体内外方法检测化妆品用防腐剂的致敏性

目的:采用豚鼠局部封闭涂皮试验和体外人细胞系活化试验检测两种常用化妆品防腐剂的皮肤致敏性,探讨两种方法组合用于检测皮肤致敏性的可行性。方法:豚鼠局部封闭涂皮试验参照化妆品安全技术规范(2015年版)的内容进行,试验设羟苯乙酯组、羟苯丁酯组,同时设甘油为阴性对照组、2,4-二硝基氯苯(DNCB)为阳性对照组,观察试验动物皮肤反应,通过积分评价皮肤致敏性。体外人细胞系活化试验参照经济合作与发展组织(OECD)毒理学测试中的442(E)方法,试验中设羟苯乙酯组、羟苯丁酯组,阴性对照组受试物为甘油、阳性对照组受试物为DNCB,采用CCK-8法测试细胞毒性,计算细胞存活率为75%时的暴露浓度(CV75)值,流式细胞术检测各试验组物质的CD86和CD54的相对荧光强度(RFI)值。结果:豚鼠局部封闭涂皮试验检测结果显示甘油为非致敏物,DNCB为强致敏物,羟苯乙酯为非致敏物,羟苯丁酯为中度致敏物。体外人细胞系活化试验检测结果显示羟苯乙酯的CV75值为126μg/mL,RFICD86为110%~140%,RFICD54为140%~260%;羟苯丁酯的CV75值为18μg/mL,RFICD86为75%~200%,RFICD54为90%~210%;甘油的CV75值大于5000μg/mL,RFICD86为75%~100%,RFICD54为60%~140%;阳性对照物质DNCB的CV75值为2.5μg/mL,RFICD86为185%~640%,RFICD54为100%~460%。由检测结果可见羟苯乙酯、羟苯丁酯在本试验中分别被判为弱致敏物和强致敏物,DNCB为极强致敏物,甘油为非致敏物。结论:在该对比试验中,体外人细胞系活化试验较局部封闭涂皮试验检测灵敏度更高,但也存在假阳性的可能,可以考虑用体外细胞方法作为筛选方法,结合动物体内试验方法或更多的体外组合试验进一步确定。

组合应用替代方法评价5种化妆品中常用防腐剂的皮肤致敏性

采用基于不良反应结局路径(AOP)开发的体外致敏性检测方法对5种常用防腐剂进行皮肤致敏性评估。根据整合测试和评估方法(IATA)的3选2原则,使用直接多肽反应试验(DPRA)和人细胞系活化试验(h-CLAT)分别对化妆品中常用的防腐剂苯氧乙醇、4-羟基苯甲酸甲酯、4-羟基苯甲酸丙酯、咪唑烷基脲和DMDM乙内酰脲进行检测。其中,直接多肽反应试验和人细胞系活化试验参照OECD 442C/442E指南的内容进行。实验结果显示,苯氧乙醇、4-羟基苯甲酸甲酯在DPRA和h-CLAT中均为阴性;咪唑烷基脲和DMDM乙内酰脲在2个试验中均表现出阳性结果;而4-羟基苯甲酸丙酯在DPRA中为阴性,h-CLAT中为阳性。该研究结果表明,甲醛释放体类防腐剂咪唑烷基脲和DMDM乙内酰脲是皮肤致敏物,而苯氧乙醇和4-羟基苯甲酸甲酯不是皮肤致敏物,基于文献调研结合更多的实验数据判定4-羟基苯甲酸丙酯为非致敏物。DPRA和h-CLAT的组合测试弥补了单一方法检测的局限性,适用于化妆品原料皮肤致敏性的初筛。