05),血清免疫球蛋白正常或稍高 结论 病毒性肺炎时外周血B细胞增加,体液免疫被激活;急性期Th1细胞百分率增加,Th1型细胞免疫反应性增强。