不同培养基对小鼠卵母细胞体外成熟质量及发育潜能的影响

背景:近年,未成熟卵母细胞体外成熟技术的需求逐渐增加。卵母细胞成熟受多种因素影响,其中培养基的选择尤为重要,目前尚无统一方案。目的:用不同成熟培养基对生发泡期卵母细胞体外成熟,研究其对卵母细胞质量及发育潜能的影响。方法:用G-1^(TM)PLUS培养基、CZB培养基和M16培养基对生发泡期卵母细胞体外成熟,并以体内成熟卵母细胞为对照组,比较各组间的体外受精和早期胚胎发育能力。对于各组成熟后卵母细胞,采用免疫荧光方法评估线粒体功能,共聚焦显微镜实时成像系统检测钙震荡情况。结果与结论:①3组之间第一极体排出率无明显差异(P>0.05);②G-1^(TM)PLUS组体外受精率(52.86±11.24)%高于M16组(37.76±6.70)%和CZB组(30.62±5.51)%;CZB组的囊胚率(36.23±6.63)%低于对照组(78.16±4.17)%、G-1^(TM)PLUS组(55.75±7.63)%和M16组(53.36±6.33)%;③与对照组相比,仅CZB组的纺锤体长宽比增加;④CZB组线粒体功能差于对照组、G-1^(TM)PLUS组及M16组,并出现CZB组线粒体异常凝集现象;⑤受精后CZB组及M16组的钙震动频率显著高于G1组和对照组。综上所述,在小鼠卵母细胞体外成熟过程中,G-1^(TM)PLUS、CZB及M16培养基的体外成熟率无差异,但G-1^(TM)PLUS培养基有更高的受精率和囊胚形成率。

补充褪黑素的人卵母细胞体外培养成熟技术在COH周期中的应用

目的比较同一控制性超促排卵(COH)治疗周期中,体内成熟与改良技术体外培养成熟(IVM)的卵母细胞的早期胚胎发育能力及临床结局,探讨补充褪黑素的IVM技术在临床中的应用。方法收集159例患者在COH周期中的920个成熟卵母细胞进行常规体外受精(IVF/ICSI)处理,同时收集同周期中1283个未成熟卵母细胞,在添加褪黑素的改良IVM培养基中培养成熟后行ICSI处理。通过回顾性分析,比较常规助孕技术与改良IVM技术这两种方式,对辅助生殖治疗的助孕结局和妊娠结局的影响。结果与从COH周期中收集到的行常规IVF/ICSI处理的成熟卵母细胞相比,经改良IVM技术促成熟的卵母细胞的优质囊胚形成率较低。但经胚胎移植后,两种方式获得的成熟卵母细胞的临床结局包括临床妊娠率、足月产率、婴儿体长、新生儿Apgar评分,差异均无统计学意义。结论IVM可以提高从COH周期中回收的未成熟卵母细胞的卵子利用率,改善辅助生殖技术助孕患者的妊娠结局。

