卵细胞体外成熟(IVM)在小鼠生物净化中的应用

目的在小鼠生物净化中,从超排后未排卵的卵巢,取卵泡内未成熟卵采用卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)使之在体外成熟并具备受精能力,以提高卵子利用率和作为常规促超排失败的一种补救措施。方法在小鼠生物净化中,取注射PMSG和HCG后未排卵卵巢,在实体显微镜下划破卵泡挑选卵丘卵母细胞复合物(COCs),置于成熟液滴中在体外发育成熟。同时以注射PMSG和HCG后正常超排卵、只注射PMSG后取未成熟卵体外成熟和注射PMSG和HCG后取疑似成熟卵和裸卵体外成熟作为对照。经体外受精、体外胚胎发育后,将2-细胞胚移植到受体输卵管,使其在受体内发育成为成熟的个体。结果注射PMSG和HCG后未排卵组(A组),卵细胞体外成熟率为87.0%±3.2%,二胞率为55.1%±12.3%,囊胚率为23.1%,移植41枚二细胞胚至2只受体鼠,出生5只幼崽,产仔率12.2%。只注射PMSG,48 h后取未成熟卵组(B组),体外成熟率为83.9%±3.9%,二胞率为51.8%±9.3%,囊胚率为38.5%±13.9%。注射PMSG和HCG正常超排组(C组),其二胞率为78.9%±0.6%,囊胚率为78.0%±3.8%。注射PMSG和HCG未排卵卵巢,取裸卵和疑似成熟卵(D组),体外成熟培养0 h,6 h和16~18 h,其成熟率、二胞率和囊胚率与其它三组相比均较低且有极显著性差异。A组和B组与正常对照C组相比,二胞率均有显著性差异,囊胚率均有极显著性差异。结论卵母细胞体外成熟(IVM)可以作为小鼠生物净化中促超排失败的一种补救措施,并且可以提高珍稀品系小鼠的卵子利用率。

激活素-抑制素-卵泡抑素系统对小鼠卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育潜能的影响机制

目的:探讨激活素-抑制素-卵泡抑素(ACT-INH-FS)系统在小鼠生发泡(GV)期卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育中的的影响机制。方法:取小鼠GV期卵母细胞,随机分成8组,A组:100ng/ml激活素A(ACTA);B组:100ng/mlACTA+100ng/ml卵泡抑素(FS);C组:100ng/ml抑制素A(INHA);D组:100ng/mlINHA+100ng/mlFS;E组:100ng/mlACTA+INHA;F组:100ng/mlACTA+100ng/mlINHA+100ng/mlFS;G组:100ng/mlFS;H组(对照组):人输卵管液(HTF)+10%血清蛋白代用品(SPS)。体外培养16-18h后,MⅡ期卵母细胞进行体外受精,观察ACTA-INHA-FS对GV期卵母细胞生发泡破裂(GVBD)、第一极体(PB1)排出及受精率、卵裂率、囊胚形成率的影响。使用MitoTrackerRed荧光探针对A组及E组MⅡ期卵母细胞内活性线粒体数目及分布进行检测。结果:与H组比,A、E、G组GVBD发生率、A、C、E组的MⅡ期卵母细胞发生率和4-细胞、8-细胞及囊胚形成率均显著增加,C组受精率下降,P均<0.05。A、E组卵母细胞内线粒体形态半周型及弥散型比例明显高于H组,整体分布存在显著性差异(P<0.01)。结论:①ACTA、INHA对GV期卵母细胞体外成熟及胚胎发育潜能具有显著的促进作用,并可以被FS所拮抗。②在ACTA/INHA缺乏或不足的条件下,FS可出现ACTA样作用,促进卵母细胞成熟。③ACTA-INHA对体外成熟卵母细胞核质成熟同步化具促进作用。

体外加入hCG不能改善人卵子体外成熟及发育潜能

目的:研究体外培养过程中hCG对人未成熟卵子体外成熟和发育潜能的影响。方法:62例PCOS不孕患者进行了89个未成熟卵子体外成熟培养(IVM)周期,根据体外成熟培养液中有无hCG,将其分为A组(29个周期)采用常规IVM培养液培养;B组(30个周期)先在去除hCG的常规IVM培养液中培养10h,然后改在常规IVM培养液中培养;C组(30个周期)在去除hCG的常规IVM培养液中培养。所有卵子体外培养24-48h,成熟后卵子分批行单精子注射授精(ICSI),培养2-3d后进行胚胎移植。结果:A、B、C组32h、48h卵子体外成熟率分别为46.02%,69.25%;43.72%,64.51%;51.87%,67.51%;组间无显著差异。受精率、卵裂率、临床妊娠率及种植率各组间也均无显著差异(P>0.05)。结论:对于PCOS患者,有无hCG对卵子体外成熟、胚胎发育及临床结局均没有显著影响。

