果蝇CYP6G1真核表达及其对新烟碱类杀虫剂的体外代谢

【目的】CYP6G1是黑腹果蝇Drosophila melanogaster体内重要的P450酶,其底物谱广泛,除了介导黑腹果蝇对DDT的抗性之外,还与其对新烟碱类和氨基甲酸酯类杀虫剂的抗性密切相关,但目前CYP6G1的代谢功能与黑腹果蝇抗药性之间的因果关系还缺乏一些直接证据。【方法】本研究通过建立Bac-to-Bac昆虫杆状病毒真核表达系统,功能性地表达了果蝇细胞色素P450酶CYP6G1,以吡虫啉为阳性对照,利用超高效液相色谱(ultra-performance liquid chromatography,UPLC)和超高效液相色谱串联质谱(ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)分析CYP6G1对噻虫啉和噻虫嗪的体外代谢情况。【结果】孵育2 h后,重组CYP6G1能够羟基化吡虫啉和噻虫啉,使它们的含量分别减少17.6%±7.1%和4.2%±2.3%;重组CYP6G1可以促进噻虫嗪转化为噻虫胺,使噻虫嗪含量减少5.8%±2.1%。【结论】本研究结果为果蝇CYP6G1的结构功能研究提供一定理论依据。

大鼠肠道菌群对ilexsaponin A_(1)体外代谢转化的影响

目的考察大鼠肠道菌群对毛冬青三萜皂苷ilexsaponin A_(1)体外代谢转化的影响。方法采用HPLC-ESI-QTOF-MS/MS法检测ilexsaponin A_(1)体外肠道菌孵育样品,条件为Kromasil 100-5 C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈(含0.1%甲酸)-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;电喷雾离子源(ESI);负离子模式。对代谢产物进行筛查鉴定,结合二级质谱图,推测代谢产物及其可能的生物转化途径。结果鉴定出14个代谢产物(M1~M14),ilexsaponin A_(1)发生了去糖基化、氧化、还原等代谢反应(M1~M2、M4~M5、M7~M8),其脱糖生成的苷元ilexgenin A进一步发生氧化、羟甲基化、还原等生物转化反应(M3、M6、M9~M11、M13~M14)。结论ilexsaponin A_(1)在大鼠肠道菌群中发生代谢转化,该成分在体内发挥药效并不完全以原型物吸收入血,其苷元ilexgenin A或脱糖后的代谢转化物为其可能的药效物质。

柠檬苦素体外代谢的种属差异

目的研究柠檬苦素代谢的种属差异,为柠檬苦素体内代谢研究提供实验动物选择的依据。方法代谢组用人、狗、猪、猴、兔、大鼠、小鼠7种肝微粒体分别与柠檬苦素孵育。对照组用灭活的肝微粒体与柠檬苦素孵育。空白组不加柠檬苦素。用高效液相紫外检测器检测柠檬苦素标准品溶液和上述样品,观察代谢组样品有无代谢产物峰。通过酶动力学实验结果计算不同种属肝微粒体酶对柠檬苦素的清除率。用高效液相高分辨质谱检测器检测代谢产物,推测代谢产物结构及反应类型。结果HPLC图谱显示人、犬、猪、兔、大鼠、小鼠有共同的代谢产物峰M1(RT13.3min);大鼠还有两个代谢产物峰M2(RT10.6min)和M3(RT8.6 min);猴的代谢产物峰为M4(RT8.1 min)和M5(RT10.1 min)。柠檬苦素在人、犬、猪、大鼠、小鼠肝微粒体中的清除分别为0.608、0.454、0.501、4.249、1.831μL/(min·mg)。高分辨质谱检测结果推测M1为柠檬苦素的C-16位羰基被还原为羟基的化合物。结论猪、犬、大鼠、小鼠清除率与人类接近。我们推测柠檬苦素的人肝微粒体酶主要代谢产物是其16位碳羟基化化合物。

大鼠肝微粒体体外代谢多溴联苯醚(PBDEs)类污染物的研究

多溴联苯醚(PBDEs)是一类在工业上被广泛使用的阻燃剂,具有环境持久性、生物可富集性、生物毒害性等持久性有机污染物(POPs)的特点。PBDEs具有众多不同的单体,其在不同生物体内表现出不同的单体组成特征。为了调查主要PBDEs在大鼠(哺乳动物模式生物)中的差异性代谢模式及探究原因,本文研究了大鼠肝微粒体对BDE-47和BDE-99的代谢产物和途径,对其差异性代谢特点进行比较,并就参与反应的酶种类和活性对该现象的原因进行了初步讨论。