未成熟卵母细胞体外成熟不同培养结局的多因素分析

目的应用多因素分析探讨人未成熟卵母细胞进行体外成熟(IVM)培养后不同培养结局(卵母细胞成熟和D3可利用胚胎)的影响因素。方法收集2020年6月至2023年6月于中山市人民医院生殖中心进行常规助孕治疗、有未成熟卵母细胞剩余患者的临床资料。按照纳排标准共纳入45例患者的207枚未成熟卵母细胞,使用商品化IVM培养液和自配IVM培养液进行IVM培养。培养24 h和48 h后,观察卵母细胞成熟情况。当卵母细胞成熟后,行常规卵胞浆内单精子注射(ICSI)、胚胎培养和胚胎观察,记录D3可用胚胎数。并采用Logistic回归分析不同培养液、女性年龄、不孕因素、体质量指数(BMI)等因素对卵母细胞成熟率和D3可用胚胎率的影响。结果纳入研究的207枚未成熟卵母细胞进行IVM培养后,获得成熟卵母细胞159个,成熟率为76.81%;获得D3可用胚胎73个,D3可用胚胎率为35.27%。不同IVM培养液、女方年龄、促排卵方案、BMI、基础FSH(bFSH)、基础LH(bLH)、FSH/LH比值、抗苗勒管激素(AMH)、不孕年限、不孕类型、不孕因素及未成熟卵状态的卵母细胞成熟率无显著性差异(P>0.05)。使用商品化IVM培养液的D3可用胚胎率为42.86%,显著高于使用自配IVM培养液的27.45%(P<0.05);不同女方年龄、促排卵方案、BMI等因素的D3可用胚胎率无显著性差异(P>0.05)。多因素Logistic回归分析显示,IVM培养液、女方年龄等都不是卵母细胞成熟的独立影响因素;而IVM培养液和女方年龄是D3可用胚胎率的独立影响因素(P<0.05)。结论经HCG刺激的未成熟卵母细胞进行IVM培养时,使用商品化IVM培养液比使用自制培养液可能更有利于后续D3可利用胚胎的形成;且随着女方年龄增加,IVM成熟卵母细胞来源的D3可用胚胎率下降。

猪体外成熟卵母细胞的电激活及其激活后的体外培养

主要研究了猪体外成熟卵母细胞电激活的条件以及孤雌激活胚胎的体外培养体系。用不同场强、脉冲时程和脉冲次数激活猪体外成熟的卵母细胞。结果表明 ,在本试验条件下电激活最佳场强和脉冲时程为 130V·mm-1/ 80 μs ,其囊胚发育率为 (2 0 .12± 8.18) % (P >0 .0 5 )。多次脉冲并不比单次脉冲的激活效果好 (P >0 .0 5 )。孤雌激活胚胎用不同培养方式和气体环境在体外培养 7d ,发现 7d不换液与第 5天换液和第 5天换含 10 %胎牛血清的培养液其囊胚发育率 [分别为 (2 5 .30± 7.5 5 ) %、(2 6 .4 4± 8.35 ) %和 (17.6 8± 5 .39) % ]无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,后两者换液培养方式其囊胚细胞数 (15 .78± 5 .4 6、14 .5 5± 4 .81)明显低于不换液的 (18.0 1± 6 .79,P <0 .0 1)。同时发现低氧 (5 %CO2 ∶7%O2 ∶88%N2 )气体环境培养的胚胎囊胚发育率和囊胚细胞数和高氧环境 (5 %CO2 的空气 )无明显差别 ,分别为 [(2 0 .78± 8.80 ) %、17.0 0± 6 .12和 (2 5 .30± 7.5 5 ) %、18.0 1± 6 .79,P >0 .0 5 ]。表明激活后第 5天换原液和换含胎牛血清的培养液不能提高囊胚细胞数。低氧 (5 %CO2 ∶7%O2 ∶88%N2 )气体环境培养猪胚胎的效果不比高氧环境 (5 %CO2 的空气 )好。

成人外周血来源树突状细胞体外诱导培养及成熟调控

人体内树突状细胞具有成熟和未成熟两种形态。前者是早期免疫应答的强有力的抗原递呈细胞。后者具有截然不同的生物学特性 ,且能诱导免疫耐受。本研究从成人外周血中分离前体细胞 ,利用单核细胞条件性培养液 ,培养出比较均一的未成熟及成熟阶段的树突状细胞。第一阶段 :从外周血分离出能粘附塑料的单核细胞 ,在GM- CSF+IL- 4存在条件下培养 6～ 7d;第二阶段 ,加入单核细胞条件性培养液促进树突状细胞分化成熟。仅经第一阶段培养的细胞主要为未成熟树突状细胞 ,仍然表达单核细胞的表面标志 CD14 ,具有活跃的内化活动 ,其MHC- II分子主要分布在胞内的 MIIC器室 ;经第二阶段培养的树突状细胞则具有成熟树突状细胞的全部特征 :典型的树突状形态 ,悬浮生长 ,MHC- II分子主要分布在胞膜表面 ,表达树突状细胞的特异性标志 CD83,刺激同种 T淋巴细胞增殖的能力强 ,并在脱离特定细胞因子环境 3d后仍能保持该性状不变。由于该途径培养成熟、未成熟树突状细胞完全受外部因素调控 。

