胚胎干细胞发育相关基因PLK1在细粒棘球绦虫体外不同发育时期差异表达研究

目的探究PLK1基因在细粒棘球绦虫不同发育时期的表达情况。方法体外培养细粒棘球绦虫原头蚴在犬胆汁刺激下向成虫方向发育,收集不同发育时期的虫体,通过免疫组化定位PLK1基因的表达。光学显微镜下切割分离成虫头节和后颈节段,收集样本运用荧光定量qPCR量化PLK1基因在虫体不同发育时期或不同部位的表达量水平,用SPSS 26.0软件进行单因素方差分析。结果成功建立了细粒棘球绦虫原头蚴向成虫方向发育的体外培养模型,体外培养的虫体56 d获得4个节片;PLK1基因在细粒棘球绦虫包囊生发层中高表达量。虽然在成虫和原头蚴表达较低,但免疫组化显示在原头蚴吸盘的底部和成虫头节的下部链体延长区域的表达高于其他部位(F=14.87,P<0.05)。结论细粒棘球绦虫干细胞相关基因PLK1的表达明显位于生发层细胞和激活原头蚴的头节底部以及链体增长区域,PLK1是棘球绦虫成虫发育干细胞区域的高表达基因。

猪肝脏体外不同灌流系统建立和评价

目的:探讨体外肝脏灌流系统中的影响因素,建立稳定有效的体外肝脏灌流系统。方法:根据灌流和氧合的方式建立不同的体外猪肝脏灌流系统,随机分为3组(每组n=4)。A组单独灌流门静脉,氧合灌流液;B组同时灌流门静脉和肝动脉,共同氧合门静脉和肝动脉的灌流液;C组同时灌流门静脉和肝动脉,分别氧合门静脉和肝动脉的灌流液。观察体外肝脏灌流时间、胆汁分泌量、病理变化和血液动力学等指标。结果:A组的灌流时间明显低于B组和C组。在1,3,6h的时间点A组胆汁分泌量、血液动力学等指标和B、C组比较差异有统计学意义。在12h时间点B组和C组胆汁分泌量和血液动力学的差异也有统计学意义。结论:同时灌流门静脉和肝动脉,分别氧合门静脉和肝动脉灌流液的灌流系统更稳定,对体外肝脏功能的维持效果较好。

人角膜缘干细胞在体外不同载体上培养的实验研究

目的 寻找人角膜缘干细胞体外培养的载体。方法 人角膜缘干细胞原代培养单细胞层传代到羊膜、卵壳膜、聚乳酸膜、藻酸盐凝胶４种载体和６孔培养板中，倒置显微镜观察、记录细胞生长情况。对６孔板传代细胞行生物特性检测，对载体上培养细胞行组织学检测。结果 ６孔板中传代细胞对 ＡＥ－５，４ Ｇ１０．３表达阳性。羊膜、卵壳膜和聚乳酸膜上有细胞生长，７天左右形成单层；藻酸盐凝胶载体上未见细胞生长。结论 传代细胞具有角膜缘干细胞生物特性；羊膜、卵壳膜和聚乳酸膜适合角膜缘干细胞传代培养。

体外不同张应力对人牙周膜成纤维细胞胶元纤维合成的影响

目的 观察不同张应力对人牙周膜成纤维细胞 (HPDL F)胶元纤维合成总量的影响。方法 将体外分离培养的 HPDL F在自行开发的膜式动态张应力 -体外细胞培养研究体系中进行 16 h、2 4 h和 32 h3个时段的不同张应力加载 ,以 3H- Proline掺入法检测其胶元纤维合成总量。结果 动态张应力组 2 (5 k Pa- 2 .5 k Pa- 5 k Pa)HPDL F胶元纤维合成总量的增加最为明显 ,其次依次为对照组、静张应力组、动态张应力组 1(5 k Pa- 0 k Pa- 5k Pa)。结论 不同频动范围的动态张应力对 HPDL F胶元纤维合成总量的影响截然不同 。

