人巨细胞病毒单克隆抗体的制备及其体外中和活性鉴定

目的 制备具有中和人巨细胞病毒 (HCMV)感染作用的单克隆抗体并对其进行生物学活性鉴定。方法 用HCMV抗原免疫Balb/c小鼠 5、6次后 ,取致敏的脾脏B淋巴细胞和HGPRT SP2 /0小鼠骨髓瘤细胞进行融合 ,在HAT选择培养基中培养 2周 ,间接ELISA法筛选克隆。挑取分泌抗体的杂交瘤株 ,再用间接ELISA进行鉴定 ,最终获得抗HCMV的阳性杂交瘤细胞株 ,用Ouchterlony法鉴定McAb的亚类。小鼠腹腔内接种杂交瘤细胞 ,取腹水经盐析法提纯IgG。Lowry法测定蛋白质浓度 ,在第 6代HF细胞株及原代培养新生乳鼠脑神经细胞上进行微量中和实验。结果 获得了 4株杂交瘤细胞株 ,制备的F9McAbs盐析后蛋白质浓度为 11 2g/L ,血清学试验证明该McAbs能和HCMV抗原进行特异性结合 ,制备的IgG具有高度特异性。且体外实验已证实 ,该McAb具有中和抗体的性质。结论 通过杂交瘤技术制备的HCMV单克隆抗体能在体外中和HCMV致病变效应 。

人TGF融合疫苗诱导抗体在貂肺上皮细胞的活性检测

目的TGFβ1疫苗诱导Balb/c小鼠产生抗体及对TGFβ1体外中和活性。方法通过已构建成功的TGFβ1疫苗免疫小鼠,诱导产生高效价中和抗体,抗TGFβ1抗体及合成的抗原肽ELISA法检测免疫血清抗体滴度,经貂肺上皮细胞生长抑制法,检测抗体血清对TGFβ1体外中和活性。结果抗TGFβ1疫苗可以诱导高滴度的抗体产生,可与抗TGF抗体及抗原肽结合,可以阻断TGFβ1对貂肺上皮细胞的抑制活性。结论构建的抗TGFβ1疫苗可以诱导高滴度的中和抗体产生,在体外阻断TGFβ1活性,可以作为抗纤维化疫苗用于抗纤维化动物模型研究。

人源抗狂犬病毒中和性全抗体在昆虫细胞中的表达

将来源于噬菌体抗体库的人源狂犬病毒糖蛋白特异性单抗G10Fab的基因 ,克隆入杆状病毒人源IgG抗体表达载体 ,通过转染将重组质粒导入昆虫细胞 ,以全抗体的形式表达了一株人源抗狂犬病毒基因工程抗体G10。用亲和层析的方法纯化了表达产物 ,经与一株鼠源糖蛋白特异性单抗竞争证实 ,该单克隆抗体特异性识别狂犬病毒糖蛋白 ,亲和力约为 10 -9M。体外中和实验证明 。