肉豆蔻木脂素的体外代谢初步研究

目的:建立诱导的大鼠肝微粒体药物代谢酶体外转化模型,评价肉豆蔻木脂素的体外代谢情况,为规模化制备肉豆蔻木脂素的代谢产物提供方法。方法:将肉豆蔻木脂素与苯巴比妥诱导的大鼠肝微粒体药物代谢酶共温孵,用高效液相色谱法检测肉豆蔻木脂素及其代谢产物。结果:肉豆蔻木脂素在苯巴比妥诱导的大鼠肝微粒体药物代谢酶作用下,可以被代谢,并且发现了7个代谢产物。结论:建立的肝微粒体药物代谢酶模型可靠有效,可用于肉豆蔻中肉豆蔻木脂素的体外代谢研究。

液相色谱-质谱联用技术结合多探针底物法研究人参皂苷Rb1的体外代谢

以奥美拉唑、苯妥英、卡马西平和非那西丁为检测肝药酶细胞色素P450酶(CYP450)亚型的专属探针药物,通过原型药物减少量测定法考察药物体外代谢的变化,评价人参皂苷Rb1对CYP450不同亚型酶的作用.结果表明,P2C9,P2C19和P3A4实验组与对照组差异不显著,P1A2实验组与对照组差异显著,表明人参皂苷Rb1能诱导P1A2亚型酶的活性,促进底物与酶反应,加快底物的代谢,而对P2C9,P2C19和P3A4三个亚型酶有弱的诱导或无诱导作用.根据快速分离液相色谱-质谱联用(RRLC-MS/MS)检测结果推断,人参皂苷Rb1在CYP450酶中的代谢产物可转化为人参皂苷Rb1氧化产物(Rb1+O)及人参皂苷Rd和F2.

用体外代谢数据预测临床上药物体内代谢性相互作用

用体外代谢数据可以预测临床上药物体内代谢的相互作用。本文介绍其中一些重要概念、预测模型、方法及影响预测准确性的因素。

炒莱菔子中萝卜苷、芥子碱硫氰酸盐在肠道菌群体外代谢的研究

目的 研究炒莱菔子中萝卜苷、芥子碱硫氰酸盐的肠道菌群体外代谢。方法 采集健康SD大鼠新鲜粪便,制备肠菌培养液,与炒莱菔子提取液在厌氧环境下共孵育。HPLC法测定萝卜苷、芥子碱硫氰酸盐含量,分析采用InertSuatain AQ-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量1 mL/min;柱温27℃;检测波长225、326 nm。对2种成分的质量浓度与降解时间进行动力学方程拟合。结果 萝卜苷、芥子碱硫氰酸盐在大鼠肠道菌群中均被代谢,12 h时两者降解率分别为80.35%、96.31%,并且其代谢转化均符合非线性动力学。结论 萝卜苷、芥子碱硫氰酸盐在大鼠肠道菌群作用下可发生转化,以后者转化速率更快,推测其肠道菌群代谢产物可能为芥子酸。

钩吻素子在人与小型猪、SD大鼠、恒河猴、比格犬肝微粒体中的体外代谢比较

目的采用超高效液相色谱法(UPLC)研究钩吻素子在肝微粒体的体外代谢,比较其在人与各种实验动物代谢的相似情况,作为体内代谢研究的动物选择和分析的依据。方法建立UPLC法测定条件;通过对孵育时间、肝微粒体蛋白含量和钩吻素子浓度等条件的考察,优化钩吻素子与肝微粒体的反应体系;分析比较钩吻素子在各种属肝微粒体中代谢产物种类、生成量和代谢速率等差异。结果所建立的测定方法灵敏度、分离度高,经方法学考察表明其线性关系、准确度等指标均符合要求。在优化的反应体系下,钩吻素子在人、小型猪、SD大鼠、恒河猴、比格犬肝微粒体的代谢产物分别可检测到2、2、6、6、7种,主要代谢产物(代谢物Ⅴ)相同,占各种属所有代谢物的百分比分别为97.73%、58.09%、89.53%、90.40%和79.06%;其他代谢产物中,除了小型猪的1个(占41.91%)、比格犬的2个(分别占6.69%和7.35%)以外,均在3%以下。钩吻素子在人肝微粒体代谢较慢,且仅代谢22.28%,而在比格犬、恒河猴代谢近50%,代谢速率和代谢率高低顺序为:恒河猴、比格犬、SD大鼠、小型猪、人。结论不同种属肝微粒体对钩吻素子的代谢具有一定的差异,其中小型猪的主要代谢产物构成与人有明显差别,SD大鼠、恒河猴、比格犬的主要代谢产物与人相同,但代谢率和代谢速率以及其他代谢产物的构成方面也有一定的差异。

