金龙蛇颗粒含药血清对人淋巴管内皮细胞体外成管、迁移及凋亡的影响

目的观察金龙蛇颗粒含药血清(Jinlongshe Granule drug-containing serum,JG-DS)对人淋巴管内皮细胞(human lymphatic endothelial cells,HLECs)体外成管、迁移及凋亡的影响。方法制备JG-DS;将第3代HLECs分为2组:对照组(采用生理盐水血清进行培养)和实验组(采用JG-DS培养)。两组细胞培养12 h后,采用Matrigel基质胶成管实验检测HLECs成管能力;Transwell法检测HLECs迁移能力;采用流式细胞术、Annexin-Ⅴ-FITC/PI双染法检测HLECs凋亡率。结果 10%JG-DS作用12 h后,HLECs小管总长度为(3 084.49±326.27)μm,明显低于对照组的(7 058.93±4 567.39)μm,差异有统计学意义(P<0.01);HLECs迁移指数为(99±26)个,明显低于对照组的(160±32)个,差异有统计学意义(P<0.05)。两组HLECs凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论金龙蛇颗粒对HLECs体外成管及迁移有抑制作用,可能是其抑制肿瘤微淋巴管生成的机制之一。

兔骨髓基质细胞体外成骨分化鉴定及与煅烧骨复合培养的实验研究

目的研究兔骨髓基质细胞体外向成骨细胞分化的生物学特性及其与牛煅烧骨体外复合培养的生物相容性。方法将体外培养1周的兔骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化,于1、2、4周时提取RNA,采用RTPCR技术检测ALP和I型胶原mRNA表达,并对培养2周的细胞行VonKossa染色观察钙结节形成;另制备细胞煅烧骨复合物,继续培养1、7、14d后取出,扫描电镜观察及X射线衍射仪检测。结果体外诱导培养2、4周后,兔骨髓基质细胞成功表达ALT和I型胶原,VonKossa染色可见钙结节形成。扫描电镜及X射线衍射分析证实细胞在煅烧骨表面大量贴附成活,14d后细胞铺满支架表面,合成并分泌胶原纤维及钙盐。结论兔骨髓基质细胞体外可成功向成骨细胞诱导分化,成骨特性表达佳;与牛煅烧骨体外复合培养显示良好的生物相容性。

PRPS2对肺癌细胞体外生长、增殖和体内成瘤的影响及其机制

目的探讨磷酸核糖焦磷酸合成酶2(PRPS2)对肺癌细胞体外生长、增殖和体内成瘤的影响及其机制。方法将体外培养的肺癌A549细胞随机分为对照组、Lenti-sh1组、Lenti-sh2组,分别感染scramble序列慢病毒及能够沉默PRPS2基因表达的慢病毒Lenti-sh1、Lenti-sh2,作用时间均为12 h,结果显示Lenti-sh1组、Lenti-sh2组PRPS2 mRNA及蛋白表达均低于对照组(P均<0.05),说明慢病毒可抑制A549细胞PRPS2基因表达,该分组及处理方法可用于以下研究。采用克隆形成实验检测三组细胞形成的克隆数量,CCK-8法检测细胞增殖能力(吸光度值),流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR法及Western blotting法检测Wnt信号通路中的关键基因β-连环蛋白(β-catenin)、APC、糖原合成酶激酶3β(Gsk-3β)mRNA和蛋白表达。将18只裸鼠随机分成3组,分别接种对照组、Lenti-sh1组、Lenti-sh2组细胞,每组6只;接种6周时剥离瘤体称重,并测量体积。结果 Lenti-sh1组、Lenti-sh2组细胞形成的克隆数量均少于对照组(P均<0.05);培养72、96 h时,Lenti-sh1组、Lenti-sh2组细胞吸光度值均低于同时间点对照组(P均<0.05)。Lenti-sh1组、Lenti-sh2组G_0/G_1期细胞比例均高于对照组,S期、G_2/M期细胞比例均低于对照组(P均<0.05)。Lenti-sh1组、Lenti-sh2组Wnt信号通路中的关键基因β-catenin、APC mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组,Gsk-3βmRNA和蛋白相对表达量均高于对照组(P均<0.05)。接种对照组细胞的裸鼠瘤体质量及体积均大于接种Lenti-sh1组、Lenti-sh2组细胞的裸鼠(P均<0.05)。结论沉默PRPS2基因可抑制肺癌细胞的体外生长、增殖,减弱体内成瘤能力;调控Wnt信号通路可能是其作用机制。