5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、肝素和地塞米松对体外不同生长状态晶状体上皮细胞生长的抑制作用

目的:比较体外不同生长状态的晶状体上皮细胞(LECs)对药物敏感性的差异,为体外药物筛选设计提供参考。方法:用含体积分数为10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基调整LECs浓度,分为2组:未融合增生组(细胞浓度为4×104mL-1)和融合维持组(细胞浓度为4×105mL-1),分别放入24孔板中,每孔接种1mL。接种后12h,未融合增生组、融合维持组分别用含体积分数为20%、2%的FBS及含有不同处理因素(含有不同质量浓度5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、肝素和地塞米松的DMEM培养基)的培养液培养。作用48h后用MTT比色法检测细胞增生情况。结果:5-氟尿嘧啶和丝裂霉素对未融合增生组和融合维持组的LECs均产生明显的浓度依赖性抑制作用,同一质量浓度药物作用下,未融合增生组的抑制率高于融合维持组(P<0.05)。肝素和地塞米松对未融合增生组LECs有较明显的浓度依赖性抑制作用(P<0.05),而对融合维持组的LECs几乎没有影响。结论:体外不同生长状态的LECs对不同药物及剂量敏感性不同。5-氟尿嘧啶和丝裂霉素抑制LECs的增生作用强,但对处于融合维持状态的LECs毒性也明显;肝素和地塞米松对LECs有一定的增生抑制作用,对处于融合维持状态的LECs毒性低。

体外不同培养方法对血管平滑肌细胞生物学性状影响的比较研究

目的 探讨体外不同培养方法对血管平滑肌细胞生物学性状的影响。方法 分别用酶消化及组织块法分离、培养血管平滑肌细胞 ,对细胞的形态、生长增殖及平滑肌α-肌动蛋白表达情况进行观察与检测。结果 组织块法原代培养得到的细胞数高于酶消化法 ,前者较后者细胞生长速度快 ,两者细胞均表达平滑肌α -肌动蛋白。

心血管疾病移植治疗的理想材料:骨髓间质干细胞在体外不同心肌细胞微环境中的定向分化研究

目的:研究兔骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外不同的仔鼠心肌细胞微环境中的定向分化情况,为心血管疾病细胞移植 治疗提供基础。 方法:体外分离培养兔MSCs,经5-氮杂胞苷诱导后分别与正常的及经阿霉素预处理的乳鼠心肌细胞一起置于Milliccll装置中共培养(正常组和阿霉素组),分别在共培养后的第14,21,28天,采用免疫细胞化学方法、反转录聚合酶链反应(RT-polymerase chain reaction;RT-PCR)鉴定,并用流式细胞仪检测横纹肌辅肌动蛋白阳性细胞所占百分比。取仅经5-氮杂胞苷诱导的MSCs作为对照组。 结果:14 d时仅正常组个别细胞横纹肌辅肌动蛋白、缝隙连接蛋白弱阳性;21,28 d 3组均可见阳性细胞;RT-PCR方法示可表达纹状肌球蛋白。但正常组免疫荧光阳性的细胞比例较对照组和阿霉素组大。 结论:MSCs是骨髓来源的具有多向分化潜能的干细胞,在体外正常和病理性心肌细胞微环境均可分化为心肌样细胞,且微环境对其分化有促进作用。MSCs可能成为细胞移植治疗心血管疾病的又一种新的细胞来源。

细粒棘球绦虫体外不同发育时期Eg M9基因差异表达研究

目的探究Eg M9基因在细粒棘球绦虫体外不同发育时期的表达情况。方法体外培养细粒棘球绦虫原头蚴(protoscoleces,PSCs)向成虫方向发育;收集不同发育时期的虫体,通过H&E染色进行虫体形态学观察;运用荧光定量PCR方法,以β-Actin作为内参基因,使用2^(-ΔΔCt)法计算虫体不同发育时期Eg M9基因的表达情况,用SPSS 17.0软件进行单因素方差分析。结果最终成功建立了细粒棘球绦虫原头蚴向成虫方向发育的体外培养模型,培养虫体至50 d;体外培养的虫体在第50 d时可产生3个节片;体外培养第50 d的虫体Eg M9基因的表达量最高,与其他时期虫体表达量差异有统计学意义(F=11.32,P<0.05)。结论Eg M9基因是细粒棘球绦虫成虫阶段高表达的基因,可能与虫体性器官发育有关。