地非三唑的RP-HPLC法测定及其体外代谢研究

目的 为研究抗早孕新药地非三唑 (DL111 IT)的代谢作用机理和进一步开发利用 ,建立其体外代谢的RP HPLC测定法。方法 以LichrospherODS C1 8为色谱柱 ,甲醇 pH 7 5磷酸盐缓冲液 ( 70∶3 0 )为流动相 ,检测波长 :2 3 5nm ,流速 1 0mL·min- 1 ,地西泮为内标 ,对鼠肝微粒体孵育液中DL111 IT的RP HPLC法进行方法学研究。应用建立的方法对DL111 IT在不同来源的鼠肝微粒体中的体外代谢进行试验。结果 DL111 IT浓度在 1 0 1～ 10 1 0 μg·mL- 1呈良好的线性关系 ,在不同浓度下测得平均绝对回收率和相对回收率分别为 ( 92± 4 ) %和 ( 10 0 3± 1 9) % (n =5 ) ;DL111 IT在鼠肝微粒体中的代谢 ,β 萘黄酮组明显快于其他组。 结论 本法简便、准确 ,可用于DL111

米氮平在鼠肝微粒体中的体外代谢研究

目的:通过不同诱导剂预处理鼠肝,研究米氮平在肝微粒体中的代谢主要受何种酶影响,同时研究米氮平对介导其自身代谢的P450酶亚型是否有影响,为米氮平的临床合理应用提供科学依据。方法:将米氮平与不同诱导剂诱导的鼠肝微粒体进行体外孵育代谢,以乙腈中止反应,样品用25%氨水碱化后以环己烷提取。用RPHPLC测定剩余的米氮平含量,流动相为甲醇水(含10mmol·L-1NH4AC,5mmol·L-1SDS,pH3.5)6238(VV),检测波长为307nm。结果:本文测定方法回收率高,日内和日间精密度均良好,符合生物样本检测要求。苯巴比妥诱导的鼠肝微粒体对米氮平的代谢具有明显的催化作用,利福平也有一定的催化能力,米氮平诱导的鼠肝微粒体与对照组对米氮平的代谢无明显差异。结论:由苯巴比妥诱导的P450酶亚型(主要为细胞色素P4503A4)和利福平诱导的P450酶亚型(主要为细胞色素P4502C92C19,同时也对P4503A4有一定的诱导作用)在米氮平的体外代谢中起着重要作用;而米氮平诱导组对于米氮平代谢无明显影响,预示米氮平对介导其自身代谢的P450酶亚型无明显的诱导或抑制作用。

石菖蒲单体α-细辛醚的诱变性及其体外代谢途径研究

石菖蒲挥发油及单体a-细辛醚有较强的祛痰、镇咳和平喘等功效。石菖蒲水煎剂还有较好的镇静和抗惊厥作用。文献记载,用含β-细辛醚的石菖蒲挥发油混入饲料,喂大鼠59周后,发生十二指肠恶性肿瘤。α-细辛醚是β-细辛醚的异构体,同存于石菖蒲挥发油中,是否亦有潜在危害性,尚未见报道。我们用沙门氏菌突变检测系统对其进行诱变试验,并初步研究了它的体外代谢途径。

线粒体体外代谢热动力学模型及其演化优化研究

导出了线粒体体外代谢的热动力学方程（MTD）；探讨了它和指数模型的关系将演化计算技术引入生物热化学领域，用MTD方程和演化计算技术，对文献报导的八种鱼肝线粒体体外代谢的热动力学参数进行了全局优化．