猪卵巢卵母细胞的收集和体外成熟培养

对猪卵母细胞的采集和体外成熟培养 (IVM)以及培养液进行了研究。结果表明 ,在卵母细胞的采集过程中 ,机械破碎法平均每个卵巢所获得的A、B级细胞数 (分别为 7.0 0、2 0 .5 0 )显著多于抽吸法 (分别为1.48、2 .73 ) (P <0 .0 5 )。但抽吸法中平均每个卵巢所用的时间 ( 1.0 5min)却显著少于机械破碎法 ( 15 .6min)(P <0 .0 5 )。NCSU 2 3与TCM 199两种培养液对卵母细胞体外成熟率无显著差异 ( P >0 .0 5 )。添加 10 μg/LrpGH比 2 0 μg/LrpGH更有利于卵母细胞的成熟 (分别为 71.5 %、45 .5 % ) ,两者差异显著 ( P <0 .0 5 )

两种未成熟卵母细胞体外成熟培养液的运用效果比较

目的:通过比较自行研配的培养液与商品化培养液在卵母细胞体外成熟中的运用效果,为进一步优化体外成熟培养体系提供依据。方法:分别选择使用自行配制培养液的(IVM-A组)110个周期和使用商品化(IVM-B组)培养液的99个周期,并以同期行ICSI的治疗周期为对照(ICSI-C1和ICSI-C2),比较两组在体外成熟、胚胎发育、胚胎种植、临床妊娠及结局等方面的差异。结果:在两对照ICSI-C1和ICSI-C2各项指标无差异的情况下,IVM-A组体外成熟和胚胎发育等方面均高于IVM-B组,且可移植胚胎率、优质胚胎率明显提高(P<0.05或P<0.01),可移植胚胎率已达到ICSI组水平。虽然表面上IVM-A组在胚胎种植率、妊娠率(临床妊娠率)、活产率等指标低于IVM-B组,但不同阶段的对照组其指标明显改变,ICSI-C2(2006年以后)明显好于ICSI-C1。这种差异可能与近年来的临床治疗方案的改善及宫腔镜的使用有关。值得注意的是,IVM-A的流产率只有10.53%,显著低于其他3组,而同期的对照(ICSI-C1)却明显高于ICSI-C2,提示使用自行配制培养液培养的胚胎可显著降低流产的发生。但由于样本量还不够大,结果尚待进一步验证。结论:自行配制的培养液具有较好的运用效果,可能与其中额外添加的mHFF及E2等有关。但系统尚需进一步优化,以保证其高效、安全、价廉。

小鼠未成熟卵母细胞体外培养

目的 :探讨小鼠未成熟裸卵体外培养 ,获得较高的成熟率和受精率的适宜培养时间和培养条件 .方法 :在培养液中添加不同剂量的人绝经期促性腺激素 (hMG)和卵泡刺激素 (FSH) ,分别培养从未行激素刺激排卵处理的昆明系小白鼠卵巢中获得的未成熟裸卵 ,培养 2 4h和 4 8h后 ,进行体外受精和胚胎培养 .结果 :添加不同激素和培养不同时间对未成熟裸卵的体外成熟无显著性影响 (P >0 0 5) ,但黄体生成素 (LH)的存在对培养 4 8h后成熟卵子的体外受精率有显著性影响 (P <0 0 5) ,并随LH含量的增多 ,影响也越大 .结论 :未成熟裸卵能在体外培养成熟并受精 。