黏液性铜绿假单胞菌体外不同方法药敏试验的探讨

铜绿假单胞菌是临床中常见的易形成生物膜的条件致病菌。细菌生物膜（bacterial biofilm,BBF）是细菌黏附于生物材料或机体腔道表面,分泌多糖蛋白复合物并将其自身包绕其中,形成大量细菌聚合体的膜状物。

九蒸九制对黄精中AGEs含量、多糖结构及体外活性的影响

为初步判断九蒸九制黄精多糖含量下降的主要原因及九蒸九制对黄精多糖体外活性的影响,本文测定了九蒸九制黄精中5-羟甲基糠醛(5-HMF)及晚期糖基化终产物(AGEs)的含量,考察了九蒸九制前后黄精纯化多糖的结构变化,并分析这些变化对黄精体外活性的影响。结果表明九蒸九制黄精发生了美拉德反应,5-HMF含量为(631.3±21.5)μg/g,羧甲基赖氨酸(CML)和羧乙基赖氨酸(CEL)含量分别为(342.4±11.3)μg/g和(63.7±9.8)μg/g。并对黄精多糖的结构及组成产生了不同程度的影响,葡萄糖(Glc)含量有所增长,甘露糖(Man)及半乳糖醛酸(GalUA)的含量有明显降低,Man从34.53%降至17.06%,GalUA从9.59%降至1.77%。研究表明,黄精在九蒸九制的加工过程中发生了美拉德反应,并产生了一定量的AGEs,同时,九蒸九制法在一定程度提高了黄精多糖的体外降糖活性。

超声引导技术在小切口微创心脏手术建立外周体外循环中的应用价值

目的探讨超声引导技术在小切口微创心脏手术经右颈内静脉穿刺置管及股动静脉解剖置管建立外周体外循环中的应用价值。方法分析2021年8月至2022年12月西安交通大学第一附属医院收治的436例进行小切口微创心脏手术患者的临床资料,根据置管过程中是否使用超声引导技术将研究对象分为对照组(给予传统方式置管,102例)和观察组(给予超声引导技术辅助下置管,334例)。比较分析两组患者经右颈内静脉穿刺置管的情况以及相关并发症发生率。比较分析两组患者股动静脉解剖置管的情况以及相关并发症发生率。结果观察组患者经右颈内静脉穿刺置管的穿刺置管成功率高于对照组,置管时间、穿刺困难发生率、误入颈内动脉发生率均短于或低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组患者股动静脉解剖置管的置管时间、解剖困难发生率、导管位置异常发生率均短于或低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论超声引导技术应用于小切口微创心脏手术经右颈内静脉穿刺置管及股动静脉解剖置管建立外周体外循环中,能提高穿刺置管成功率,缩短置管时间,减少导管位置异常、误入颈内动脉等并发症的发生。