鼻中隔体外成形在歪鼻矫正术中的应用

目的:介绍鼻中隔体外成形在歪鼻畸形矫正术中的应用方法和效果。方法:对26例歪鼻患者行常规的截骨整形术,同时行鼻中隔体外成形术。术中取出鼻中隔软骨,将鼻中隔软骨进行切除、切割等处理后植入原位并缝合固定,矫正歪鼻畸形和鼻中隔偏曲畸形。结果:26例患者中23例治愈,无鼻背塌陷和鼻中隔穿孔发生。结论:鼻中隔软骨体外成形术用于矫正严重歪鼻畸形可以取得满意效果,减少并发症的发生。

人骨髓成骨细胞培养法的改良及其体外成骨能力

目的：探讨简便、易行的人骨髓成骨细胞体外培养方法，研究骨髓基质细胞在体外培养条件下的成骨能力．方法：抽取人骨髓组织，梯度离心后置于含１００ｍＬ／Ｌ小牛血清的ＤＭＥＭ培养液中，培养２４ｈ换液，稳定传代后改用含地塞米松和β－甘油磷酸钠的条件培养液，用倒置显微镜观察、组织化学染色、四环素荧光标记等方法进行观测．结果：传代细胞４ｄ～５ｄ即可传代，在条件培养液中２ｗｋ形成多层结构，并聚集成黑色结节．培养细胞ＡＬＰ染色强阳性，结节四环素荧光标记、钙染色强阳性，Ⅰ型胶原免疫组化染色呈黄褐色．结论：本实验方法所培养的骨髓基质细胞符合成骨细胞的形态特征和生物学特性。

基质细胞衍生因子-1α及其受体对急性肺损伤兔循环内皮祖细胞体外成血管能力的影响

目的 观察基质细胞衍生因子-1α（SDF-1α）及其受体对急性肺损伤兔循环内皮祖细胞血管生成能力的影响.方法 成年新西兰大耳白兔共分5组：正常对照组、急性肺损伤组、急性肺损伤＋SDF-1α治疗组、急性肺损伤＋SDF-1α治疗后＋CXCR4阻断剂组、急性肺损伤＋SDF-1α治疗后＋CXCR7阻断剂组.正常对照组经耳静脉抽取外周血,分离培养EPCs.急性肺损伤兔模型经耳静脉注入油酸量为0.06～0.10 mL/kg;1 h内出现呼吸增快,检测动脉血气血氧分压下降,氧合指数下降到小于300为急性肺损伤.经耳静脉抽取外周血,分离培养EPCs.急性肺损伤＋SDF-1α治疗组急性肺损伤兔经气管切开后雾化吸入100 μg/L SDF-1α 3 mL.经耳静脉抽取外周血,分离培养EPCs.急性肺损伤＋SDF-1α治疗后＋CXCR4阻断剂组急性肺损伤兔经气管切开后雾化吸入100 μg/L SDF-1α 3 mL.经耳静脉抽取外周血,分离培养EPCs,培养细胞给予CXCR4阻断剂10 μg/mL 2 mL共同培养.急性肺损伤＋SDF-1α治疗后＋CXCR7阻断剂组急性肺损伤兔经气管切开后雾化吸入100 μg/L SDF-1α 3 mL.经耳静脉抽取外周血,分离培养EPCs,培养细胞给予CXCR7阻断剂10 μg/mL 2 mL共同培养.采用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,接种在细胞培养板内,培养7 d后对贴壁细胞进行细胞鉴定和体外成血管功能检测.结果 急性肺损伤组体外成血管数目较正常对照组下降,两组差异有统计学意义（P〈0.05）;急性肺损伤＋SDF-1α治疗组体外成血管数目较急性肺损伤组增加,两组差异有统计学意义（P〈0.05）;而急性肺损伤组、急性肺损伤＋SDF-1α治疗后＋CXCR4阻断剂组和急性肺损伤＋SDF-1α治疗后＋CXCR7阻断剂组体外成血管数目虽均减少,但3组两两比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）.结论 急性肺损伤兔循环内皮祖细胞较正常兔循环内皮祖细胞的成血管能力下降;SDF-1α雾化吸入治疗可改善急性肺损伤兔外周血内皮祖细胞的成血管能力;经CXCR4、CXCR7受体阻断后,SDF-1α改善急性肺损伤兔外周血内皮祖细胞成血管能力的作用受到抑制.

