过氧化体增殖物激活型受体激活物对HepG-2细胞PAI-1表达的影响

目的 :观察不同的过氧化体增殖物激活型受体 (peroxisomeproliferator activatedreceptors,PPARs)激活物对HepG 2细胞纤溶酶原激活物抑制剂 1 (plasminogenactivatorinhibitor 1 ,PAI 1 )mRNA表达及其活性的影响 ,探讨过氧化体增殖物激活型受体在PAI 1基因调控中的作用。方法 :分别利用硬脂酸、油酸、亚油酸、非诺贝特、吡格列酮作为诱导因素刺激HepG 2细胞 ,采用半定量RT PCR法检测PAI 1mRNA及PPARsmRNA的转录水平 ,比色法检测PAI 1活性变化 ,Westernblot法检测PPARs蛋白表达情况。结果 :与对照组比较 ,油酸、亚油酸组HepG 2细胞PAI 1mRNA表达及蛋白活性显著增加 ;非诺贝特组HepG 2细胞PAI 1mRNA表达及活性显著降低 ;硬脂酸、吡格列酮组HepG 2细胞PAI 1mRNA表达及蛋白活性均无显著变化 ;各组PPARs在mRNA及蛋白水平均无明显差异。结论 :PPARs激活物对HepG 2细胞PAI 1mRNA表达及其活性具有调节作用 ,PPARα可能是实现该调节作用的重要途径之一 ,同时不排除其他调控因素介入该调节过程。

黄芩苷对肝癌HepG-2细胞的体外抑制作用

目的:探讨黄芩苷对肝癌HepG-2细胞的体外抑制作用。方法:采用MTT比色法观察黄芩苷抑制肝癌HepG-2细胞增殖;采用流式细胞仪检测黄芩苷对HepG-2细胞细周期分布的影响,同时结合倒置显微镜、HE染色、透射电镜观察黄芩苷诱导肝癌HepG-2细胞凋亡的作用。结果:黄芩苷可抑制肝癌HepG-2细胞增殖,其作用具有时间和浓度依赖性;黄芩苷可诱导细胞凋亡,同时改变细胞周期分布,多数细胞阻滞于S期,与对照组比较,细胞凋亡率差异有显著性(P<0.01)。结论:黄芩苷对肝癌HepG-2具有明显的体外抑制作用。

弓形虫侵入相关分子ROP1在HepG-2细胞中的表达

弓形虫棒状体蛋白 1(ROP1)是与虫体侵入相关的重要分子。将含编码 ROP1蛋白基因的真核表达重组质粒 pc DNA3转染 Hep G- 2细胞 ,为进一步研究做准备。用脂质体介导的真核细胞转染法 ,G418筛选阳性克隆 ,SDS-PAGE及 Western- blot分析鉴定表达产物。结果显示 ,在所筛选的克隆化生长的细胞裂解液样品电泳图谱中 ,有一大小约 35～ 40 k Da的特异电泳条带 ,该条带可被弓形虫免疫兔血清识别。本研究建立了体外稳定表达 ROP1的细胞系 。

野西瓜水溶性生物碱的提取以及抑制HepG-2细胞增殖作用的研究

目的：初步探讨了野西瓜中水溶性生物碱的提取方法，并研究了野西瓜中水溶性生物碱通过对肿瘤细胞的各个周期的不同程度的阻滞作用而抑制HepG-2细胞增值。方法：采用MTT实验实验观察野西瓜可溶性生物碱的体外抗肿瘤作用，采用流式细胞仪测定野西瓜可溶性生物碱对肿瘤细胞凋亡及细胞周期的影响．结果：MTT法测定野西瓜可溶性生物碱对HepG-2细胞的存活率，可知野西瓜可溶性生物碱具有体外抗肿瘤作用。

芦笋皂苷诱导HepG-2细胞凋亡途径研究

目的：本文通过芦笋皂苷对体外培养HepG-2细胞的凋亡进行研究，对其凋亡途径进行了初步的揭示。方法与结果：酶标法检测表明，50mg·L-1、100mg·L-1、200mg·L-1的芦笋皂苷分别作用HepG-2细胞24h、48h后Caspase-8和Caspase-3活性均升高，且随着芦笋皂苷浓度的增加而增加。

桂皮酸逆转人肝癌细胞某些恶性表型的研究

目的观察桂皮酸(CINN)对人肝癌细胞(HepG-2)的作用。方法体外培养HepG-2细胞,用CINN处理后,观察细胞形态、细胞集落形成能力、甲胎蛋白分泌量及细胞周期频数分布的变化。结果细胞形态趋向良性分化,集落形成率降低,甲胎蛋白分泌减少,G0/G1期细胞增加而G2+M期细胞减少。结论CINN可使HepG-2细胞某些恶性表型发生逆转。

HBV阳性血清体外感染HepG-2细胞方法建立

目的建立乙型肝炎病毒(HBV)阳性血清体外感染人肝癌细胞系HepG-2的方法。方法低温同步化处理HepG-2细胞后用高浓度HBV阳性血清与含有4%聚乙二醇的无血清伊格尔极限必需培养基(MEM)共孵育HepG-2细胞,设阴性对照组和空白对照组;18 h后加入含10%胎牛血清的MEM继续培养6 d,每隔24 h收集细胞和培养上清,荧光定量PCR检测HBV DNA,间接免疫荧光技术检测细胞内乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)。结果 HBV阳性血清感染组HepG-2细胞内和培养上清中在感染后第1 d可检测到HBV DNA,分别为(16.04±7.99)×103、(8.84±3.97)×103 copies/mL,细胞内DNA含量在第2 d达到(3.51±1.86)×105 copies/mL,然后逐渐下降,在第4 d降到检测下限以下,而培养上清中病毒DNA在检测的时间内逐渐升高,在第6天达到(8.41±5.34)×105 cop-ies/mL;间接免疫荧光检测感染组细胞膜和胞浆中均有HBsAg表达;传代培养感染细胞后,在第1代细胞培养上清和细胞内均可检测到HBV DNA(3.58×105、7.34×105 copies/mL),第2代培养上清中可检测到少量HBV DNA(2.89×103 copies/mL),但细胞内检测到HBV DNA低于检测下限(896 copies/mL),第3代细胞的上清和细胞内均未检测到HBV DNA。结论 HBV阳性血清在一定条件下可以感染HepG-2细胞,病毒能在细胞内进行短期复制。