导师制短期高级培训在体外循环高难度专项技术提升中的应用探索

目的评估导师制短期高级培训应用于体外循环高难度专项技术教学的效果,探索该培养模式的应用。方法纳入2022年1月至2023年1月于首都医科大学附属北京安贞医院体外循环与机械循环辅助科进修的32名医师作为研究对象,进修时长均为1个月。分不同专业进修方向,包括主动脉内球囊反搏(8名)、微创体外循环(8名)、大血管体外循环(8名)和小儿体外循环(8名),自选导师进行一对一教学。分别于入科前和出科后由科室内不参与导师教学制度的专业医师对学员能力进行评估并打分,出科后3 d内完成对学员的问卷调查,观察学员自评和学员对导师的评价结果。结果经过为期1个月的培训,学员在理论知识、临床操作、危重患者管理、异常情况判定及处理、团队沟通合作意识方面的能力均得到显著提升,各项评分及总分均高于入科前[(4.5±0.5)分比(2.5±0.7)分、(4.4±0.7)分比(2.5±0.5)分、(3.8±0.9)分比(1.8±0.7)分、(4.0±0.7)分比(2.4±0.6)分、(4.4±0.6)分比(2.5±0.6)分、(21.1±1.8)分比(11.8±1.3)分],差异均有统计学意义(均P<0.001)。经学员自评,其理论知识方面提升的平均值为57.2%,临床操作技术方面提升的平均值为61.9%,危重患者管理方面提升的平均值为60.0%,疑难杂症诊疗方面提升的平均值为64.1%,意外情况处理方面提升的平均值为65.3%。学员对导师在理论知识和临床经验、临床操作熟练程度及教学参与程度、反馈工作及时性方面的评价均较高,平均分值不低于4.00分。结论导师制短期高级培训在体外循环高难度专项技术提升中发挥了积极作用,对于体外循环专业进修学员有很好的教学效果,可以在有一定专业基础的体外循环进修医师教学中应用。

三七活骨丸联合体外冲击波对气滞血瘀型早期股骨头缺血性坏死患者的影响

目的 观察三七活骨丸联合体外冲击波(ESW)对气滞血瘀型早期股骨头缺血性坏死的影响。方法 选取2021年4月至2022年10月黑龙江中医药大学附属第二医院收诊的72例气滞血瘀型早期股骨头缺血性坏死患者,采用随机数字表法将其分为对照组和观察组,各36例。对照组采用ESW治疗,观察组在对照组的基础上口服三七活骨丸,两组均治疗4周。观察治疗前及治疗2、4周后两组视觉模拟评分法(VAS)评分、髋关节Harris评分、中医证候评分,并进行疗效评价。比较两组治疗前后血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、骨保护素(OPG)水平。结果 对照组有4例患者在治疗期间服用其他药物,故剔除。观察组临床疗效优于对照组(P<0.05)。两组治疗2、4周后VAS、中医证候评分均低于治疗前,髋关节Harris评分高于治疗前,两组治疗4周后VAS、中医证候评分均低于治疗2周后,髋关节Harris评分高于治疗2周后(P<0.05)。治疗2、4周后,观察组髋关节Harris评分高于同期对照组,中医证候评分低于同期对照组(P<0.05)。治疗4周后,观察组VAS评分低于同期对照组(P<0.05)。治疗4周后,两组血清IL-1、IL-6、TNF-α水平低于治疗前,血清OPG水平高于治疗前,且观察组血清IL-1、IL-6、TNF-α水平低于对照组,血清OPG水平高于对照组(P<0.05)。结论 三七活骨丸联合ESW对于改善气滞血瘀型早期股骨头缺血性坏死患者的症状疗效良好,适合临床应用。

外源物质对低盐罗非鱼糜蛋白构象及体外消化特性的影响

以微波超声波辅助制备的低盐罗非鱼糜凝胶为研究对象,分析谷氨酰胺转氨酶(TGase)、羟丙基二淀粉磷酸酯(HDP)、结冷胶和三者的复配物(THG)对其水分分布及蛋白质构象的影响;并通过体外模拟消化实验,探究不同外源物质对微波超声波辅助制备的低盐罗非鱼鱼糕体外消化特性的影响。结果表明:添加THG后,鱼糜结合水和不易流动水较空白组分别增加98.71%和14.75%,自由水含量显著减少(P<0.05);THG促进了α-螺旋向β-折叠、β-转角和无规则卷曲结构转化。与空白组相比,添加0.4%TGase和THG对低盐罗非鱼糕的胃排空速度、蛋白体外消化率及蛋白水解度均有正面作用;其中THG可显著促进蛋白质分解成粒径较小的聚集体(P<0.05),经胃-十二指肠消化结束后的消化产物颜色更加透明清晰,从激光共聚焦显微镜可观察到THG组的红色荧光亮点显著减少,反映其蛋白被消化得较为完全。由此可见,在THG的作用下,鱼糜中水分子与蛋白质结合更紧密,相对于单一的外源物质,THG更加明显地改变了蛋白质的构象,且更有利于疏水蛋白基团的暴露和蛋白间的相互作用,且对鱼糕的消化有促进作用。本研究的结果为罗非鱼糜凝胶特性研究及罗非鱼糕类食品的开发与应用提供理论参考。

