用体内足迹法研究MEL细胞中红系调控元件上DNA-蛋白质相互作用

应用连接介导ＰＣＲ方法研究了ＭＥＬ细胞诱导前后细胞中β－珠蛋白基因簇中高敏位点２和βｍａｊ启动子上蛋白质－ＤＮＡ间的相互作用．首先培养ＭＥＬ细胞并用ＤＭＳＯ和Ｈｅｍｉｎ诱导分化，用硫酸二甲酯对活细胞进行体内甲基化处理，化学法裂解后，进行体内足迹研究．结果表明，在ＭＥＬ细胞诱导前后，其位点控制区高敏位点２及βｍａｊ启动子上的ＤＮＡ－蛋白质间相互作用状况都有显著的变化，提示β－珠蛋白基因簇中的远端调控序列（ＬＣＲ，ＨＳｓ）及各个基因的近端调控序列（启动子，增强子）共同参与了发育阶段特异性的调控．

A+G连接介导PCR方法的建立及其在体内足迹研究中的应用

目的建立一种新的连接介导聚合酶链反应（ｌｉｇａｔｉｏｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄｐｏｌｙ－ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＬＭ－ＰＣＲ）方法，使之能够对Ｇ－残基含量过低或不含Ｇ－残基的区域进行体内足迹研究。方法对原化学测序法中的Ａ＞Ｇ法进行修改，化学裂解后进行连接介导的ＰＣＲ反应，通过测序胶分离分析ＰＣＲ反应结果。结果建立了Ａ＋ＧＬＭ－ＰＣＲ方法，本法能够应用于体内足迹研究。结论应用本实验建立的方法可分析Ａ－残基和Ｇ－残基上的蛋白质－ＤＮＡ相互作用状况，可获得更多信息及扩大使用范围。

联合应用低熔点回收法与连接介导PCR法进行体内足迹研究

连接介导PCR是一种单侧PCR技术，它的应用大大地促进了体内足迹等研究的进行。在应用这一方法时，我们最关心以下三个方面：敏感性，忠实性和引物设计的方便。初始连接介导的PCR方法对于引物的要求有时限制了此技术的应用，尤其是在研究AT含量较高的调控元件时。本文采用低熔点回收法，有效地去除了PCR反应后所剩余的第二引物，大大方便了第三引物的设计。

连接介导PCR及其在体内足迹研究中的应用

连接介导聚合酶链反应是以连接反应为基础的单侧PCR技术 ,首先在DNA片段的一端连接上一个公共连接子 ,而后在这个连接子与另一个DNA序列特异的引物间扩增 .Vent聚合酶的使用 ,延伸产物捕获及连接子标记选择策略的采用 ,大大提高了连接介导聚合酶链反应的敏感性 .