颗粒细胞复合体在卵母细胞体外成熟培养中作用的研究

目的探讨颗粒细胞复合体应用于未成熟卵母细胞体外成熟培养(IVM)中的作用。方法收集2015年1月至2017年6月在我院生殖医学科接受ICSI-ET治疗的156例不育患者促排卵周期中废弃的未成熟卵母细胞为研究对象。共收集MⅠ期和GV期未成熟卵母细胞305枚,以随机方式入组到对照组(C组,培养时不添加颗粒细胞复合体)和实验组(T组,培养时添加颗粒细胞复合体)进行培养,并按照MⅠ期和GV期未成熟卵母细胞的不同分为4个亚组:MⅠ-C组、MⅠ-T组和GV-C组、GV-T组。观察各组的体外成熟及受精后胚胎发育情况等。结果 MⅠ-T组体外培养48h后的总成熟率显著高于MⅠ-C组(88.42%vs.73.62%,P<0.01),体外培养24h的成熟率(80.00%vs.65.93%)、正常受精率(69.74%vs.53.33%)、受精率(75.00%vs.55.00%)及优质胚胎率(35.56%vs.12.00%)均显著高于MⅠ-C组(P<0.05),且MⅠ-T组的卵母细胞利用率亦显著高于MⅠ-C组(21.05%vs.5.00%,P<0.01);MⅠ-T组获得4个囊胚,多于MⅠ-C组(1个囊胚)。GV-T组体外培养48h的总成熟率显著高于GV-C组(65.00%vs.35.59%,P<0.01);GV-T组培养24h的各项指标与GV-C组比较均无显著性差异(P>0.05);GV-T和GV-C两组均未获得囊胚。结论含有颗粒细胞复合体的共培养体系可以提高促排卵周期中不同来源未成熟卵母细胞的体外成熟率,改善MⅠ期成熟卵母细胞的发育潜能,但是否能改善GV期卵母细胞的发育潜能尚需进一步研究。

体外成熟培养20～22h牛卵母细胞激活及孤雌发育的研究

本研究将体外成熟培养 2 0～ 2 2h的牛卵母细胞 ,用Ca2 + 上升因子单一激活或组合Ca2 + 上升因子和蛋白质抑制因子激活 ,其结果单一激活的卵子激活率在 19.2 %～ 2 8.0 % ,复合激活的卵子激活率在 84 .2 %～ 86 .8%。单一激活组的卵子激活率显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,复合激活组的卵子激活率显著高于单一激活组 (P <0 .0 1) ,而单一激活组之间和复合激活组之间无显著差异 (P >0 .0 5 )。复合激活组的卵裂率及孤雌发育都显著高于对照组。

绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养的研究

研究了绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养,并就影响体外成熟的因素进行了探讨.试验表明:添加10 %和15 %的胎牛血清(FCS)绵羊卵巢卵母细胞的体外成熟率(81.25 %和83.75 %)明显高于不添加FCS的对照组的卵母细胞成熟率(65.00 %);在基础培养基中10 %的FCS存在的条件下,添加一定质量分数的促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)时,卵母细胞的体外成熟率明显高于不添加FSH和LH的对照组的绵羊卵母细胞的体外成熟率;培养24 h和26 h卵母细胞体外成熟率(75.00 %和80.00 %)明显高于培养20 h的卵母细胞体外成熟率(63.30 %);从3～6 mm卵泡中抽取的卵母细胞体外成熟率(81.50 %)明显高于从1～3 mm卵泡中抽取的卵母细胞的体外成熟率(53.30 %).

牛卵泡卵母细胞的体外成熟培养

1997- 12～ 2 0 0 1- 0 8共进行了 97批牛卵母细胞体外成熟试验 ,总成熟率为 70 .75 % (35 6 1/ 5 0 33)。其中培养液为 TCM199+0 .12 g/ L 丙酮酸钠 +10 mm ol/ L Hepes+体积分数 8% NCS+10 mg/ L FSH+10 mg/ LL H+1mg/ L E2 (培养液 1组 )组进行 5 0批试验 ,成熟率为 6 5 .75 % (14 15 / 2 15 2 )。培养液 1组有 5批次未添加 Hep-es 盐 ,其成熟率为 75 .2 1% (88/ 117) ;另 4 5批次添加 Hepes盐 ,成熟率为 6 5 .2 1% (132 7/ 2 0 35 )。培养液为TCM199+体积分数 8%发情牛血清 +0 .12 g/ L 丙酮酸 (培养液 2组 )组进行 4 7批次试验 ,成熟率为 74 .4 9%(2 14 6 / 2 881)。培养液 2组中有 9批次添加了 4 0 m g/ L 的庆大霉素 ,其成熟率为 72 .15 % (342 / 4 74 ) ;另 38批次未添加庆大霉素 ,其成熟率为 74 .95 % (180 4 / 2 4 0 7)。试验同时表明 。