依维莫司单独与联合唑类药物对耐药念珠菌体外敏感研究

目的探讨依维莫司单独及联合伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑和氟康唑对耐药念珠菌及耳念珠菌的体外作用。方法于2022年3—6月,采用美国临床实验室标准研究所M27-A3微量稀释法和微量肉汤稀释棋盘技术研究依维莫司联合伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑及氟康唑对耐药念珠菌及耳念珠菌的体外治疗作用。通过测定最低抑菌浓度(MIC)和部分抑菌浓度指数来确定协同效应。结果依维莫司单药治疗22株耐药念珠菌及10株耳念珠菌的MIC为0.250~4.000 mg/L、1.000 mg/L,伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、氟康唑单独使用对22株耐药念珠菌MIC范围分别为0.125~4.000 mg/L、<0.125~2.000 mg/L、0.063~2.000 mg/L、1.000~64.000 mg/L,伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑单独使用对10株耳念珠菌MIC范围分别为0.500~2.000 mg/L、0.125~8.000 mg/L、0.125~1.000 mg/L。当依维莫司与伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、氟康唑联合使用时,对耐药念珠菌的协同作用分别是9株(40.90%)、4株(18.18%)、8株(36.36%)、9株(40.90%)。当依维莫司联合唑类作用于耳念珠菌,未发现任何拮抗作用。结论依维莫司单独使用对耐药念珠菌及耳念珠菌菌株具有明显抗真菌作用,同时依维莫司联合唑类作用于耐药念珠菌时,表现出良好的协同作用,且没有拮抗作用,其进一步提升其抗耐药念珠及耳念珠菌的作用。

射干止咳胶囊体内外抗甲型H1N1流感病毒作用初探

目的初步探讨射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的体内外抗病毒作用。方法通过细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)结合MTT法考察射干止咳胶囊体外抑制甲型H1N1流感病毒活性的作用;采用小鼠滴鼻法感染甲型H1N1流感病毒为模型,观察射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的体内抗病毒作用。结果体外抗病毒试验结果显示,射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的最高抑制率为11.86%,提示在攻毒剂量为100TCID_(50)的条件下,射干止咳胶囊在体外对甲型H1N1流感病毒的抑制作用不明显。小鼠滴鼻感染5LD_(50)的甲型H1N1流感病毒,射干止咳胶囊低、中、高剂量组小鼠的死亡率分别为30%、10%、30%,死亡保护率达50%、70%、50%,平均生存天数分别为13 d、14 d、13 d,说明各给药组对攻毒小鼠具有较好的死亡保护作用。结论射干止咳胶囊体外抗甲型H1N1流感病毒的作用不显著,但射干止咳胶囊各剂量组对甲型H1N1流感病毒攻毒致小鼠死亡却具有明显的保护作用。

