挥发性物质体外致突变定量检测方法的研究

挥发性物质体外致突变定量检测方法的研究周永贵，郁庆平，范玉兰，李兆明，犹学筠（上海市劳动卫生职业病研究所上海２００００３江南造船厂）体外致突变试验已普遍用于化学物安全性的评价，然而挥发性物质体外致突变检测受理化特性限制，无法进行定量。本课题根据气液平...

骨髓源性细胞促进坐骨神经体外预变性实验研究

目的探讨周围神经体外预变性的新方法,以便在短期内获得大量高效雪旺细胞,以期为组织工程神经构建提供大量种子细胞。方法采用转绿色荧光蛋白基因C57BL/6小鼠的骨髓源性细胞(bone marrow derived cells,BMDCs)与C57BL/6小鼠坐骨神经体外共培养,建立体外预变性模型的实验组(A组),无BMDCs参与的单纯坐骨神经体外培养为对照组(B组)。培养7 d后行大体观察及免疫荧光染色观察BMDCs能否在体外进入坐骨神经内参与预变性;将变性后的神经酶消化行雪旺细胞培养,通过细胞免疫荧光染色及流式细胞仪检测各组细胞量及鉴定原代培养后的雪旺细胞纯度,评价各组雪旺细胞增殖情况。结果培养7 d后大体观察示两组坐骨神经断端开始形成神经瘤样结构,A组较B组明显;免疫荧光染色示A组大量BMDCs浸润至神经内部,其中部分细胞表达F4/80,为单核巨噬系统细胞。经细胞培养,A、B组获得的雪旺细胞产量分别为(5.59±0.19)×104个/mg和(3.20±0.21)×104个/mg,差异有统计学意义(t=2.14,P=0.03)。细胞接种后48 h经p75NTR荧光染色鉴定示,两组可见双极或三极样雪旺细胞,细胞核为蓝色且较小,胞体为红色;成纤维细胞呈扁平多角形,细胞核及核仁清晰,大而不透光,多位于雪旺细胞下且p75NTR染色为阴性。A组混杂的成纤维细胞较少,B组较多。A、B组雪旺细胞纯度分别为88.4%±5.8%和76.1%±3.7%,差异有统计学意义(t=2.38,P=0.04)。经流式细胞仪定量分析A组雪旺细胞纯度为89.6%,B组为74.9%。结论 BMDCs与周围神经体外共培养是一种有效获得大量雪旺细胞的方法,为组织工程神经构建中种子细胞的获取提供了新方法。

蝎毒活性肽BmK AS的基因克隆与表达

目的克隆东亚钳蝎活性肽BmKAS的基因,在大肠杆菌中进行表达。方法利用PCR技术从蝎尾cDNA pool中扩增BmKAS基因,通过基因工程方法构建表达载体pET28a-BmKAS,在E.coli中进行表达,表达产物为包含体。采用分步稀释复性法对表达产物进行体外变复性。结果BmKAS以包含体的形式得到表达,表达量的质量约占菌体总蛋白质量的31%。表达产物复性后,通过离子交换柱层析进一步纯化,达到了电泳纯,收率为1.6 mg.L-1。结论首次对具有多种药理活性的蝎毒活性肽BmKAS进行了表达,并对表达产物进行体外变复性研究,获得了毫克级的收率,满足了深入研究需要。