山羊卵母细胞体外成熟和体外受精过程中细胞核迁移的研究进展

山羊卵母细胞体外成熟和体外受精过程中细胞核发生了明显的迁移。本文就该过程中细胞核迁移及其细胞学、分子机理做了简要综述。

不同添加物对昆白小鼠卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

为了进一步探索血清对昆白小鼠卵母细胞体外成熟培养(IVM)的方法,试验用不同血清研究其对卵母细胞体外成熟和孤雌发育的影响。以有3层及以上卵丘卵母细胞复合体(COCs)为研究对象,在基础培养液中分别添加10%胎牛血清(FBS)(1组)、10%人血清(2组)、10%牛卵泡液(BFF)(3组)培养卵母细胞并孤雌激活。结果表明:1组卵母细胞的成熟率最高,且与2组、3组相比差异显著(P<0.05),2组卵母细胞的卵裂率和囊胚率最高,与1组、3组相比差异显著(P<0.05)。说明10%人血清和10%BFF可以作为昆白小鼠卵母细胞体外成熟培养和孤雌胚胎发育的添加物。

不同因素对猪卵母细胞体外成熟培养的影响

本试验旨在探讨不同外源激素组合的添加、胰岛素—转铁蛋白—亚硒酸钠(ITS)的添加、不同培养皿、石蜡油的添加对卵母细胞体外成熟培养(IVM)的影响。结果显示:1孕马血清促性腺激素+人绒毛膜促性腺激素+促卵泡素(PMSG+HCG+FSH)组高于促卵泡素+促黄体素(FSH+LH)组和尿促性腺激素(hMG)组,相互之间差异显著(80.1%、68.3%、53.3%,P<0.05);2添加1%ITS到猪卵母细胞培养液中对卵母细胞成熟率无显著提高(P>0.05),但显著提高了孤雌激活后孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率(63.3%、55.1%,18.7%、12.1%,P<0.05);3凹槽皿组猪卵母细胞成熟率显著高于四孔板和30mm塑料皿组(73.3%、68.0%、68.3%,P<0.05);4石蜡油的添加对卵丘细胞扩展和卵母细胞体外成熟率均有显著提高(84.8%、69.9%,P<0.05)。结果表明培养液中添加PMSG+HCG+FSH和ITS及选用凹槽皿、成熟培养液上覆石蜡油可提高猪卵母细胞IVM效果。

马卵母细胞体外成熟的研究进展

随着全球马产业的发展,马发挥的经济价值越来越大。辅助生殖技术有利于发挥优良马匹的潜在价值。马卵母细胞体外成熟(IVM)是辅助生殖技术重要的组成部分,卵母细胞的获取是体外成熟的前提,切刮法能从离体卵巢中获得较多的马卵母细胞,而活体采卵技术(OPU)则能持续地获得卵母细胞,并能较好的保存马卵母细胞的发育能力。扩张型卵母细胞的成熟率高于紧密型卵母细胞,母马的年龄会影响到其卵母细胞的质量。马卵母细胞体外存放较长时间不会影响其发育能力,现在已有较为成熟的体系能使马卵母细胞在体外保存24 h以上而不影响其成熟率。在马卵母细胞成熟体系中常用的基础培养液是M199,添加胎牛血清(FBS)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)等物质能显著提高成熟率,常用培养环境为38~39℃,5%CO2饱和湿度下培养,培养时间30 h。成熟的卵母细胞有扩张的卵丘细胞和极体,且成熟的卵母细胞的细胞骨架及微管结构也会发生变化。本文针对马卵母细胞的采集和体外成熟培养的相关研究进行总结,重点阐述了不同采集技术的回收率以及影响马卵母细胞体外成熟率的关键因素,以期对今后马卵母细胞体外成熟的进一步研究及后期体外受精技术的发展提供借鉴与参考。