膜联蛋白A1在兔骨髓间充质干细胞体外诱导成骨和成脂早期的表达

背景:骨髓间充质干细胞分化过程中膜联蛋白A1表达变化的研究报道各有不同看法。目的:分析兔骨髓间充质干细胞在体外诱导成骨和成脂过程中膜联蛋白A1基因的表达变化。方法:应用全骨髓贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,分别加入含成骨诱导剂、成脂诱导剂及不添加任何诱导剂的培养基进行培养。结果与结论:膜联蛋白A1基因在成骨诱导过程中与未诱导细胞相比有明显下调趋势,差异有显著性意义(P<0.01),而在成脂诱导剂中则为上升(P<0.01)。成骨诱导剂对细胞生长存在抑制作用并增加细胞凋亡(P<0.01),而成脂诱导剂对细胞生长与凋亡作用较小(P>0.05)。因此排除了诱导剂对细胞的作用之后,推测膜联蛋白A1基因可能与骨髓间充质干细胞体外向脂肪细胞分化存在一定关系,但尚不能肯定其在成骨分化中的作用。

小鼠上颌突间充质细胞体内成骨发育和体外诱导成骨分化的比较

目的 :比较体外成骨诱导培养的小鼠胚胎10.5 d(E10.5)的上颌突间充质细胞与体内发育的上颌突间充质细胞的成骨分化差异。方法:体外培养E10.5和E17.5的小鼠上颌突间充质细胞,观察其细胞形态。取体外培养3 d的E10.5原代细胞进行成骨诱导培养7 d,然后应用免疫荧光、qPCR等方法比较其与体外培养3 d的E17.5原代细胞的成骨分化差异。采用SPSS 20.0软件包对数据进行成组样本t检验。结果:E10.5和E17.5的小鼠上颌突细胞在体外呈贴壁生长,细胞呈多边形、椭圆形。E17.5的小鼠上颌突原代间充质细胞在体外培养时,增殖速度较E10.5的小鼠上颌突细胞快。E10.5的小鼠上颌突间充质细胞成骨诱导7 d后,成骨标志物Runx2和OCN的蛋白表达与未成骨诱导的E17.5上颌突间充质细胞表达相似,成骨标志物Runx2、OCN和OPN的mRNA表达和未成骨诱导的E17.5上颌突细胞表达相似。成骨诱导培养14 d的E10.5的小鼠上颌突细胞与成骨诱导7 d的E17.5上颌突细胞形成的钙结节无显著差异。结论:E10.5的小鼠上颌突间充质细胞体外成骨诱导培养,能较好模拟上颌突细胞体内成骨发育过程,为研究颌骨发育提供了合适的细胞模型。

骨髓CFU-F体内、体外成骨功能研究

目的：研究骨髓基质成纤维细胞与成骨的关系，为临床应用奠定基础。方法：采用Ｌｉｕｒｉａ多器官培养器体外器官培养法、肾被膜下移植技术以及石蜡切片技术、Ｇｏｍｏｒｉ染色和Ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ染色技术。结果：移植物在肾被膜下形成软骨细胞团及骨基质；在β－ＧＰ存在下，骨髓基质ＣＦＵ－Ｆ体外培养可见形成钙化的骨板。结论：骨髓基质ＣＦＵ－Ｆ为基质多能干细胞，能增生分化为成骨以及造血诱导微环境所必需的各种基质细胞系。

胎牛血清对人内皮细胞HMEC-1体外成血管实验影响的观察

目的:观察胎牛血清对人内皮细胞HMEC-1体外成血管实验的影响。方法:人内皮细胞HMEC-1采用相同的培养条件处理后,随机分为无胎牛血清组和胎牛血清组,分别采用无胎牛血清培养基和含胎牛血清培养基(含5%胎牛血清)接种于成血管基质胶,培养6h后用倒置相差显微镜观察不同处理组内皮细胞血管管腔形成情况。结果:无胎牛血清组的血管管腔数明显多于胎牛血清组(P<0.05)。结论:提示在体外成血管实验中无胎牛血清的条件有利于内皮细胞毛细血管样结构的形成。

