细菌体内诱生抗原筛选技术的研究进展

只在进入宿主体内后表达而在体外不表达的基因称为体内诱生基因。大量研究表明,这些基因对病原菌进入体内的生存和致病具有重要的意义。体内诱生基因的筛选可为抗菌药物的开发、临床诊断试剂的研究、疫苗的设计提供新的准确靶标,从而为预防和治疗工作奠定基础。近年来有关病原菌体内诱导基因的研究越来越受到重视,人们发展了多种体内诱生基因的筛选技术,如体内表达技术(IVET)、信号标签突变(STM)、体外转座进行基因组分析和作图(GAM-BIT),这些方法因需建立动物模型而使其使用受限,体内诱生抗原技术(IVIAT)则因具有不依赖于动物模型、简便、快捷、高通量而得到了广泛的应用。

利用IVIAT技术初步筛选伤寒沙门菌的体内诱导基因

目的利用体内诱生抗原筛选技术初步筛选伤寒沙门菌的体内诱导基因。方法首先将3个伤寒病人恢复期的血清等体积混合,用体外培养的伤寒沙门菌全菌体、超声裂解产物及加热变性裂解产物充分吸收处理。然后采用pET-30a/b/c表达载体系统构建伤寒沙门菌Ty2菌株的基因组表达文库,并以吸收后的血清为探针,筛选伤寒沙门菌基因组表达文库。结果从5000个克隆中获得5个阳性克隆,对阳性克隆测序和序列检索分析表明,涉及6个开放阅读框。结论本实验利用IVIAT筛选体内诱导基因的各个程序是正确的,并初步筛选到伤寒沙门菌的体内诱导基因。

体内筛选技术在靶向治疗中的新进展

用噬菌体展示技术进行体内筛选可以更好地模拟靶抗原的天然环境 ,以筛选到与活体内某些器官或组织有特异结合活性的肽或抗体。近年来利用该技术在动物体内的研究已取得了可喜的进展。综述了体内筛选技术在器官和组织血管靶向载体的筛选、基因治疗及绘制人类血管分子图谱方面的应用 ,并对其今后的研究发展方向进行了阐述。

梅毒螺旋体体内诱生抗原Tp0462的表达鉴定及在临床血清学诊断中的应用评价

目的筛选鉴定并评价梅毒螺旋体（Tp）体内诱生抗原Tp0462的临床血清学诊断价值。方法提取TpNichols株全基因组，PCR扩增Tp0462，克隆构建重组质粒pET30a（＋）一Tp0462，转化至EcoliR05ett0（DE3）菌，大量诱导表达重组蛋白Tp0462并纯化、鉴定。18只新西兰兔随机平均分为活Tp接种组、紫外线照射灭活Tp接种组和未接种对照组，接种后不同时间点抽血分离血清，用ELISA鉴定Tp0462蛋白的体内诱生性特点。ELISA法（Tp0462．ELISA）、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）、梅毒初筛ELISA试验及快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）试验检测336份临床梅毒患者血清样本，初步评价该蛋白的诊断价值。结果重组质粒Tp0462-pET30a（＋）在E．coliRosetta（DE3）中最适的表达条件为0．5mmol／LIPTG，20℃，180rpm摇床诱导培养4h。活Tp接种组血清Tp0462特异性抗体水平从第2周起呈急剧上升趋势，至5周后趋于平稳，而灭活Tp接种组及未接种对照组血清Tp0462特异性抗体水平一直处于低水平。活Tp接种组Tp0462特异性抗体水平显著高于灭活Tp接种组及未处理组（P〈0．05），而灭活Tp接种组与未处理组相比，差异无统计学意义（P=0．256）。活Tp接种组、灭活Tp接种组Tp92抗体水平显著高于未处理组（P〈O．05），而活Tp接种组与灭活Tp接种组差异无统计学意义（P=0．127）。与TPPA相比，Tp0462-ELISA的灵敏度和特异度分别为91．7％和98．8％，符合率为95．2％，曲线下面积为0．997。Tp0462．ELISA与梅毒初筛ELISA试验的符合率为92．3％，Kappa值为0．846；与RPR试剂盒的符合率为83．9％，Kappa值为0．293。结论Tp0462在梅毒血清学诊断中具有较高的灵敏度和特异度，可以作为潜在的梅毒诊断候选蛋白。

抗雌二醇单克隆抗体的制备与鉴定

活化雌二醇(E2)C3处的酚-OH,与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备得E2的完全抗原,利用完全抗原免疫动物,采用单克隆抗体技术,经过细胞融合、克隆筛选、扩大培养、动物体内诱生腹水等过程,最后获得了E2的单克隆抗体,对纯化的单克隆抗体的性质鉴定,结果显示:其抗体效价为1:106,抗体属于IgG2a型;分子量为179000Da;E2单克隆抗体的亲和常数K2.9108L/mol。