PCOS患者未成熟卵体外成熟培养后妊娠结局分析

目的:探讨PCOS患者未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)治疗的有效性和安全性。方法:分析比较PCOS合并不孕症自愿要求行IVM或IVF治疗的患者临床结局。结果:IVF组的平均优质胚胎数明显高于IVM组(P<0.05),两者的临床妊娠率(39.22%vs 40.32%)和着床率(24.37%vs 23.89%)无差异(P>0.05)。IVM组的妊娠丢失率为38.0%,高于IVF患者(21.1%,P<0.05),出生婴儿(单胎)的平均体质量组间无统计学差异(P>0.05)。结论:对于PCOS患者进行IVM治疗可以获得与IVF周期相类似的临床妊娠率和着床率;但是IVM治疗后流产率明显增加。

人黄体期卵母细胞的体外成熟及玻璃化冷冻的实验研究

目的:探讨未成熟卵母细胞体外成熟(IVM)技术联合玻璃化冷冻保存黄体期卵母细胞对某些女性肿瘤患者的生育能力的保存情况。方法:采集因妇科肿瘤等行卵巢切除手术过程中穿刺获取的256枚未成熟卵母细胞,按取卵时患者的月经周期分为卵泡期组(143枚)与黄体期组(113枚),每组再随即分为新鲜对照组及玻璃化冷冻组。分别进行IVM后行新鲜卵胞质内单精子注射(ICSI)授精和玻璃化冻融卵ICSI授精,比较各组间IVM后MII卵率、受精率、卵裂率、优质胚胎率。结果:①卵泡期与黄体期卵母细胞的IVM率差异无统计学意义;而组间复苏存活率(68.0%vs 48.1%)有统计学差异(P<0.05);卵泡期与黄体期卵母细胞新鲜组间受精率、卵裂率、优质胚胎率无统计学差异,冷冻组间差异亦无统计学意义。②与新鲜组相比,玻璃化冷冻使卵泡期与黄体期卵母细胞的受精率均降低(P<0.01)。结论:黄体期未成熟卵母细胞可以体外成熟并有继续发育为优质胚胎的能力;玻璃化冷冻使卵母细胞受精率、卵裂率下降。IVM和冻融后体外授精是某些女性肿瘤患者保存生育能力的一种有临床应用前景的方式。

低氧培养对未成熟卵体外成熟及胚胎发育潜能的影响

目的:研究辅助生殖技术超促排卵治疗中获得的未成熟卵在低氧培养体系中的发育潜能。方法:卵胞质内单精子显微注射(ICSI)或体外受精-胚胎移植中(IVF-ET)短时受精中挑选出的GV(germinal vesicle)期卵母细胞80枚,MI(metaphase I)期卵母细胞124枚,随机分为实验组和对照组,实验组置于低氧分压(体积分数5%)的三气培养箱中、对照组置于高氧分压(体积分数20%)常规培养箱中进行体外成熟培养(IVM)及随后的囊胚和胚胎培养。IVM后成熟的卵母细胞进行ICSI受精,观察受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:实验组GV期未成熟卵体外培养至MII卵的成熟率、双原核(2PN)率、卵裂率、囊胚形成率及优质囊胚率与对照组无统计学差异(P>0.05)。但实验组MI期卵培养至MII卵的成熟率[96.8%(60/62)]、2PN率[80%(48/60)]、囊胚形成率[43.8%(21/48)]及优质囊胚率[20.8%(10/48)]均高于对照组[分别为58.1%(36/62),52.8%(19/36),11.8%(2/17)和0.0%(0/17)],差异有统计学意义(P<0.05),而2种培养体系的卵裂率无统计学差异。结论:超促排卵中获得的未成熟卵,特别是MI期裸卵在低氧培养体系中进行体外成熟及后续的胚胎培养,有利于获得优质囊胚。

体外成熟卵母细胞体外受精方式的探讨

目的:探讨经体外成熟卵母细胞是否可采用常规IVF方式授精。方法:自愿捐献的常规废弃的未成熟卵母细胞经体外成熟后的卵母细胞206个,随机分为3组:A组(n=69),授精时尽可能保存卵丘细胞并行常规IVF授精;B组(n=68),授精前将卵丘细胞完全拆除后行常规IVF授精;C组(n=69),将卵丘细胞完全拆除后行ICSI授精。常规IVF授精的精/卵个数比约为50 000∶1。比较3组卵子的受精率、卵裂率和优质胚胎率。结果:A组与C组在受精率(82.61%vs 85.51%)、卵裂率(94.74%vs 94.92%)、优质胚胎率(42.59%vs 46.43%)3个方面均无统计学差异(P>0.05),A组、C组的受精率、卵裂率均显著高于B组(14.71%,50.00%)(P<0.01),B组没有优质胚胎出现。结论:体外成熟后的卵母细胞在卵丘细胞较完整时可进行常规IVF方式授精。