不同血清浓度及介质对体外培养小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线和细胞形态的影响

目的:通过探讨不同血清浓度及介质对体外培养小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线和细胞形态的影响,了解它们对成纤维细胞体外生存和生长的情况。方法:采用体外细胞培养技术进行小鼠成纤维细胞L929细胞,并采用磺基罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)酶标仪法(A490nm波长下)测量各孔的吸光值(A值)并转换为小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线;同时,分别采用HE(苏木精-伊红)染色法、吖啶橙荧光染色和Hoechst33342荧光染色法进行小鼠成纤维细胞L929细胞系形态学观察。结果:小鼠成纤维细胞l929细胞系不同浓度的血清分别在3种不同的介质(RPMI1640培养基、0.9%生理盐水和5%葡萄糖生理盐水)中表现出不同的生长和生存情况及细胞形态学改变。其中,在不同血清浓度(0%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%)的同一介质中,血清浓度为0%和100%浓度组的小鼠成纤维细胞L929细胞生长明昆抑制及吸发光度(A)值呈逐步减少的趋势,而除此之外的其它血清浓度组对小鼠成纤维细胞L929细胞的影响,基本表现为随着血清浓度的升高,吸光度(A)值呈逐步增加及促进细胞生长的趋势。而某些相同血清浓度在不同介质中对小鼠成纤维细胞L929细胞系生长和生存及形态学的有利影响,则基本表现为RPMI1640培养基作为介质的细胞培养效果优于0.9%生理盐水,而0.9%生理盐水作为介质的细胞培养效果又优于5%葡萄糖生理盐水。结论:不同血清浓度及介质对体外培养小鼠成纤维细胞L929细胞系生长和生存及细胞学形态均有明显影响。提示在进行体外细胞培养时应充分考虑细胞培养介质及所添加血清的浓度。

结肠小袋纤毛虫滋养体体外成囊条件的筛选和优化

目的筛选和优化结肠小袋纤毛虫滋养体体外形成包囊的条件。方法设定不同动物粪便、孵育液、pH值、Ca^2+浓度、温度、静置和振荡培养等不同条件,孵育24 h观察其成囊情况。另外,用体外形成的包囊接种给仔猪,验证其感染性。结果滋养体在新鲜的正常猪粪便和鸡粪便中,于37℃、28℃、15℃~20℃和-11℃^-2℃环境下,均没观察到包囊形成;在不含小牛血清和淀粉的蒸馏水、生理盐水、PBS溶液以及DMEM培养基中孵育,镜检发现在生理盐水(pH6.5)和PBS中存在大量滋养体和少量早期包囊出现;在pH值3~5之间的生理盐水中包囊的形成的数量明显增加,28℃环境下平均成囊率达到38.9%,相同pH值范围的蒸馏水却没发现包囊和滋养体。Ca2+浓度、温度、振荡和静置培养等因素对其体外成囊效果均没有明显影响。两头仔猪接种包囊后第4 d,均在粪便中检出该虫滋养体。结论在15℃~28℃,pH值3~5的不含小牛血清和淀粉的生理盐水中是结肠小袋纤毛虫体外成囊的适宜条件。

体外成形多柱状骨水泥填充物应用诱导膜技术在骨缺损中的治疗效果

目的探讨体外成形多柱状骨水泥填充物应用诱导膜技术在骨缺损治疗中的治疗效果。方法诱导膜技术第一阶段手术行彻底扩创和骨固定后,根据骨缺损的大小,在体外制作相应大小的多个柱状结构骨水泥填充物,凝固、冷却后置入骨缺损部位,骨感染者使用抗生素骨水泥;第2阶段手术切开诱导膜取出填充物后植骨。按上述方法治疗16例骨缺损长度2.0～9.0 cm（平均6.1 cm）患者,其中骨感染11例。骨缺损愈合分级和邻近关节功能恢复分级分别按Paley方法评价。结果除1例骨感染第一阶段需要2次扩创控制感染外,其余患者均一次扩创控制感染;第2阶段植骨术后患者获13～50个月（平均16.3个月）随访,骨缺损均骨愈合,临床愈合时间4.0～5.0个月（平均4.5个月）,无感染或感染复发,均恢复负重功能,骨缺损愈合分级均为优,末次随访,邻近关节功能恢复优5例、良9例、可2例。结论体外成形多柱状骨水泥填充物应用诱导膜技术治疗骨缺损,由于填充物的表面积较大,便于行髓腔灌洗,抗生素释放率较高,故控制骨感染的效果较好;同时,填充物容易取出,不会破坏诱导膜,所以成骨修复骨缺损效果也较好。