酮康唑对沙奎那韦体外代谢和药物代谢动力学的影响

目的研究酮康唑对沙奎那韦的体外代谢和药物代谢动力学的影响。方法沙奎那韦分别与氟伏沙明、奎尼丁、胺碘酮、酮康唑在人肝微粒体中共同孵育,观察后者对沙奎那韦体外代谢的影响。另将沙奎那韦与酮康唑同时对Sprague-Dawley大鼠颈动脉注射给药,观察后者对沙奎那韦药代动力学的影响。结果酮康唑对沙奎那韦体外代谢有明显的抑制作用,而氟伏沙明、奎尼丁、胺碘酮对沙奎那韦体外代谢没有明显的抑制作用。酮康唑能改变沙奎那韦的AUC值(由169.68±20.38增加至252.39±50.65mg.m in-1.L-1),CL值(由29.47±7.00下降至19.81±3.05 m l.m in-1.kg-1),T1/2(由1.23±0.30 m in下降至0.89±0.35m in)。结论酮康唑能显著抑制沙奎那韦的体外代谢,同时酮康唑对沙奎那韦的药代动力学参数也有一定影响。

肝微粒体体外代谢在中药生物转化中的应用研究进展

中药生物转化是我国传统中药与现代生物技术的有效融合的产物,而肝微粒体对中药有效成分的体外代谢研究是中药生物转化一个重要领域。肝微粒体对中药有效成分的体外代谢研究对于中药药性改变、疗效提高、降低毒副作用、中药有效成分代谢途径的确定等方面具有一定的指导作用。肝微粒体体外代谢研究为指导临床合理、安全用药、中药的二次开发利用以及新药的研究与开发提供可靠的依据。本文主要针对肝微粒体体外代谢在中药生物转化中的应用研究进展进行综述。

食品包装材料中有害物质双酚A二缩水甘油醚体外代谢研究

目的通过模拟体内代谢,对双酚A二缩水甘油醚(BADGE)的体外基本代谢情况进行研究。方法采用肝微粒体、肝S9 2种体外代谢试剂,通过模拟体内肝脏代谢,对BADGE的代谢行为及其代谢产物进行研究。通过代谢试剂浓度及代谢时间条件的优化,采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)作为检测手段对BADGE的体外代谢产物进行分析确证。结果体外代谢最佳孵化时间为60 min,最佳体外代谢试剂浓度为0.5mg/m L,在肝S9及肝微粒体2种体外代谢试剂的作用下,BADGE发生显著的代谢反应。结论本研究与传统的动物试验相比,节约了时间、精力,对食品包装材料的毒理学研究和安全性评价有重要的推动作用。

HPLC-QTOFMS和MS/MS分析鉴定PF573228肝微粒体体外代谢产物

为研究PF573228的大鼠肝微粒体体外代谢特点,采用高效液相色谱-电喷雾-串联质谱(HPLC-ESI-MS/MS)的方法,结合检测的保留时间、精确质量数和特征碎片离子,鉴定了PF573228体外的3种代谢产物分子的结构,推断体外代谢产物的生物转化有3个主要途径:脱氢,N-脱烷基和氧化.

手性药物体外代谢的研究方法

手性药物体外代谢的研究是通过建立体外代谢模型对手性药物的代谢行为进行评价。随着大量手性药物的开发,出现了多种与体外代谢相关的研究方法和技术来评价对映体之间的分子以及代谢动力学方面的差异,从而选择出对映体。现对已有的一些研究方法及其优缺点进行综述,从而提供更系统化的手性药物的评选方法,更快速有效地为手性药物提供技术支持。

蒙古黄芪中黄酮类成分在大鼠肝微粒体的体外代谢

目的考察蒙古黄芪中黄酮类有效成分在大鼠肝微粒体的降解速度及降解途径。方法将黄芪药材提取液与大鼠肝微粒体进行体外共孵育。采用高效液相色谱法测定三种黄酮类成分毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮及芒柄花素的剩余含量。结果三种黄酮类成分的代谢率分别为22.64%,31.18%和55.42%,一级降解速度常数分别为0.267 h-1(r=0.992),0.386 h-1(r=0.991)和0.826 h-1(r=0.996)。结论三种黄酮类成分经大鼠肝微粒体代谢,呈表观一级线性消除,毛蕊异黄酮苷被水解生成毛蕊异黄酮。