抗氧化剂抗坏血酸对小鼠卵母细胞体外成熟和发育的影响

目的：探讨抗氧化剂抗坏血酸（ascorbicacid，AA）对小鼠卵母细胞体外成熟和发育的影响。方法：本实验采用4种不同浓度的AA加入M2基础培养液中，即0mg／L、25mg／L、50mg／L、100mg／L。体外培养小鼠未成熟卵母细胞14---16h，观察各组间卵母细胞体外成熟率、线粒体分布、纺锤体形态和DNA损伤等4个相关指标。结果：当AA浓度为50mg／L时，随着AA浓度的升高，未成熟卵母细胞体外成熟率逐渐升高，但差异无统计学意义（P〉0．05）；而线粒体异常分布比率、异常纺锤体数和DNA损伤卵母细胞数逐渐降低，以50mg／L组最为显著，差异有统计学意义（P〈0．05）；而100mg／L与0mg／L组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：在小鼠体外成熟培养基中添加适宜浓度的AA可提高卵母细胞体外成熟和后期的发育。

食蟹猴体内自然成熟和体外培养成熟的卵母细胞对卵胞质内单精子显微注射(ICSI)结局的影响

目的：探讨食僖猴体内自然成熟和体外培养成熟（IVM）的卵母细胞对卵胞质内单精子显微注射（ICSI）结局的影响。方法：选取有正常月经周期和生育功能的13只健康成熟的雌性食蟹猴，使用优化的促排卵方案进行促排卵后，B超下观察用药后的卵巢情况，手术取卵后对已成熟的MⅡ期卵母细胞进行ICSI，未成熟的GV及MⅠ期卵母细胞在IVM16-38h后发育为MⅡ期卵母细胞，再进行ICSI，观察IVM及体内自然成熟的卵母细胞的受精情况和胚胎发育情况。结果：IVM为76．1％±14．9％，受精率为56．79％，卵裂率为73．91％，优质胚胎率为44．12％；体内自然成熟的卵母细胞受精率为68．52％，卵裂率为94．59％，优质胚胎率为58．57％。在受精率和卵裂率方面，两者间均有统计学差异（P〈0．05和P〈0．01），而优质胚胎率无统计学差异（P〉0.05）。结论：食蟹猴体外培养成熟的卵母细胞对ICSI结局有较大影响。

添加罗格列酮对小鼠卵母细胞氧化还原稳态的影响

【目的】探究在体外成熟培养基中添加罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对小鼠卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响,为体外成熟培养系统的优化提供参考。【方法】通过在体外成熟培养基中添加0、10、20、50、100μmol/L RSG,统计第一极体(PBⅠ)排出率,确定RSG最适浓度。根据RSG最适浓度筛选结果分为对照组和罗格列酮组,通过免疫荧光染色法检测卵母细胞内活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、组织蛋白酶B(CB)、线粒体膜电位水平(MMP)及囊胚内总细胞数(Hoechst 33342)和细胞凋亡比率(TUNNEL);使用实时荧光定量PCR检测囊胚内抗氧化相关基因(Sod-2、Gpx-3和Cat)和凋亡相关基因(Caspase-3、Bcl-2和Bcl-xl)转录水平。【结果】与对照组相比,添加20μmol/L RSG可显著提高小鼠卵母细胞第一极体排出率、卵裂率及囊胚率(P<0.05);卵母细胞内ROS和CB水平均显著降低,GSH和线粒体膜电位水平均显著提高(P<0.05);囊胚内总细胞数显著提高,细胞凋亡比率显著降低(P<0.05);抗氧化相关基因(Sod-2、Gpx-3和Cat)和抗凋亡相关基因(Bcl-2和Bcl-xl)转录水平显著提高,促凋亡基因Caspase-3转录水平显著降低(P<0.05)。【结论】在体外成熟培养基中添加RSG对卵母细胞内氧化还原稳态有积极作用,可改善线粒体功能,提高卵母细胞体外受精后发育能力,并降低卵母细胞内CB水平及囊胚内细胞凋亡的发生。