前培养对猪卵母细胞生发泡染色质构型和体外成熟的影响

在体外成熟培养时使卵母细胞过早接触高浓度激素可能影响体外成熟卵母细胞的质量。本实验研究了推迟卵母细胞与激素接触时间对卵母细胞GV染色质构型、卵母细胞核成熟质量及极体形态的影响。结果表明 :猪体外成熟卵母细胞的极体形态不同 ,分为完整、退化、碎裂和无极体四种。在不含激素培养液中前培养 12h ,A类卵母细胞的GV 1比例 (48 2 % )明显高于在含激素培养液中前培养 12h卵母细胞 (2 7 1% ) ;而前者的GV 3比例 (19 6 % )却明显低于后者 (5 0 8% ) ;前者成熟卵母细胞的极体完整率 (5 9 6 % )也明显高于后者(2 7 5 % )。这说明推迟卵母细胞与激素接触时间可能提高体外成熟卵母细胞的质量和发育同步水平 [动物学报49(1) :86～ 90 ,2 0 0 3]。

一种简易的促排卵周期挽救性卵子体外成熟培养技术

【目的】探讨人类成熟卵丘细胞在未成熟卵母细胞体外成熟培养中的作用,并建立一种简易的实施技术。【方法】在控制性促排卵周期有未成熟卵母细胞时,将同周期成熟卵丘复合体切出部分卵丘细胞,用1mL注射器抽打分散细胞,贴壁培养。113个治疗周期中,298枚生发泡期卵母细胞经3种不同培养液(A、B、C)体外成熟培养(同一病人的生发泡期卵被随机分到某同一组中):第1组28个周期中73枚(A液):基础培养液+卵泡液;第2组40个周期中115枚(B液):A液+分散贴壁的卵丘细胞;第3组45个周期中110枚(C液):A液+分散贴壁的卵丘细胞+促卵泡生成激素+表皮生长因子。观察其成熟率、受精率及可用胚胎获得率等。【结果】24h成熟率:组间比较有显著性差异(A:45.2%,B:61.7%,C:78.2%,P<0.05);25～48h无显著意义。成熟卵的正常受精率在59%～67%之间,组间比较无显著差异;与第1组(54.5%,11.0%)相比,第2组(83.3%,25.2%)、第3组(90.7%,37.3%)的卵裂率和挽救率均有显著性差异(P<0.05),可用胚胎获得率组间比较依次呈现上升趋势(66.7%,82.9%,83.7%)。【结论】来自控制性促排卵周期的成熟卵丘细胞经简易吹打分散后贴壁培养,可能能协同卵泡液中或外加的生长因子,促进未成熟卵母细胞的体外成熟,而本研究技术简易有效,可用于挽救促排卵周期的未成熟卵。

卵巢保存温度、激素及体外培养时间对延边黄牛卵母细胞体外成熟的影响

本研究探讨卵巢保存温度、激素及体外培养时间对延边黄牛卵母细胞体外成熟的影响。研究结果表明 ,将卵巢分别保存在 2 5～ 2 9℃、30～ 35℃、36～ 4 0℃的生理盐水中运输时 ,卵母细胞体外成熟率分别为 5 5 .3%、70 .1%、6 0 .7% ,各组间无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;当将卵母细胞分别培养在无激素的对照组 (TCM199+10 % FBS)、添加雌二醇 (estradiol) - 17β组、L H +雌二醇 - 17β组时 ,卵子的成熟率分别为 5 7.8%、6 4 .3%、70 .1% ,对照组与 L H+雌二醇 - 17β组差异显著 (P<0 .0 5 ) ;卵母细胞各自培养 2 2～ 2 5 h、2 6～ 30 h、31～ 34h时 ,卵子体外成熟率分别为 5 6 .3%、6 5 .4 %、6 8.4 % ,3组间无显著差异 (P>0 .0 5 )