叉头状转录因子O1与吡格列酮干预对肝癌HepG-2细胞葡萄糖消耗的影响

目的研究叉头状转录因子O1（FoxO1）及吡格列酮干预对高胰岛素诱导的肝癌HepG-2细胞葡萄糖消耗的影响及机制。方法1×10^-6mol／L胰岛素培养HepG．2细胞24h后，诱发培养基葡萄糖消耗减少建立细胞模型，将细胞分为对照组、空白质粒组、FoxOlsiRNA载体组、1×10^-5mol／L吡格列酮组。以普通培养基培养的细胞作为空白对照组。37℃、5％CO2培养箱中孵育24h，葡萄糖氧化酶法检测培养基中葡萄糖含量，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测FoxO1mRNA和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）mRNA表达，Westernblot法检测PPAR-γ蛋白表达。将FoxO1mRNA、PPAR-γ mRNA、PPAR-γ蛋白表达与葡萄糖消耗量进行相关分析和曲线拟合。采用单因素方差分析及多样本均数两两比较进行统计学分析。结果高胰岛素培养24h较未诱导细胞培养基的葡萄糖消耗降低[分别为（1．36±0．03）和（2．93±0．05）mmol／L，P〈0．01]，细胞Fox01mRNA升高（分别为0．513±0．016和0．425±0．011，P〈0．05），PPAR-γmRNA降低（分别为0．260±0．025和0．441±0．012，P〈0．05），PPAR-γ蛋白降低（分别为0．312±0．032和0．600±0．046，P〈0．05）。在抑制FoxO1和吡格列酮干预后此趋势有所缓解，逐渐接近于空白对照组。FoxO1mRNA、PPAR-γ mRNA和PPAR-γ蛋白表达与葡萄糖消耗量高度相关。结论FoxO1表达升高或降低对葡萄糖代谢产生不利影响；增强PPAR-γ表达可有效恢复高胰岛素诱导的高糖，增加肝细胞的胰岛素敏感性。

PPARα激活物影响HepG-2细胞PAI-1表达机制初探

目的 探讨不同的过氧化体增殖物激活型受体α(PPARα)激活物对HepG 2细胞纤溶酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)活性和mRNA表达的影响及其可能的机制。方法 分别以亚油酸和非诺贝特刺激HepG 2细胞 ,检测PAI 1活性和mRNA表达。基因瞬时转染含不同片段缺失的PAI 1启动子序列控制表达的报告基因质粒 ,测定亚油酸和非诺贝特诱导后的转录活性。结果 亚油酸使HepG 2细胞PAI 1mRNA表达及蛋白活性显著增加 ,而非诺贝特使其著降低。转染HepG 2细胞由PAI 1启动子全长控制的表达质粒 ,亚油酸诱导PAI 1转录活性显著增加 ,非诺贝特显著抑制其转录活性 ;转染PAI 1启动子序列核转录因子κB(NF κB)反应元件缺失的质粒时 ,亚油酸和非诺贝特仍显著增加PAI 1转录活性 ;而转染PAI 1启动子序列极低密度脂蛋白 (VLDL) /脂肪酸反应元件缺失的质粒时 ,亚油酸对PAI 1转录活性无诱导作用 ,非诺贝特可下调其转录活性。结论 PPARα可能是亚油酸增强PAI 1表达所涉及的转录因子之一 ;非诺贝特下调PAI 1表达可能涉及对NF κB信号转导途径的抑制作用。

转染肿瘤mRNA的树突状细胞疫苗诱导抗肝癌免疫研究

目的 探讨转染原发性肝癌(HCC)mRNA的树突状细胞(DC)能否诱导抗肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。方法 采用HCC患者外周血单核细胞(PBMC)体外刺激分化为DC细胞;从人肝癌HepG 2细胞和3例HCC患者的肝癌组织中体外扩增mRNA。以mRNA转染DC细胞,并与PBMC混合培养诱导扩增CTL。流式细胞计数仪检测培养细胞中CD3 +、CD4+、CD8+细胞的比例。51Cr释放法测定CTL的杀瘤活性。结果 经扩增人肝癌HepG 2mRNA和2例AFP(+ )患者的AFP(+ )HCCmRNA诱导3周后,CD3 +、CD8+细胞占淋巴细胞总数由诱导前的2 7.8%、2 6.5 %、2 9.6%升高至89.3 %、73 .6%、86.8% ;而经扩增AFP(-)HCCmRNA诱导3周后,CD3 +、CD8+细胞占淋巴细胞总数由诱导前的2 5 .4%升高至5 3 .6%。转染HepG 2细胞和AFP(+ )的患者HCCmRNA的DC诱导的CTL对HepG 2细胞杀瘤活性明显高于AFP(-)的患者,其杀瘤特性由MHC I限制的CD8+T细胞所介导。结论 HCCmRNA体外转染DC能诱导肿瘤特异性CTL 。