玻璃化冷冻保存技术对体外成熟卵母细胞发育潜能和转录组的影响

目的探索玻璃化冷冻保存技术对体外成熟(in vitro maturation,IVM)卵母细胞发育潜能和转录组的影响。方法选择2014年9月—2016年3月期间在北京大学第三医院生殖医学中心接受腹腔镜手术联合经阴道穿刺取卵行卵母细胞IVM治疗的不孕症患者为研究对象进行前瞻性队列研究,将研究对象分为IVM组(A组,n=13)和IVM-冻卵组(B组,n=24)。分析卵母细胞的早期胚胎发育状况和单细胞水平的转录组学情况。结果 IVM后玻璃化冷冻-解冻对存活卵母细胞的早期胚胎发育没有明显影响,受精率、卵裂率、优质胚胎率和可移植胚胎率组间差异均无统计学意义。但IVM后行玻璃化冷冻-解冻对转录组存在一定影响,与A组相比,B组共有1 913个基因呈现差异表达,其中570个基因表达量升高,主要富集到59个生物学过程;1 343个基因表达量降低,主要富集到140个生物学过程,而且一些差异基因参与了卵母细胞质量、受精和胚胎发育潜能的调控。结论 IVM后行玻璃化冷冻-解冻对早期胚胎发育没有明显影响,但对转录组具有一定影响,且发生表达量变化的基因与卵母细胞质量、受精和胚胎发育潜能有关,提示玻璃化冷冻-解冻有可能影响子代安全性。

女性霍奇金淋巴瘤患者分别应用卵巢组织冷冻和体外成熟卵子进行卵子冷冻——1例报告

目的探讨女性血液肿瘤患者生育力保存的方法。方法分析1例未婚霍奇金淋巴瘤患者通过卵巢组织冷冻并在体外获得成熟卵母细胞后行卵子冷冻的病例并进行文献复习。结果未婚霍奇金淋巴瘤患者可通过卵母细胞体外成熟(IVM)技术行卵母细胞冷冻,同时结合卵巢组织冷冻技术来尽快完成生育力保存。结论对于急切需要接受抗肿瘤治疗的肿瘤患者,可通过卵母细胞IVM技术在最短的时间内进行卵母细胞或胚胎冷冻,同时结合卵巢组织冷冻技术在最大程度上达到生育力保存的目的。

溶血磷脂酸在卵母细胞体外成熟过程中作用的研究进展

卵母细胞体外成熟(IVM)已成为一项热门的辅助生殖技术(ART),有广泛的应用和发展前景。但其体外成熟率和受精后的发育能力还有待提高,培养条件需要进一步优化。溶血磷脂酸(LPA)是磷脂激素家族的重要成员,有生长因子和激素样活性,可产生广泛的生物学效应。研究表明LPA存在于卵泡液中,对卵泡发育、卵母细胞IVM、受精、胚胎发育、种植等产生重要作用。本文就LPA特性及其在卵母细胞体外成熟过程中的作用做一简要的阐述。

C型利钠尿肽在卵细胞双相体外成熟技术中的应用

卵细胞体外成熟(IVM)技术是指将未成熟的卵丘-卵细胞复合体(COCs)从窦卵泡中取出后,在体外促进卵细胞发育成熟的一种辅助生殖技术。自1991年IVM技术首次应用于人类以来,其发展较为缓慢。近年来,该技术逐渐受到人们重视,并获得了一定的发展。在卵细胞发育过程中,C型利尿钠肽(CNP)能够使卵细胞停滞于减数分裂生发泡(GV)期。利用这个特点,逐渐形成基于CNP的卵细胞双相IVM系统。该技术在多个物种的应用获得了极大的成功。近来,在人类也证实该系统能够大幅提高人类卵细胞IVM的获卵率,以及所获卵的发育潜能。本文将论述CNP的作用原理,以及卵细胞双相IVM技术研究进展。

人未成熟卵母细胞培养体系研究进展

未成熟卵母细胞体外培养成熟(in vitro maturation,IVM)是指将GV期或MI期的卵母细胞在体外培养发育到第二次减数分裂中期(MII期),能够正常发育、受精和着床。人未成熟卵母细胞体外培养成熟(in vitro maturation,IVM)技术已有几十年历史,作为治疗不孕症的新手段,为赠卵以及女性生育力保存提供了新途径。近年随着细胞分子生物科学的迅猛发展,IVM取得了很大进展,向IVM培养系统添加促性腺激素、甾体激素、抗氧化剂、减数分裂抑制剂、生长因子、抑制素/激活素等有助于卵母细胞体外成熟。但仍面临卵母细胞成熟率不高、成熟后体外受精率低、妊娠率低的问题,完善IVM培养系统及相关辅助治疗是IVM的关键,如何获得稳定、有较高成功率的培养体系是亟需解决的问题。现对近几年一些较新的研究发现进行总结,主要从基础培养液、添加成分、培养条件的选择等方面予以综述。