哺乳动物卵母细胞体外成熟培养的研究进展

卵母细胞体外成熟培养技术是现代生物技术中的重要内容之一。作者就卵母细胞体外成熟的调节机制、成熟过程中的形态学变化、影响成熟的主要因素以及存在的问题等作一综述。

超排卵周期未成熟卵体外培养的研究

目的:研究来源于超排卵周期中的未成熟卵在拆除卵丘细胞后进行体外成熟培养(IVM)的成熟、受精及胚胎发育能力,探讨IVM技术的临床应用。方法:选取46名体外受精/卵胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)患者为研究对象,比较MI和GV期不成熟卵的体外成熟情况,并比较体内成熟卵和体外成熟卵进行ICSI后的正常受精、异常受精、卵裂和优质胚胎形成情况。结果:体外培养中69.8%的MI期卵和77.2%的GV期卵均在24小时内达到成熟,其24小时和48小时的成熟率、总成熟率均无明显差异(P>0.05)。体外成熟卵与体内成熟卵相比较,正常受精率、异常受精率和卵裂率均无明显差异(P>0.05),优质胚胎形成率较低,差异有显著性(P<0.05)。结论:常规超排卵周期中的未成熟卵在拆除卵丘细胞后能够继续体外发育成熟,具有与体内成熟卵相似的ICSI受精、卵裂能力。虽然优质胚胎的形成率低于体内成熟卵,但增加了可移植胚胎和冷冻胚胎数量,提高了助孕成功率。

控制性超排卵和体外成熟培养对卵子线粒体膜电位及细胞骨架的影响

目的:探讨不同促卵子成熟方案对卵子线粒体功能的影响和可能机制,为改善当前辅助生殖周期成功率提供新思路。方法:以小鼠为实验动物模型,模拟人类辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)促卵子成熟的控制性超排卵(COH)和体外成熟培养(IVM)方案,并以自然周期(natural cycle,NC)为对照,采用免疫荧光及化学发光法,检测分析三组卵子线粒体膜电位及卵子细胞骨架。结果:COH组线粒体膜电位显著低于NC组及IVM组(P<0.05);IVM组线粒体膜电位较NC组低,但差异无显著性(P>0.05)。细胞骨架分析显示COH组与IVM组的纺锤体正常率、染色体正常率、纺锤体及染色体均正常率与NC组比较均显著降低(PCOH<0.01,PIVM<0.05)。结论 :COH过程及IVM均会对卵子线粒体功能产生影响。

不成熟卵母细胞的体外成熟培养及玻璃化冷冻

目的比较显微授精治疗周期中剩余的生发泡(GV)期不成熟卵母细胞的体外成熟培养及玻璃化冷冻效率。方法将显微授精(ICSI)周期剩余的GV期卵母细胞随机分为3组:①在GV期玻璃化冷冻,解冻后进行体外成熟培养;②体外成熟培养至MII期后行玻璃化冷冻;③对照组:直接进行体外成熟培养(IVM)。观察体外培养成熟卵母细胞及不同成熟阶段卵母细胞冷冻后的受精和发育潜力。结果对照组的成熟率为71.6%(53/74),其中16枚行显微授精(ICSI),受精率为87.5%(14/16),卵裂率为85.7%(12/14),囊胚形成率为14.3%(1/7);组1与组2的存活率分别为97.5%(39/40)和87.5%(35/40),差异没有显著性;但是组1的成熟率28.2%(11/39)显著低于(P<0.01)对照组的成熟率71.6%(53/74);组2的受精率74.1%(20/27)与对照组的受精率87.5%(14/16)相比,差异没有显著性。结论 ICSI周期剩余的GV期卵母细胞能在体外培养成熟并具有良好的发育潜力,将GV期卵母细胞体外成熟培养至MII期更适合于玻璃化冷冻保存。