薯蓣皂苷元体内外抑制胃癌增殖的机制

目的:研究薯蓣皂苷元抑制胃癌增殖及转移的主要途径及其机制。方法:分别使用1,10,100μg/mL浓度薯蓣皂苷元处理人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)和胃癌BGC-823细胞,制作细胞生长曲线,观察薯蓣皂苷元对细胞增殖能力的影响;选取一定浓度的薯蓣皂苷元处理HUVEC和BGC-823细胞,体外成管实验和划线法分别检测药物处理对血管内皮细胞成管能力及肿瘤细胞迁移能力的影响。将BGC-823细胞接种到裸鼠制作皮下肿瘤模型,连续静脉注射薯蓣皂苷元,分析比较其对皮下肿瘤的抑制效果。结果:与对照组比较,薯蓣皂苷元可明显抑制内皮细胞增殖活性(P<0.05),且具有浓度依赖性;而相同处理方式对BGC-823细胞的增殖活性基本无影响;10μg/mL的薯蓣皂苷元对BGC-823细胞的迁移能力具有明显的抑制作用,能够明显抑制HUVEC细胞体外成管能力;与模型组比较,薯蓣皂苷元给药组肿瘤抑制率明显增高(达38.2%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:薯蓣皂苷元可以通过抑制内皮细胞增殖活性影响肿瘤血供,并最终抑制皮下肿瘤模型的增殖,同时,其可通过直接的作用抑制胃癌的迁移。

机械应力对拇外翻足截骨端成纤维细胞外泌体的调控机制

背景:微创治疗拇外翻术后“裹帘”外固定(通过趾蹼间夹垫“8”字绷带弹性外固定实现),为截骨端愈合提供适宜的力学环境。可见应力刺激对截骨端愈合至关重要,但其机制尚未明确。目的:探索机械应力对成纤维细胞来源外泌体的调控机制。方法:取拇外翻手术取得的第1跖骨头内侧骨组织,采用组织直接贴壁培养的方法进行成纤维细胞体外培养获取传代细胞,模拟拇外翻患者术后“8”字绷带包扎法截骨端所受力学刺激,提取外泌体。利用电镜、纳米粒径追踪分析、Western blot检测外泌体大小分布、形态及外泌体标志物的差异。研究方案于2013-03-21经中国中医科学院望京医院伦理委员会批准,批准编号为2013-03-21。结果与结论:拇外翻足截骨块培养的成纤维细胞加载15%的静态拉伸作用后,分泌的外泌体增加,且外泌体中均存在CD9和CD81。2组外泌体的粒径分布范围相符,且15%的静态拉伸作用使得外泌体的浓度增高。说明15%的拉伸力有助于成纤维细胞分泌生长因子,进而有助于促进成骨细胞成骨。

骨髓基质干细胞诱导内皮细胞与自体骨髓基质干细胞低氧条件下培养后的成骨能力

目的:探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)诱导内皮细胞(ECs)与自体BMSCs低氧条件下联合培养对BMSCs成骨能力的影响。方法:体外分离培养兔BMSCs并向ECs诱导培养,用CD34免疫细胞化学染色鉴定内皮细胞表型;实验分组为BMSCs常氧成骨诱导培养组,BMSCs低氧成骨诱导培养组,BMSCs+ECs常氧成骨诱导联合培养组,BMSCs+ECs低氧成骨诱导联合培养组,持续培养7d,前6d应用PNPP法每天固定时间测定碱性磷酸酶(ALP)活性并作统计学分析;茜素红染色观察第7d矿化结节形成情况。低氧组为1.0%O2浓度。采用SPSS11.0软件包对数据进行方差分析和q检验。结果:BMSCs在一定诱导条件下可诱导为ECs,CD34免疫细胞化学染色为阳性;统计学分析表明,BMSCs+ECs低氧成骨诱导联合培养组的ALP活性表达显著高于其他3组(P<0.05)。只有BMSCs+ECs低氧成骨诱导联合培养组有钙化结节形成,茜素红染色呈橘红色。结论:在一定时间内,由BMSCs诱导来源的ECs与自体BM-SCs低氧条件下联合培养,BMSCs的成骨活性可显著提高。