菌酶协同发酵对奶牛发酵全价混合日粮营养成分、发酵品质、体外消化率的影响

为研究菌酶协同发酵对奶牛发酵全价混合日粮的营养成分、发酵品质、体外消化率的影响,设置5个处理,分别为空白对照(CK)、添加2×10^(5)CFU/g乳酸菌处理(J)、添加2×10^(5)CFU/g乳酸菌+0.025%纤维素酶处理(JX1)、添加2×10^(5)CFU/g乳酸菌+0.050%纤维素酶处理(JX2)、添加2×10^(5)CFU/g乳酸菌+0.100%纤维素酶处理(JX3)。所有处理均进行厌氧发酵,在发酵3 d、7 d、15 d、30 d检测发酵品质,发酵30 d检测营养成分含量、酸溶蛋白含量、体外消化率。结果表明,JX3处理发酵全价混合日粮中的中性洗涤纤维含量显著低于对照(P<0.05)。JX3处理发酵全价混合日粮的中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、纤维素、半纤维素的含量最低,酸溶蛋白、粗蛋白、乳酸含量最高。JX3处理发酵全价混合日粮的体外干物质消化率和体外中性洗涤纤维消化率最高,分别为84.00%和21.61%。综上所述,2×10^(5)CFU/g乳酸菌+0.100%纤维素酶协同发酵的全价混合日粮营养成分、发酵品质、体外消化率最优。

添加武夷岩茶对米粉丝品质、体外消化特性和抗氧化活性的影响

为开发具有抗消化性和抗氧化活性的功能米粉制品,研究添加武夷岩茶对米粉丝品质、体外消化特性和抗氧化活性的影响。采用质构仪和感官评价法测定米粉丝的质构和感官品质,采用GC-MS法检测风味成分,采用FRAP法、DPPH和ABTS+自由基清除法测定抗氧化活性,采用体外模拟消化法检测米粉丝的体外消化特性。结果表明,与未添加武夷岩茶的米粉丝(对照组)相比,添加2.9%~7.0%武夷岩茶的米粉丝断条率无明显变化(P>0.05),添加8.3%武夷岩茶的米粉丝断条率显著增加(P<0.05);添加2.9%~8.3%武夷岩茶的米粉丝硬度、粘聚性、胶着性、咀嚼性和回复性显著低于对照组(P<0.05),而气味和食味分值显著高于对照组(P<0.05);添加5.7%武夷岩茶的米粉丝保留了岩茶的主要香气物质(香叶醇、2-苯乙醇、苯乙醛、(E)-2-己烯醛),且其米粉丝弹性显著高于对照组和其余岩茶组(P<0.05)。与对照组相比,添加5.7%武夷岩茶的米粉丝中快消化淀粉(RDS)比例下降8.69%,抗性淀粉(RS)比例增加14.34%,对DPPH和ABTS+自由基的清除能力显著增强(P<0.05),总抗氧化能力是对照组的7.48倍。在米粉丝中添加武夷岩茶能够赋予米粉丝独特风味,显著增强米粉丝的抗消化性和抗氧化活性,提高了米粉丝的营养保健价值。

紫苏叶体外抗氧化和降糖活性分析

为了研究紫苏叶及其提取物的体外抗氧化和降糖活性,本研究利用快速粘度分析仪制备紫苏叶基淀粉糊样品并进行体外模拟胃肠消化,采用福林酚法测定消化前后总酚含量,并通过研究消化前后样品对DPPH和ABTS+自由基的清除能力分析其抗氧化性能,用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定紫苏叶及其提取物对大米淀粉消化过程中还原糖释放量的影响。结果表明,随着活性物质添加量从5%增加到15%,消化过程中还原糖释放曲线线下所围面积(Area under the Curve,AUC)值总体呈下降趋势,其中添加15%一次纯化物的样品AUC值(30.86 mg葡萄糖/g)最低;经模拟胃肠消化后总酚含量均有显著增加,添加15%一次纯化物的样品多酚含量(81.04 mg GAE/100 g DW)最高,且消化后清除DPPH自由基和ABTS+自由基的能力显著(P<0.05)提高,其中添加10%一次纯化物对DPPH自由基的清除能力(38.69%)最高,添加15%一次纯化物对ABTS+自由基的清除能力(57.25%)最高。该研究表明紫苏叶及其提取物可以抑制大米淀粉体外升糖反应,且具有较好的抗氧化能力。