Smads及其相关转录因子与骨形态发生蛋白诱导成骨的信号传导

目的 综述有关骨形态发生蛋白 (BMPs)诱导成骨的信号传导机制 ,深入了解 BMPs基础及应用研究的理论依据。 方法 查阅近期相关文献 ,了解 BMPs相关蛋白 (Smads)及其相关转录因子在 BMPs诱导成骨的信号传导中的作用。 结果 BMPs的信号传导过程是 :BMPs首先与 型受体和 型受体结合 , 型受体磷酸化 Smads,Smads进入核内与转录因子相互作用影响相关蛋白的转录。Smads可分为受体调节 Smads(R- Smads:Smad1、2、3、5、8和9)、共同介导者 Smad(Co- Smad:Smad4 )和抑制性 Smads(I- Smads:Smad6、7)。 Smad1、Smad5和 Smad8,可能还有Smad9涉及 BMPs的信号传导。多种激酶如局部粘连激酶 (FAK)、Ras-细胞外信号调节激酶 (ERK)、磷脂酰肌醇 3激酶(PI3K)和 Akt丝 /苏氨酸激酶与 Smads的信号传导有关。与 Smad1和 Smad5相关的转录因子有核心结合蛋白 A1(CB-FA1)、Smad相互作用蛋白 1(SIP1)、鸟氨酸脱羧酶拮抗酶 (OAZ)、激活蛋白 - 1(AP- 1)、蟾蜍腹侧形成同源框蛋白 - 2(Xvent- 2 )、生长抑素 (Ski)、抗增殖蛋白 (Tob)、同源结构域转录因子 - 8(Hoxc- 8)等。CBFA1与转化生长因子 - β和 BMP- 2信号传导有关 ,能与 Smad1、2、3、5相互作用 ,在骨形成中起重要作用。锁骨、颅骨发育不良被认为是

转化生长因子β1基因转染骨髓基质细胞的体外成骨研究

目的 探讨转化生长因子 β1(TGF - β1) 基因转染骨髓基质细胞 (BMSCs)的体外成骨能力。 方法 取新西兰白兔 2 0只 ,自双侧股骨大转子取材培养BMSCs,左侧来源细胞定为实验组 ,右侧为对照组。以脂质体介导TGF - β1基因转染BMSCs后 ,观察细胞的形态学特征 ,以四唑盐(MTT)法检测TGF - β1转染对细胞增殖的影响。此外 ,通过碱性磷酸酶 (ALP)染色及对硝基苯磷酸盐 (PNP)法检测ALP活性 ;免疫组化法检测Ⅰ型胶原表达 ;四环素荧光标记检测钙结节形成能力。结果TGF - β1基因转染BMSCs后 ,转染细胞具有成骨细胞的结构特征和生物学特性 ,且细胞增殖能力加强。转染细胞ALP染色及Ⅰ型胶原免疫组化染色均呈强阳性 ,定量分析显示TGF - β1转染组细胞上清孵育的BMSCs的ALP活性为 (3.5 1± 0 .12 )U/ml,空载体转染组为 (1.72± 0 .0 8)U/ml,空白对照组为 (1.6 7± 0 .11)U/ml。Ⅰ型胶原表达的免疫组化阳性指数瞬时表达组为 0 .16 7± 0 .0 0 1,而对照组为 0 .0 4 3± 0 .0 0 1。转染细胞 12d形成钙结节 (对照组为 18d) ,数量亦显著增加。 结论 TGF - β1基因转染可促进BMSCs的体外成骨能力。

人脐带间充质干细胞体外成骨分化对骨折局部BMP-2表达的影响

[目的]探讨体外不同程度诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)成骨分化对大鼠股骨骨折局部骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)表达的影响。[方法](1)选用120只成年Wistar大鼠制作股骨不全骨折模型,随机分为A、B、C、D、E、F六组;(2)利用组织块贴壁法分离培养h UC-MSCs,流式细胞仪鉴定细胞表面抗原,给予体外成骨分化诱导,采用茜素红S染色鉴定,将未诱导和诱导3、7、11、15 d的h UC-MSCs分别注入A、B、C、D、E组实验动物骨折处,F组注射生理盐水作为空白对照组,于移植后1、2、3、4周分别切取标本,采用免疫组化显示BMP-2并行统计学分析。同时检测实验大鼠血常规。[结果]h UC-MSCs成骨诱导3周时细胞内出现大量钙结节。细胞移植各组BMP-2表达在第1、2、3、4周时均明显强于空白对照组。A、B、C、D、E各组BMP-2表达在第1周和第4周时没有显著性差异,在第2、3周时B、C两组显著强于A、D、E三组。BMP-2表达在第2周时出现最高峰,之后下降,在第4周时仅少量表达。六组之间血常规差异无统计学意义。[结论]h UC-MSCs具有较好的免疫相容性,移植前体外诱导h UCMSCs成骨分化能提高骨折愈合早期BMP-2的表达,诱导3、7 d效果最佳。